柑橘幼果功能成分提取分析及抗氧化活性研究.pdf

1、本試驗選取柚類:胡柚;寬皮橘類:早熟溫州蜜柑宮川，中晚熟溫州蜜柑山田、甌柑、椪柑;甜橙類:甜橙的幼果為原料，在五個不同生長時期采樣（時間為5月17日,5月27日，6月16日，7月6日，7月16日），測定功能成分及抗氧化活性規(guī)律變化，目的是為柑橘資源的充分利用提供理論參考。主要結(jié)論如下:
　　(1)響應(yīng)面法優(yōu)化椪柑幼果中辛弗林的超聲波輔助提取工藝，采用超聲波輔助提取對椪柑幼果中辛弗林的提取工藝進行研究。在單因素試驗基礎(chǔ)上，選擇影響提

2、取效果的甲醇體積分?jǐn)?shù)、超聲提取溫度、超聲時間和液料比四個關(guān)鍵因素，以辛弗林得率為響應(yīng)值，根據(jù)中心組合(Central Composite Design)實驗設(shè)計原理采用四因素五水平試驗方案，模擬得到辛弗林得率的二次多項式回歸方程的預(yù)測模型，確定超聲輔助提取椪柑幼果中的辛弗林最佳條件為:甲醇體積分?jǐn)?shù)為70.46％，超聲提取溫度為34.45℃，超聲時間為45min，液料比為24.84mL/g，該條件下椪柑幼果中辛弗林得率的預(yù)測值為10.88

3、mg/g DW，實驗測定值達到10.85mg/g DW，與回歸方程的理論預(yù)測值相吻合。
　　(2)應(yīng)用微波輔助提取椪柑幼果中的總黃酮。研究微波功率、乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波時間及液固比四個單因素對于總黃酮提取量的影響，并利用正交試驗設(shè)計對總黃酮的提取工藝參數(shù)進行優(yōu)化.結(jié)果表明:在微波功率616W，乙醇體積分?jǐn)?shù)50％，微波時間40s，液固比30mL/g的提取條件下，重復(fù)三次試驗，椪柑幼果中總黃酮的平均提取量達到24.9452mg RT/g

4、 DW。各因素對提取量的影響主次順序依次為乙醇體積分?jǐn)?shù)＞液固比＞微波時間＞微波功率。微波提取椪柑幼果總黃酮能夠有效縮短提取時間，操作簡便等優(yōu)點。
　　(3)不同生長期不同柑橘品種功能活性成分含量測定分析，包括7種酚酸、17種黃酮、辛弗林、總黃酮及總酚含量，探討其在不同品種在不同的生長期的變化特點。采用高效液相色譜測定了柑橘幼果中的7種酚酸，包括三種苯甲酸型:原兒茶酸、對羥基苯甲酸和香草酸;四種肉桂酸型酚酸:咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸

5、和芥子酸?？傮w來看，肉桂酸型酚酸含量總和是苯甲酸型酚酸含量總和的11.27倍。肉桂酸型酚酸含量最高的是阿魏酸，苯甲酸型酚酸平均含量最高的是對羥基苯甲酸。七種酚酸的平均含量從高到低依次為:阿魏酸＞對香豆酸＞咖啡酸＞對羥基苯甲酸＞香草酸＞芥子酸＞原兒茶酸，阿魏酸的平均含量為3144.23μg/g DW，原兒茶酸的平均含量為15.59μg/g DW。柑橘幼果在不同生長期的酚酸含量差異較大。隨著生長期的延長，同種柑橘幼果中原兒茶酸、咖啡酸和芥子

6、酸含量總體呈上升趨勢，對羥基苯甲酸、香草酸和阿魏酸含量總體是先增加后減少。同一采收期，七種酚酸含量總和的順序由高到低，依次為甌柑＞椪柑＞早熟溫州蜜柑宮川＞中晚熟溫州蜜柑山田＞甜橙＞胡柚。
　　所有柑橘幼果10種黃烷酮含量總和高于7種黃酮含量總和，其中，新橙皮苷的含量最高，新橙皮苷含量最高的是甌柑幼果，變異幅度為150.09-316.56mg/g DW。其次是柚皮苷、蕓香柚皮苷和橙皮苷，總和分別為472.32mg/g DW、308.

7、61mg/g DW、258.32mg/g DW。所有柑橘幼果中柚皮素的含量總和是10種黃烷酮含量最低的，為0.46mg/g DW。17種黃酮總和的含量最高的是甌柑和胡柚，隨著生長期的延長，總體均呈下降趨勢，5次采收的甌柑中的黃酮總和從358.38mg/g DW下降至203.68mg/g DW，胡柚的黃酮總和從268.80 mg/g DW下降至85.27mg/gDW。由此可知甌柑和胡柚在6月16日之前的幼果可以作為黃酮提取的較好來源。

8、r>　　5個采收期的柑橘幼果辛弗林平均含量由高到低依次為:椪柑＞甌柑＞中晚熟溫州蜜柑山田＞早熟溫州蜜柑宮川＞甜橙＞胡柚，其中椪柑和胡柚中辛弗林的平均含量為21.93mg/g DW、0.52mg/g DW。隨著生長期的延長，柑橘幼果中辛弗林含量均呈現(xiàn)下降趨勢。以采收期為維度，同一柑橘品種中總黃酮和總酚的含量均隨生長期的延長呈先增加后減少。以柑橘品種為維度，5次采收期的總黃酮平均含量由高到低依次為甌柑＞胡柚＞椪柑＞中晚熟溫州蜜柑山田＞早熟溫

9、州蜜柑宮川＞甜橙，平均含量分別為41.25、34.28、30.59、26.84、22.96、22.61mg蘆丁/DW，總酚平均含量由低到高依次為甌柑＞胡柚＞甜橙＞中晚熟溫州蜜柑山田＞椪柑＞早熟溫州蜜柑宮川，平均含量分別為101.01、80.73、46.82、43.39、39.91、7.13mg GAE/g DW。
　　(4)采用四種評價方法，分別是:ABTS自由基清除效果，DPPH自由基清除效果，F(xiàn)RAP鐵離子還原力，ORAC氧自

10、由基吸收能力評價所有柑橘幼果的抗氧化能力，并對幼果抗氧化能力和活性成分含量進行相關(guān)性分析。四種體系所有柑橘幼果的平均TEAC值由高到低依次為:ORAC法＞ABTS法＞FRAP法＞DPPH法。用APC指數(shù)（Antioxidant potency composite index）進行柑橘幼果抗氧化活性綜合評價。按照柑橘品種進行分析，抗氧化活性綜合指數(shù)甌柑＞胡柚＞甜橙＞椪柑＞中晚熟溫州蜜柑山田＞早熟溫州蜜柑宮川，依次為69.66、49.28、

11、46.72、25.12、23.34、21.55，說明甌柑幼果的平均抗氧化活性高于其他柑橘幼果。隨著生長期的延長，柑橘幼果的抗氧化活性綜合評價指數(shù)的變化趨勢和ABTS體系評價得到的TEAC值的變化趨勢相同，除了胡柚幼果呈下降趨勢，其余柑橘幼果抗氧化能力呈現(xiàn)先逐漸上升，在5月57日或者6月16日達到最高值后開始下降。
　　柑橘幼果提取液中總酚、總黃酮含量與ABTS、DPPH、FRAP三種抗氧化方法測定的抗氧化能力之間均呈正相關(guān)性，且相