hla衍生肽對大鼠脾細胞增殖功能及ho-1活性的影響

1、 第 2 6 卷第 4 期 3 1 42 0 0 4年 2月第 三 軍 醫(yī) 大 學 學 報 A C T AA C AD E MI AEME D I C I N A EMI HT A R I ST E R r r I AEV o 1 ．2 6。N o ．4F e b． 2 O o 4㈠ ㈡H L A衍生肽對大鼠脾細胞增殖功能及 H O ． 1 活性的影響 文章編號： 1 0 0 0 — 5 4 0 4 ( 2 0 0 4 ) 0 4

2、— 0 3 1 4 ． 0 3易善紅 ， 宋 波 ， 汪澤厚。 ， 張艮甫， 崔志剛( 第三軍醫(yī)大學：新橋醫(yī)院泌尿外科， 全軍腎臟病中心， 重慶4 0 0 0 3 7 ， ! 西南 醫(yī)院全軍泌尿外科 中心 ， 重 慶 4 0 0 0 3 8 ； 。 空軍總 醫(yī)院泌尿外科 ， 北京 1 0 0 0 3 6 ；總裝備部醫(yī)院泌尿外科 ， j E 京 1 0 0 0 4 2 )提 要 ： 目的 觀察一種新型組織相容性 白細胞抗原 ( h i

3、 s t o c o m p a t i b i l i t yl e u k o c y t ea n t i g e n ， H L A ) 衍 生肽 ( R D P 1 2 5 8 ) 的免 疫抑制功能并探討其機制 。方法 人工 固相合成一種 H L A 衍生肽( R D P 1 2 5 8 ) ， 用 H ． T d R法 觀察其在體外對大 鼠脾細胞 增殖反應 的影 響， 以酶化學法觀察其對脾細胞血紅素氧合酶． 1 ( h e

4、 i n eo x y g e n a s e 一 1 ， H O ． 1 ) 活性 的影 響。結(jié)果 R D P 1 2 5 8 可顯著 抑制淋巴細胞轉(zhuǎn)化及 M L R的增殖 反應 ； 該肽體外降低 H O活性呈現(xiàn)出劑量依賴性 。結(jié)論 R D P 1 2 5 8 能夠 顯著抑制大 鼠脾細胞經(jīng)絲裂原或 同種抗原刺激引起 的增殖反應 ， 這種作用可能是通過影響 H O ． 1 活性而達到的。關鍵詞 ： H I A 衍生肽 ； 混合淋巴細胞培

5、養(yǎng) ； 血紅素氧化酶一 1中圖法分類號 ： 0 5 1 6 ； R 3 2 2 ． 2 1 ； R 3 2 9 ． 2文獻標識碼 ： AEf e c t so fHL A· d e r i v e dp e p t i d eo np r o l i f e r a t i o na n dh e meo x y g e n a s e · 1a c t i v i t yo fr a ts o l e e nc e

6、 l l sY IS h a hh o n g， S O N GB J， WA N GZ e — h o u， Z H A N GG e n — f u， C U IZ h i — g a I( 。 R e n a lD i s e a s e sR e s e a r c hC e n t e r ， D e p a r t m e n to fU r i ．n a i yS u r g e r y，X i n q i a oHo s

7、 p i t a l ，C h o n g q i n g4 0 0 0 3 7 ；Ur o l o g yS u rg e r y Re s e a r c hC e n t e r ， S o u t h w e s tH o s p i t a l，T h i r dMi l i t a r yMe d i c a lU n i v e r s i t y ，C h o n g q i n g4 0 0 0 3 8 ；D e p

8、 mt m e n to fU r o l o g y， G e n e r a lH o s p i t a lo fA i rF o r c eo fP L A， B e i j i n g1 0 0 0 3 6 ；D e p a r l m e n to fU r o l o g y，H o s p i t a lo fG e n e r a lM i l i t a i yE q u i p m e n tD e p a r t

9、 m e n to fP L A， B e i j i n g1 0 0 0 4 2 ，C h i n a )A b s t r a c t ：O b j e c t i v eT of i w e s t i g a t et h ei m m u n o s u p p r e s s i o nf u n c t i o no faH o v e ]H L A — d e r i v e dp e p t i d e ．R D P

10、1 2 5 8 ，a n di t sm e c h a n i s ms ．Me t h o d sAp e p t i d ed e r i v e df r o m HL A，R D P 1 2 5 8 ，w a sc h e mi c a l l ys y n t h e s i z e db ya r t i f i c i a ls o l i dp h a s es y n t h e s i s ．E f f e c

11、t so ft h ep e p t i d eo na l l o r e a c t i v ec y t o t o x i ca c t i v i t yo fr a ts p l e e nc e i l sa n dh e i neO X —y g e n a se 一 1 ( H O 一 1 )a c t i v i t yw e r eo b s e r v e du s i n gH — T d Rm e t h o

12、 da n de n z y m ec h e m i s t r ym e t h o d ， r e s p e c t i v e l y ． R e s u l t sT h es y n t h e t i cHL A — d e r i v e dp e p t i d ec o u l do b v i o u s l yi n h i b i tt h ep r o l i f e r a t i o no fr a t

13、s p l e e nc e l l sa n dmi x e dl y mp h o c y t er e a c t i o n ，a n dr e d u c eHOa c t i v i t yi nad o s e — d e p e n d e n tma n n e ri nv i t r o．Co n c l u s i o nR D P1 2 5 8c a ns i g n i f i c a n t l yi n &

14、#183;h i b i tt h ep r o l i f e r a t i o no fr a ts p l e e nc e l l si n d u c e db ymi t o g e na n di s o a n t i g e np o s s i b l yb yme a n so fa f f e c t i n gHO 一 1a c t i v i t y．Ke ywo r d s ：HL A- - d e r

15、i v e dp e p t i d e ；mi x e dl y mp h o c y t er e a c t i o n；h e i neo x y g e n a s e - — 1研究表明新 型組織相容性 白細胞抗原 ( h i s t o e o m —p a t i b i l i t yl e u k o c y t ea n t i g e n ， H L A )工 類分子特定序列 ， 尤 其是 a 1 區(qū)的重鏈序列衍

16、生的多肽具有臨床上重要 的免疫調(diào)節(jié)功能。進一步 的研究 表明 ， 對應 于 H L A — B 7以及 H L ～ 一 B 2 7 0 2 鏈 的 7 5 —8 4合成 多肽能夠抑制 C T L細胞 和 N K細胞 的細胞分化 以及 細胞毒功能 ， 且沒有 基金項目： 國家新藥基金 資助項 目( 1 9 9 9 A ( D 2 )S u p p o r t e db yt h eN a t i o n a lF u n drNe wD

17、r u gD e v e l o p me n t( 1 9 9 9 A 0 0 2 )作者簡介： 易善紅( 1 9 7 0 一) ， 男 ， 河南省息縣人 ， 博十 ， 主治醫(yī)師， 講 師， 主要從 事腫瘤防治生物學治療及器官 移植免疫耐受方 面的研究一 電話 ：( 咂3 ) 6 8 7 7 4 6 2 4收稿 日期 ： 2 0 0 3O l0 7 ； 修回 日期 ： 2 0 0 31 10 5等位基 因特異性?。多種器 官移 植動

18、物試 驗表 明，H L A衍生肽 2 7 0 2 ． 7 5 — 8 4在聯(lián)合應用亞 臨床劑 量的環(huán) 孢素 A時能夠延長 同種移植物的存活期 。以親和 層析法研究顯示 ， H 『 l A 衍生肽的作用機制可能與血紅 素氧合酶一 1 有關_ 4J 。本實驗觀察了一種經(jīng)計算機設計 的 H I A衍生肽在體外對大鼠脾 細胞增殖功能的影響以及對細胞 H O ． 1 酶活性的作用。1 材料與方法 1 ． 1 材 料 來源 1 ． 1 ． 1主要試

19、劑R P M I 1 6 4 0 、 胎牛血清( G I B C O ) ， 絲裂霉素 C維普資訊 http://www.cqvip.com 3 1 6第 三 軍 醫(yī) 大 學 學 報 第 2 6 卷 圖 1I t L A衍生肽對體 外 H O 一 1 酶活性的作用F i g1Ef e c t so fHLA- de lv e dp e p f i deO i lHO- 1a c t i v i t yi nv i t r o3 討論

20、H I 』 A 是一組淋 巴細胞表面蛋 白分子 ， 參與細胞 問的相互識別和免疫反應等許多重要功能 ， 是誘導同種 組織器官移植排斥反應的主要抗原。編碼 H L A分子 的基 因在人類是由位于第 6 號染色體短臂 ( 6 p 2 1 ． 3 ) ，稱 為 主要組 織相 容性 復合體 ( m a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e x ， M H C ) ， 具有高度 多

21、態(tài)性 ， 分別 編碼 H T 』 A工、Ⅱ、 Ⅲ類分子。小 鼠稱 H 一 2 復合體 ， 位于第 1 7 號染色 體， 大鼠稱為 R T 1 。最早 P a r h a m等 首次用序列比較和單克隆抗體對 Ⅷ_ A肽一定區(qū)域的反應性等方法確定了起主要作用的Ⅷ_ A 一氨基酸區(qū)域， 用人工合成相 當于 區(qū)域的肽能 抑制 C T L的溶破效應， 誘導受者產(chǎn)生抗原特異性免疫耐 受。在體外 mA — B 2 7 0 2 ． 7 5 — 8 4

22、衍生肽能抑制淋巴細胞由絲裂原或同種抗原引起 的增殖反應和 C T L 前體細胞分 化 ， 并能抑制 C T L 對靶細胞的溶破作用 。本試驗中所 用 mA衍生肽 R D P 1 2 5 8 與 H 1 _ A — B 2 7 0 2 ． 7 5 — 8 4 衍生肽 同源 ， 該多肽是根據(jù)計算機分析該同源十肽鏈庫中各肽的靜電學 、 動力學、 及三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果， 結(jié)合大 鼠心臟移植 模型的篩選而得到J 。本試驗 中采用固相合 成法 ， 利

23、用 F m o c 標 準方 案， 在 固相 多肽合 成 儀上 合成 多 肽 R D P 1 2 5 8 ， 質(zhì)譜分析序列正確， 純度高。應用于體外淋 轉(zhuǎn)及 M L R試驗中發(fā)現(xiàn)該肽能夠抑制淋巴細胞 由絲裂 原或同種抗原引起 的增殖反應 ， 具有較強的免疫抑制 作用 。I y e r 等[ 4 ] 以親 和層析法研究表明， H L A衍生肽的 作用機制可能與 H O 一 1 有關。研究 中表 明， 具有較好 的誘導器官移植免疫耐受的 H

24、 L A衍生 肽均具有很好 的體外 H O ． 1 酶活性抑制作用， 而在體內(nèi)則能提高 H O 一1 酶活性。本試驗 中表明 H I J A 衍 生肽 R D P 1 2 5 8 具有 較強的體外抑制大 鼠脾細胞 H O ． 1 活性 的作用 ， 且呈 現(xiàn)出劑量依賴性 ， 同 M L R抑制試驗中觀察到的劑量依 賴性相似 ， 有理由相信 H I 』 A 衍生肽是通過影響細胞 內(nèi)血紅素氧合酶一 l 的活性 ， 進而通過某種途徑達到免疫 抑

25、制的結(jié)果。血紅素加氧酶是血紅素代謝過程中的起 始 、 限速酶， 其生理功能為催化血紅素 ， 降解生成膽綠 素 、 一氧化碳和亞鐵 。近年來 的研究結(jié)果表明 ， H O的 生物學效應并不局限于此 ， 其催化產(chǎn)物同樣具有重要 的生物學功能 ， 主要表現(xiàn)為膽綠素及其還原產(chǎn)物膽紅 素和亞鐵 的抗 氧化損 傷及 C O的血 管調(diào) 節(jié)作用。因此 ， 膽紅素的生理作用， 是否包括免疫抑制作用將成為 以后研究的方向。Wo o 等 采用 H O 一 1

26、酶激動劑 C o P P處理大鼠后， 大 鼠體內(nèi) H O 一 1 活性增加 ， 同時觀察到包 括淋 巴細胞增殖能力、 N K及 C T L細胞殺傷活性等 多 方面的免疫抑制現(xiàn)象， 并顯著延長大 鼠移植心臟的存 活時間。最近有研究 采用 H O 一 1 基 因轉(zhuǎn) 移的方法 ， 降 低了 C D 9 5 ／ F A S 介導 的細胞凋亡 ， 進而 產(chǎn)生大 鼠肝移 植的移植免疫耐受 J 。由此 可以看 出， H I A衍生肽的免疫抑制作用機

27、制 ， 尤其是 H O 一 1 酶活性 的改變對淋 巴細胞功能的影響機制仍不是十分清楚， 等待進一步 的研 究 參考文獻：[ 1 ]汪澤厚 ， 朱錫 華， 潘進 勇， 等 ． 人上合成 H L A衍生隊 對 C T 1和 N K細胞毒功能的影響[ J ] ． 巾國免疫學雜志 ， 2 0 0 1 ， 1 7 ( 9 ) ： 4 6 3 — 4 65 ．【 2Js c 0S ， V r i e n sP ， H o y tGe ta 1 ．

28、 I n d u c t i o no fa l ／ o g r a f tt o l e r a n c ei nr a t sb ya nH L Ac l a s s — I — d e r i v e dp e p t i d ea n dc y c l o s p o r i n eAlJJ ． Jh r m l u n o l ，1 9 9 4 ，1 5 2 ( 8 ) ： 3 7 8 6 —3 7 9 2 ．[ 3 ]H a

29、 n a w a yMJ ， G e i s s l e rEK ， W a n gJ ． e ta 1 ． 1 m m u n 0 s u p ps i v ee f e c t so fa l lH L Ac l a s sI - d e r i v e d p e p t i d ei t , ar a tc m ' d i a ca l l o g r a f tm o d e llJJ ． T r a n s —p

30、l a n t a t i o n ，1 9 9 6 ， 6 1 ( 8 ) ：1 2 2 2—1 2 2 8 ．1 4 jI y e rS ， Wo oJ ， C o m e j oMC ． e ta lC h a r a e t e r i z a t i o na n db i o l o g i c a ls i g n i f i —C a l l C eo fi | I I l n u n o s u p p r e s s

31、 i v ep e p t i d eD2 7 0 2． 7 5 — 8 4( E— ’V)b i n d i n gp r o t e i n ．1 ~ l a t i o no fh e i n eo x y g e n a ~ s e - 1 l JJ ． JB i dC h e m， 1 9 9 8 ， 2 7 3 ( 5 ) ： 2 6 9 2 —2 6 9 7 ．[ 5 ]P ' Ml m nP ， C l a y

32、1 ) e r g e rC ， Z o r nSL ． e ta 1 ． I n h i b i t i o na fa l l o r e a c t i v ec y t o —t o x i cTl y m p h t x ~ y t e sb yp e p t i d e sf r o mt h eu 2d o m a i n【 l fHI J A - A 2 【 J j ，N a -t u r e ，1 9 8 7 ， 3

33、2 5 ( 6 1 0 5 ) ： 6 2 5—6 2 8 ．[ 6 ]G ir a IM， C u t u r iMC ， N g u y e nJM． e ta 1 ． D e c r e a s e dc y t o t o x i ca c t i v i t yo fn a t u r a lk i l l e rc e l l si nk i d n e ya ll o g r a f tr e c i p i e n t

34、st r e a t e d w i t hh u ma nHL A—d e f t v e dp e p f i d eJJ j ． T r a n s p l a n t a t i o n ， 1 9 9 7 ， 6 3 ( 7 ) ： 1 0 0 4 一 J 0 1 1 ．[ 7 ]G r a s s yG ， C a l a sB ， Y a s r iA ，e ta 1 ． C o m p u t e r - a s s

35、 i s t e d r a t i o n a ld e s i g no fi n m l u n o s u p p r e s s i v ec o m p o u n d s [ J ] ． N a t u r eB i o t e c h n o l ， 1 9 9 8 ， 1 6 ( 8 ) ： 7 4 8— 7 5 2．[ 8JW o oJ ， l y e rs ， C o m e j oMC ．a(chǎn) 1 ． S t r

36、 e s sp m t e i n — i n d u e Mi n u n u n o s u p -p r e s s i o n：I n h i b i t i o no fc e l l u l m “i mmu n ee f e c t o rf u n c t i o n sf o l l o w i n go v e r e x —p r e s s i o no fh a e mn a s e ( H S P3 2 )

37、[ I 『 ] ． T r a n s p lh ) m m n o l ， 1 9 9 8 ， 6 ( 2 ) ：8 4—9 3．1 9JK eB ， B u e l o wI { ， S h e nXD ．a(chǎn) 1 ． H e m eo x y g e n a s e - 1g e n et r a n s f e rp m -v e n t sCD 9 5 ／ F a s l i g a n d - · me d i a

38、 t e d a p o p t o s i sa n di mp r o v e sl i v e ra ll o g r f ts u r v i — ，V a lv ／ ac a r 1 ) o nm o n o x i d es i g n a l i n gp a t h w a y l JJ ． H m nG e n eT h e r ， 2 0 0 2 ，1 3( 1 0 ) ： 1 1 8 9 一l 1 9 9 ．(