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文檔簡介
1、中文 中文4110字出處: 出處:J Nat Med (2010) 64:182–186用HPLC–DAD–ESI–MS/MS方法對黃芪抗病毒活 方法對黃芪抗病毒活性部位進行植物化學研究 性部位進行植物化學研究Li Tang ? Ying Liu ? Yeing Wang ? Chunlin Lon摘要:黃芪在中國是一種用來治療疾病的常用中草藥。為了弄清黃芪的抗病毒成分,我們用HPLC–DAD–ESI–MS/MS分離和鑒定了黃芪提取物的
2、幾種抗病毒的活性成分。通過比較已發(fā)表文獻的保留時間和MS數據,共鑒定出18個化合物,包括11個黃酮和7個皂苷類化合物。這個研究為快速鑒別傳統(tǒng)中藥的生物活性成分提供了一種途徑。關鍵詞:黃芪 抗病毒的 活性 黃酮 皂苷前言:中藥廣泛用于疾病的治療,為中華民族的繁榮和發(fā)展做出了重要貢獻。然而,它的治療機制卻沒有弄清?,F在中藥的復雜成分和它的有效性相關的提法被廣泛接受。因此,為了保證中藥在臨床上的可靠性,更好的弄清藥物活性的基礎并且提高產品的質
3、量,闡明和分析中藥的活性成分是很有必要的。由于中藥成分的復雜性使這一領域的研究有很大挑戰(zhàn)性。因此,鑒別有效成分是很重要的?,F在,HPLC–MSn已經被證明是中藥提取鑒定的一個有力工具。這個方法在靈敏度和特異性方面有優(yōu)勢。黃芪,是莢膜黃芪的干燥根,在中國叫做黃芪,是廣為人知的一種補氣藥。黃芪擁有許多生物學功能,包括保肝,抗氧化,抗病毒,抗高血壓和刺激免疫應答等。根據報道黃芪含有三萜皂苷,異黃酮類和多糖等類成分。在這個研究研究中,我們對黃芪
4、的有抗炎活性的部分進行了植物化學成分的研究。采用HPLC–DAD–ESI–MS/MS 技術,比對已有化合物的UV光譜和MS數據共鑒別出18個化合物,包括11個黃酮類化合物和7個皂苷類化合物。這個結果有助于人們對黃芪的臨床用藥有更好的理解,并且有利于為這個傳統(tǒng)中草藥提供更好的質量控制方法。材料和方法: 材料和方法:化學制品和試劑:司)。培養(yǎng)基放在37°C,5%CO2條件的培養(yǎng)箱中。副流感病毒,呼吸道合胞體病毒,單純皰疹病毒-1,
5、單純皰疹病毒-2,腺病毒-3和腺病毒-7由中國中藥研究所,中藥研究會提供。病毒在單層Hep-2細胞中繁殖并儲存在-70°C的冰箱中。體外測定抗病毒活性: 體外測定抗病毒活性:被測成分用DMSO溶解并濃縮到10mg/ml。工作溶液通過用MEM雙重連續(xù)稀釋的方法準備好并加入到四個孔中,200μl/well 。正常細胞做對照。四天的培養(yǎng)過程中,通過光學顯微鏡觀察致細胞病變效應。通過Reed–Muench方法,黃芪的濃縮物的CC50被
6、測定出來。Hep-2細胞生長至匯合,在滴度100×CCID50下被病毒感染。在1.5小時長的病毒吸收期后,含病毒的介質換成新鮮介質,被測部位經過一系列的稀釋同時加入到培養(yǎng)基中。感染細胞不接受控制病毒的藥物治療。當傳染病后48-96小時百分百的細胞病變效應被檢測到后,能獲得百分之五十的抑制CPE的藥物濃度稱為半抑制濃度,通過三次獨立測定得到。選擇性指數,或者CC50和IC50的比也能計算被測部分的抗病毒活性。利巴韋林用做陽性對照
7、??共《净钚缘纳餃y定方法: 抗病毒活性的生物測定方法:抗副流感病毒活性測試用黃芪乙醇提取物和過大孔樹脂后的水,30%乙醇和70%乙醇的洗脫部分。四部分的半抑制濃度分別為20.7 ± 5.2, 135.2 ± 4.6, 48.4 ± 3.9, 和15.8 ± 1.2μg/ml。相應的四部分的選擇性指數分別為5.8 ± 0.6, 1.5 ± 0.4, 3.1
8、7; 0.3和 8.5 ± 0.6。這表明70%乙醇從D101上的洗脫的部位是黃芪最有抗病毒活性的部分。百分之七十部分的一系列的抗病毒活性列在表一中。結果表明百分之七十的部位對呼吸道病毒,單純皰疹病毒-1,單純皰疹病毒-2有適度的活性。對腺病毒-3,腺病毒-7和副流感病毒有重要的抑制活性。結果表明百分之七十的部分是黃芪的抗病毒活性的基礎。表1 百分之七十部位在Hep-2細胞中的抗病毒活性。70%F Ribavirin Viru
9、sIC50 (tg/ml) SI IC50 (tg/ml) SIParainfluenza virus 14.1 ± 1.1 8.5 ± 0.6 77.3 ± 5.8 9.4 ± 0.7Respiratory syncytial virus 57.1 ± 5.6 2.1 ± 0.2 113.7 ± 8.5 6.4 ± 0.4Herpes simplex vi
10、rus-1 41.4 ± 4.7 2.9 ± 0.3 143.3 ± 5.8 5.1 ± 0.2Herpes simplex virus-2 42.8 ± 4.1 2.8 ± 0.3 128.3 ± 4.5 5.7 ± 0.2Adenovirus-3 22.6 ± 0.8 5.3 ± 0.2 95.3 ± 10.5 7.7
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