miRNA和mRNA在草酸鈣結(jié)石模型大鼠腎臟的表達及意義研究.pdf

1、背景：
　　泌尿系結(jié)石是一種病因復(fù)雜的全球性疾病，其中草酸鈣結(jié)石是最常見的結(jié)石類型。由于發(fā)病機制不明，缺乏有效的預(yù)防手段，泌尿系結(jié)石的發(fā)病率及復(fù)發(fā)率較高。微小核糖核苷酸（microRNA，miRNA）是一類非編碼的單鏈小分子RNA，可通過促進信使RNA（messenger RNA，mRNA）降解和/或抑制其翻譯從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后基因表達的調(diào)控功能，其表達量的改變與各種生理及病理狀態(tài)密切相關(guān)。然而迄今為止，miRNA在草酸鈣結(jié)石形成中的

2、作用及具體機制尚未得到證實。目的
　　比較草酸鈣結(jié)石模型大鼠與正常大鼠腎組織miRNA表達譜和mRNA表達譜的差異，篩選出差異性表達的miRNA和mRNA，并通過預(yù)測差異性表達的miRNA所調(diào)控的靶基因，初步分析miRNA在草酸鈣結(jié)石形成過程中的功能及相關(guān)機制，為進一步研究提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　將16只6—8周齡的雄性SD大鼠隨機分為兩組，每組8組。正常組每天自由飲水，造模組使用乙二醇和氯化銨誘導(dǎo)法

3、構(gòu)建大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型，28天后收集大鼠24小時尿液并處死大鼠提取腎臟組織標本進行檢驗以評估造模成功性。提取兩組大鼠腎皮質(zhì)組織總RNA，應(yīng)用微陣列芯片檢測其miRNA及mRNA表達譜，篩選出兩組間差異表達的miRNA和mRNA，運用實時定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）驗證芯片結(jié)果，并通過 TargetScan等數(shù)據(jù)庫及 mRNA差異表達譜結(jié)果預(yù)測差異性表達miRNA調(diào)控的靶基因，應(yīng)用Gene Ontology數(shù)據(jù)庫和KEGG信號

4、通路數(shù)據(jù)庫初步分析miRNA及其靶基因在草酸鈣結(jié)石形成過程中的功能及作用機制。
　　結(jié)果：
　　造模組大鼠24小時尿液草酸排泄量相比正常組更高，而尿鈣則較低。偏光顯微鏡下觀察腎臟組織切片，正常組未見草酸鈣晶體，造模組可見大量草酸鈣晶體。微陣列芯片結(jié)果表明，兩組之間共38個miRNA表達有顯著差異（與正常組相比，造模組上調(diào)18個，下調(diào)20個）；兩組之間共2728個mRNA表達有顯著差異（與正常組相比，造模組上調(diào)1350個，下調(diào)

5、1378個）。選取15個差異表達的miRNA和10個mRNA進行qRT-PCR驗證，結(jié)果表明與芯片結(jié)果基本吻合，芯片檢測結(jié)果可靠。預(yù)測34個差異表達的miRNA共調(diào)控328個靶基因表達，Gene Ontology分析及KEGG信號通路分析表明這些靶基因與離子轉(zhuǎn)運、炎癥損傷、氧化應(yīng)激等方面密切相關(guān)，并可能通過細胞因子-細胞因子受體相互作用，縫隙連接，細胞粘附，趨化因子信號通路等相關(guān)的生物學通路參與結(jié)石形成的過程。
　　結(jié)論：