TGF-β1和bFGF對奶牛乳腺細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：培養(yǎng)、純化奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，倒置顯微鏡觀察和繪制細(xì)胞生長曲線，了解體外培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特性，探討轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transfer gowth factor-β1，TGF-β1)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Basic fibroblast growth factor，bFGF)對奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的影響，以闡明兩種細(xì)胞因子對體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的影響。
　　方法：采用組織塊培

2、養(yǎng)法進(jìn)行奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)。根據(jù)上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞貼壁程度不同，利用差時胰酶消化法和差速貼壁法純化奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和鑒定細(xì)胞的來源。傳至六代純化的細(xì)胞用于實驗。實驗分別檢測兩種細(xì)胞因子TGF-β1、bFGF對純化的奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的影響。
　　結(jié)果：(1)顯微鏡觀察及生長曲線結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)和純化的奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞具有典型的形態(tài)特征且具有良好

3、的增殖能力。(2) MTT比色法檢測結(jié)果顯示：在奶牛乳腺上皮細(xì)胞中不同濃度TGF-β1實驗組與對照組比較差異顯著，隨TGF-β1濃度增大抑制細(xì)胞增殖作用增強(qiáng)；奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中不同濃度TGF-β1實驗組與對照組比較差異顯著，隨TGF-β1濃度增大促進(jìn)細(xì)胞增殖作用增強(qiáng)；在奶牛乳腺上皮細(xì)胞中不同濃度bFGF實驗組與對照組比較差異不顯著；奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中不同濃度bFGF實驗組與對照組比較差異顯著，隨bFGF濃度增大促進(jìn)細(xì)胞增殖作用增強(qiáng)；

4、(3)應(yīng)用分光度法檢測caspase-3活性，測定DNA片段化率檢測結(jié)果顯示：在奶牛乳腺上皮細(xì)胞中不同濃度TGF-β1實驗組與對照組比較差異顯著，隨TGF-β1濃度增大促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用增強(qiáng)；在奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中結(jié)果顯示不同濃度TGF-β1實驗組與對照組之間差異顯著，隨TGF-β1濃度增大抑制細(xì)胞凋亡作用增強(qiáng)；應(yīng)用分光度法檢測caspase-3活性、測定DNA片段化率檢測結(jié)果顯示：在奶牛乳腺上皮細(xì)胞中不同濃度bFGF實驗組與對照組比較差