鈣網(wǎng)蛋白介導(dǎo)的凋亡在早期先兆流產(chǎn)過(guò)程中的作用研究.pdf

1、目的：鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin，CRT)是一種在結(jié)構(gòu)和功能上具有高度保守性的Ca2+結(jié)合蛋白，近年來(lái)研究表明CRT的表達(dá)水平與生理妊娠和病理妊娠都密切相關(guān)。然而，目前對(duì)其作用機(jī)制仍不十分明確。本課題旨在通過(guò)對(duì)早期先兆流產(chǎn)絨毛和蛻膜組織中CRT表達(dá)水平的檢測(cè)和體外實(shí)驗(yàn)中觀察過(guò)表達(dá)與下調(diào)CRT時(shí)人胎盤絨毛膜癌細(xì)胞(BeWo)中Caspase-3的表達(dá)情況來(lái)探索其介導(dǎo)的凋亡與先兆流產(chǎn)的關(guān)系。
　　方法：(1)分別收集并處理早期

2、正常妊娠及早期先兆流產(chǎn)患者人工流產(chǎn)后的絨毛和蛻膜組織；(2)免疫組織化學(xué)檢測(cè)CRT蛋白的表達(dá)；Western blot檢測(cè)CRT蛋白的表達(dá)；QPCR檢測(cè)CRT mRNA的表達(dá)；(3)合成并檢測(cè)質(zhì)粒mEmerald-CRT的表達(dá)；(4)合成并檢測(cè)si-CRT的表達(dá)；(5)分別轉(zhuǎn)染質(zhì)粒mEmerald-CRT與si-CRT至BeWo細(xì)胞中，檢測(cè)CRT及Caspase-3的表達(dá)。
　　結(jié)果：(1)收集正常人流組（35例）與先兆流產(chǎn)組的病

3、例標(biāo)本（40例）；(2)免疫組化可見(jiàn)陽(yáng)性信號(hào)定位于發(fā)育不良的絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞和蛻膜細(xì)胞的胞漿和胞膜上，先兆流產(chǎn)組染色比正常早孕組深，面積更大；Western blot檢測(cè)CRT蛋白的表達(dá)量在先兆流產(chǎn)組高于正常人流組；QPCR檢測(cè)CRT mRNA的表達(dá)量在先兆流產(chǎn)組高于正常人流組；(3)合成并檢測(cè)質(zhì)粒mEmerald-CRT的表達(dá)；(4)合成并檢測(cè)si-CRT的表達(dá)；(5)成功轉(zhuǎn)染質(zhì)粒mEmerald-CRT至BeWo細(xì)胞中， QPCR檢測(cè)

4、CRT mRNA與Caspase-3 mRNA在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組高于對(duì)照組，P<0.05；Western blot檢測(cè)CRT與Caspase-3蛋白表達(dá)量在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組高于對(duì)照組，P<0.05；(6)成功轉(zhuǎn)染si-CRT至BeWo細(xì)胞中，QPCR檢測(cè)CRT mRNA與Caspase-3 mRNA在si-CRT組低于對(duì)照組，P<0.05；Western blot檢測(cè)CRT與Caspase-3蛋白表達(dá)量在si-CRT組低于陰性對(duì)照組，P<0.05。