農(nóng)桿菌介導(dǎo)下的bt基因和bar基因在陸地棉gossypiumhirsutuml.上的遺傳轉(zhuǎn)化

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)下的Bt基因和Bar基因在陸地棉（Gossypiumhirsutum L.）上的遺傳轉(zhuǎn)化姓名：黃超申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：張獻(xiàn)龍20050501華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2 0 0 5 屆碩士學(xué)位論文A b s t r a c tU p l a n d c o t t o n ( G o s s y p i u m h i r s u t u m L ．) i so n e o f t h e

2、m o s t i m p o r t a n te c o n o m i c c r o p s ，a n do n e o ft h em o s t p h e n o m e n a lc r o p sd a m a g e db y p e s t s i nC h i n a ．T r a d i t i o n a lb r e e d i n gs o l u t i o n sf o r i n s e c t &

3、#183;r e s i s t a n tc o t t o n a r et i m e ·c o n s u m i n ga n di n e f f i c i e n t ．B t g e n e sh a v eb e e np r o v e de n j o y i n gp r o w e s sa g a i n s tp e s t s ．B yu s i n gt r a n s g e n i ct

4、 e c h n o l o g y , B tg e n e st r a n s f e r r e d a n d e x p r e s s e d i n c o t t o nw i l l e n h a n c e t h e r e s i s t a n c ec a p a c i t y a g a i n s tp e s t sn o t i c e a b l y , w h i c hw i l lr e

5、 s u l ti nt h es h a r pd e c r e a s eo f t h ed o s ea n dp r a c t i c ef r e q u e n c yo fp e s t i c i d ei nc o t t o n f i e l da n dt h e nm a k eh u g ee c o n o m i ca c h i e v e m e n t s ．B a rg e n e ，ag

6、e n ew h i c h d e t o x i f i e st h ei n g r e d i e n to ft h eh e r b i c i d eB i a l a p h o sP P T ’S e l V e Sa sam a r k g e n ei ns c r e e n i n g p r o c e d u r ef o rt r a n s f o r m a n t s ，a n da l s op

7、 l a y sar o l ei nn e w m a t e r i a lc r e a t i o nf o rB i a l a p h o s —r e s i s t a n tG M c r o p sa sah e r b i c i d e ·r e s i s t a n tg e n e ．C o - t r a n s f o r m a t i o no fb o t hB tg e n e a n

8、 d B a rg e n e c o u l d b r i n gu s t h e c o t t o nc a r r y i n g r e s i s t a n c e a g a i n s t i n s e c t a n dh e r b i c i d e ．B y t h e w a y o f A g r o b a c t e r i u m t u m e f a c i e n s - m e d i

9、a t e d e m b r y o g e n i c c a l l u st r a n s f o r m a t i o n ，B a rg e n ea n de a c ho ft h e t h r e en o v e lB tg e n e s ( C r y l C ，C r y l I A ，C r y 9 C )w e r et r a n s f o r m e ds e p a r a t e l y ,

10、 i n t of o u ru p l a n dc o t t o nc u l t i v a r s ，E K l 0 ，E 2 2 ，C 2 0 1 ，Y Z I ．A n d t h er e s u l ti sa s f o l l o w s ：1 ．I n t h i ss t u d y , s e v e r a lk e y p a r a m e t e r sh a v eb e e nm o d i f

11、i e da n dt h et r a n s f o r m a t i o np r o c e d u r e i s o p t i m i z e d ．T h eo p t i m a lc o n c e n t r a t i o no fa g r o b a c t e r i u ms o l u t i o nf o rt r a n s f o r m a t i o ni s0 ．1 0 D ；t h ee

12、 x i s t e n c eo f a c e t o s y r i n g o n ei m p r o v e s t h ee f f i c i e n c yo f t r a n s f o r m a t i o n ，b e c a u s ea d d i n g5 0 m g ／L A st ot h es o l i dc o —c u l t u r em e d i u m o rl i q u i d

13、M G Lm e d i u m d e m o n s t r a t e s s t r o n g e r p e r f o r m a n c e ；t h e o p t i m a lt e m p e r a t u r ef o rc o —c u l t u r ei s 1 9 “ C ；t r a n s f o r m a t i o nb yu s i n ge m b r y o g e n i cc a

14、l l u ss u b c u l t u r e d o v e re x t e n d e dp e r i o da sm a t e r i a ld e c r e a s e st h ed i f f e r e n t i a t i o na b i l i t yo fs o m a t i ce m b r y o s ，a n dt h ee x p r e s s i o np a t t e r n s

15、d i f f e ra c c o r d i n gt o s o u r c eo fe m b r y o g e n i c c a l l u sa n dp l a s m i dc o n s t r u c t i o n ．2 ．A h i g h l ye f f i c i e n ta n d s t a b l es y s t e m f o rs e l e c t i o na n d r e g e

16、n e r a t i o ni se s t a b l i s h e d ，a n d t h ep e r i o dr e q u i r e di sl a r g e l yd e c r e a s e d ．T h eo p t i m a lP P T c o n c e n t r a t i o n sa r e2 0 m g ／L f o rE k l 0 ，5 m g ／L f o rE 2 2 ，1 0 m

17、 g ／L f o rC 2 0 1 ，1 0 r r l g ／L f o rY Z I ，s e p a r a t e l y ．T h ep o s i t i v et r a n s f o r m a t i o nf r e q u e n c yc o n f i r m e db yP C Ra m p l i f i c a t i o nv a r i e sf r o m 6 0 ％t o 1 0 0 ％，a

18、n d t h e a v e r a g e v a l u e i s 8 2 ．8 1 ％w h i c h p r o v e t h et r a n s f o r m a t i o np l a n b a s e do n B a r a ss e l c c t a b l em a r k i s e f f e c t i v e ．T h e i n s e r t i o no fD N A f r a g

19、m e n t i sa l s oc o n f i r m e db y S o u t h e r nh y b r i d i z a t i o n ．3 ．T h e a n t a g o n i s m a g a i n s t P P T f o r a m i n o a c i d sc o n t a i n i n g a m i d ei s o b s e r v e dd u r i n gt h e