qfpcr檢測(cè)22q11.2微缺失方法建立及產(chǎn)前診斷應(yīng)用研究

1、分類號(hào)：R 7 1 5 ．5密 級(jí)：學(xué)科類別：科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位囹 0學(xué)校代碼：10 06 2學(xué) 號(hào)：2 0 1 0 6 0 2 7 4 8學(xué)科門類：醫(yī) 學(xué)天肄醬科點(diǎn)等碩士學(xué)位論文ⅣI A S T E R ’SD I S S E R r l l A T I O N論文題目：Q F - P C R 檢測(cè)2 2 q 1 1 ．2 微缺失方法建立及產(chǎn)前診斷應(yīng)用研究T IT L E ：T h e r e s e a r c ho f e s t

2、 a b l i s h i n gaw a y o f d e t e c t i n gt h e2 2 q 1 1 ．2m i c r o d e l e t i o n w i t h Q F - P C R a n da p p l i c a t i o n i np r e n a t a ld i a g n o s i s一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：婦產(chǎn)科學(xué)論文作者：田卉指導(dǎo)教師：任晨春天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五

3、月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要第一部分Q F - P C R 檢測(cè)2 2 q 1 1 ．2 微缺失方法的建立研究目的 以T B X l 基因附近S N P 位點(diǎn)作為靶位點(diǎn)，探討運(yùn)用熒光定量P C R檢測(cè)2 2 q 1 1 ．2 微缺失的準(zhǔn)確度及靈敏度，在此基礎(chǔ)上，建立一種準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)、快速、高通量、費(fèi)用低且適合在國(guó)內(nèi)開(kāi)展的診斷2 2 q 1 1 ．2 D S 的方法。方法和材料1 研究對(duì)象2 0 1 0 年1 0 月至2 0

4、1 1 年5 月在天津市兒童醫(yī)院進(jìn)行C H D 手術(shù)的患兒8 4 例，年齡1 個(gè)月- - - 1 4 歲，平均年齡( 2 ．5 5 _ + 0 ．3 6 ) 歲。另選3 0 例在兒童醫(yī)院進(jìn)行查體的健康兒童作為對(duì)照組。2 研究材料抽取患者外周血4 m l ，其中，2 m l 用于淋巴細(xì)胞培養(yǎng)、染色體核型分析，l m l 采用酚一氯仿的方法提取D N A 并保存于．2 0 ℃?zhèn)溆茫涣韑 m l 按F I S H 處理方法進(jìn)行離心、低滲、固定

5、處理并保存于．2 0 ℃?zhèn)溆谩? 染色體核型分析實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組所有樣本通過(guò)普通光學(xué)顯微鏡進(jìn)行染色體核型分析，計(jì)數(shù)3 0 個(gè)核型，分析5 個(gè)。根據(jù)染色體核型分析結(jié)果將所有樣本分成核型正常組和核型異常組。4 Q F ．P C R 對(duì)染色體核型正常的實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組進(jìn)行Q F —P C R 檢測(cè)。選取位于2 2 號(hào)染色體T B X l 基因上游4 6 6 0 b p 的S N P 位點(diǎn)r s 9 6 1 8 6 8 2 ( G ／A ) 作為本

6、研究的靶位點(diǎn)，1 9 號(hào)染色體上的P T B P l 基因作為內(nèi)參基因。將原始數(shù)據(jù)、擴(kuò)增曲線等信息從定量軟件中導(dǎo)出進(jìn)行分析，得到樣本基因相對(duì)表達(dá)量r G C N 及圖譜。r G C N = I 時(shí)，表示無(wú)缺失，r G C N = 0 ．5 時(shí)，表示有缺失。5 F I S H 對(duì)染色體核型正常的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行F I S H 檢測(cè)。應(yīng)用雙色熒光探針，以位于2 2 q 1 1 ．2 區(qū)域的T U P L E l 基因?yàn)槟繕?biāo)基因，顯示紅色熒