嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌(stenorophomonas.maltophiliacgmcc1.1788)轉(zhuǎn)化農(nóng)藥噻蟲啉和氯噻啉的研究

1、南京師范大學(xué)博士學(xué)位論文嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌（Stenorophomonas.maltophilia CGMCC1.1788）轉(zhuǎn)化農(nóng)藥噻蟲啉和氯噻啉的研究姓名：趙銀娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：袁生@南京師范大學(xué)博士學(xué)位論文1 p H 的升高，反應(yīng)越快。在O ．0 0 5 M 的N a o H 溶液中1 0 0 ℃加熱l O O m i n ，羥基噻蟲啉被完全水解。產(chǎn)物用正丁醇萃取提純后，經(jīng)M S 、紫外吸收光譜、紅外吸收光

2、譜和核磁共振光譜等分析確認(rèn)為4 ．酮基．噻蟲啉胺。該化合物為首次報(bào)導(dǎo)。2 ．從土壤和菌種庫中篩選對(duì)氯噻啉有轉(zhuǎn)化作用的菌株，篩選結(jié)果表明土壤中也存在一些菌株能對(duì)氯噻啉進(jìn)行轉(zhuǎn)化，而& m a l t o p h i l i a 同樣對(duì)氯噻啉具有較高的轉(zhuǎn)化活性。且在2 5 0 r i m 的紫外吸收波長(zhǎng)下，檢測(cè)到兩個(gè)極性更大的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物l 和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物2 。對(duì)S m a l t o p h i l i sC G M C C 1

3、．1 7 8 8 菌株轉(zhuǎn)化條件研究結(jié)果表明，酶活性受通氣量影響較大，搖瓶裝液量越少，酶活性越高。轉(zhuǎn)化的最適溫度、最適p H 等和轉(zhuǎn)化噻蟲啉時(shí)相同，都為2 5 ℃和p H 6 ．5 。最適底物濃度為0 ．2 ‰。P B O 抑制劑實(shí)驗(yàn)也證明其能夠抑制反應(yīng)活性。在l m M 的P B O 濃度下，脫氫和羥基化反應(yīng)的活性分別被抑制了3 2 ％和5 6 ％。采用5 L 發(fā)酵罐進(jìn)行＆m a l t o p h i l i s 的發(fā)酵和轉(zhuǎn)化研究，結(jié)

4、果表明，轉(zhuǎn)化7 2 h后，轉(zhuǎn)化液中羥基化轉(zhuǎn)化產(chǎn)物含量達(dá)到1 3 0 m g ／L 。采用二氯甲烷萃取兩次后，大部分底物被去除，用同等比例的乙酸乙酯萃取留在水相中的產(chǎn)物，得到產(chǎn)物濃度6 0 ％左右的濃縮液，經(jīng)過T L C 薄板分離后，產(chǎn)物濃度提高至8 0 ％，后經(jīng)制備型I - I P L C 分離得到兩個(gè)產(chǎn)物，純度分別為9 8 ．1 ％和9 7 ．8 ％，產(chǎn)物晶體經(jīng)M S 、紫外吸收光譜、紅外光譜和核磁共振光譜分析后，確認(rèn)產(chǎn)物1 為烯式氯

5、噻啉、產(chǎn)物2為羥基氯噻啉。且羥基的位置確認(rèn)在分子結(jié)構(gòu)的1 1 位C 原子上。對(duì)羥基氯噻啉進(jìn)行化學(xué)修飾，結(jié)果表明，羥基氯噻啉能在酸性溶液加熱的條件下迅速轉(zhuǎn)化成另一個(gè)物質(zhì)，該物質(zhì)用乙酸乙酯的方法提取結(jié)晶后，經(jīng)鑒定即為烯式氯噻啉。在水中和堿性溶液中，加熱都不能使羥基氯噻啉發(fā)生反應(yīng)。用產(chǎn)物作為底物的方法，分別以烯式氯噻啉和羥基氯噻啉作為底物，用＆m a l t o p h i l i a 轉(zhuǎn)化，結(jié)果表明，它們都不能被S ．m a l t o p

6、 h i l i a 轉(zhuǎn)化生成對(duì)方，說明它們是由Sm a l t o p h i l i a 轉(zhuǎn)化氯噻啉獨(dú)立生成的產(chǎn)物。3 ．噻蟲啉及得到的兩個(gè)衍生物和氯噻啉及得到的兩個(gè)衍生物的生物活性測(cè)試研究結(jié)果表明，噻蟲啉和羥基噻蟲啉對(duì)蠶豆蚜的半致死濃度分別為O ．O l p p m 和1 ．5 6 p p m ，羥基噻蟲啉的活性比噻蟲啉本身低了兩個(gè)數(shù)量級(jí)，4 ．酮基．噻蟲啉胺的半致死濃度更是超過了4 p p m ，基本已沒有活性。而氯噻啉的兩個(gè)衍