1.不同發(fā)育階段斑馬魚單胚胎的蛋白質(zhì)組分析;2.vsx1基因沉默對金魚早期胚胎發(fā)育的影響

1、湖南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文1.不同發(fā)育階段斑馬魚單胚胎的蛋白質(zhì)組分析;2.vsx1基因沉默對金魚早期胚胎發(fā)育的影響姓名：陳妍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王迎;梁宋平20080501第二部分 v s x [ 基因沉默對金魚早期胚胎發(fā)育的影響v s x l 基因是與金魚眼睛空間模式形成相關(guān)的調(diào)控基因和分析二倍體依賴型機(jī)制的侯選目標(biāo)基因，為了進(jìn)一步了解v s x l 在金魚胚胎發(fā)育中和二倍體依賴型基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制中的作

2、用，我們采用顯微注射的方法，先用M o r p h o l i n oa n t i s e n s e 0 1 i g o s 沉默v s x l 的表達(dá)，再用比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法來研究v s x l 沉默引起的蛋白質(zhì)組的變化，從而探究v s x l 在金魚胚胎發(fā)育過程中的功能及其調(diào)控方式。該研究比較了注射反義寡核苷酸( A T G - M O ) 和注射標(biāo)準(zhǔn)對照( S C O N —M O ) 的胚胎，觀察注射后胚胎的發(fā)育情況，發(fā)現(xiàn)在

3、原腸早期，注射了A T G - M O 的胚胎大多無法繼續(xù)發(fā)育，表明A T G - M O 的作用導(dǎo)致v s x l 表達(dá)受阻，致使胚胎在原腸期發(fā)育停滯。原腸作用是從尚未分化進(jìn)入到分化為三個胚層和決定各個器官原基的關(guān)鍵時期，因此我們推測v s x l 可能是一個多功能基因，它可能是早期金魚胚胎發(fā)育過程中參與胚層特化和分化的基因之一。采用雙向凝膠電泳和軟件分析得到了注射A T G - M O 和注射S C O N - M O 胚胎全蛋白質(zhì)

4、組的1 0 0 多個差異蛋白質(zhì)點，經(jīng)質(zhì)譜鑒定了8 4個蛋白質(zhì)，其中2 1 個蛋白質(zhì)僅在注射A T G - M O 的胚胎中有表達(dá)，4 7個蛋白質(zhì)在注射A T G —M O 的胚胎中表達(dá)上調(diào)；6 個蛋白質(zhì)只在注射S C O N - M O 的胚胎中表達(dá)，1 0 個蛋白質(zhì)在注射S C O N - M O 的胚胎中表達(dá)上調(diào)。通過對這些鑒定的差異蛋白質(zhì)點的功能分析，發(fā)現(xiàn)一些與轉(zhuǎn)錄調(diào)控，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和組織分化相關(guān)的蛋白質(zhì)，如P r o h i b

5、 i t i n - 2 ，Z i n cf i n g e r t r a n s c r i p t i o n f a c t o r d e t o u r ， B M P t y p e II ar e c e p t o r等都在注射A T G - M O 的胚胎中表達(dá)上調(diào)或僅在注射A T G - M O 的胚胎中有表達(dá)，與先前文獻(xiàn)報道的v s x l 是一個轉(zhuǎn)錄抑制因子相符，表明v s x l有可能是通過這些重要蛋白質(zhì)來間