熒光pcr法檢測gbs的臨床意義貴州

1、THE CLINICAL SIGNIFICANCE OF TESTING GBS BY FQ-PCR,熒光PCR法檢測 GBS的臨床意義,國家-地方聯(lián)合工程實驗室鐘菲菲,呵護生命 健康護航,B族鏈球菌的介紹,20世紀(jì)30年代國外學(xué)者 Fry報道了3例死于GBS引起的產(chǎn)后心內(nèi)膜炎病例, 由此證實了GBS為人類致病菌。,20世紀(jì)60年代首次發(fā)現(xiàn)其可以導(dǎo)致嚴(yán)重的新生兒感染，引起新生兒

2、死亡。,20世紀(jì)70年代，GBS已被證實為圍產(chǎn)期母嬰感染的主要致病菌之一，在圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)中占有不可忽視的地位。,,,表面蛋白質(zhì)Ag,莢膜多糖Ag(C抗原),肽聚糖,磷壁酸,B族鏈球菌(group B streptococcus,GBS)學(xué)名無乳鏈球菌，為革蘭氏陽性球菌，寄居于陰道和直腸，屬于條件致病菌。,B族鏈球菌的介紹,根據(jù)其是否溶血分：不完全溶血、完全溶血、不溶血3種。,根據(jù)其致病血清分：I a、I b、 I c、 II、Ⅲ、 I V

3、和V，其毒力莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經(jīng)氨酸酶等有關(guān)（發(fā)達國家Ⅲ（60%）發(fā)展中國家I b、 I c、 II（74%））。。,,,,,,,,,(分娩前五周內(nèi)檢測，陰性預(yù)測值為95-98%)。,健康女性15~35% 的生殖道和消化道中存在GBS菌落,而且種族、人群有明顯區(qū)別。,GBS定植表現(xiàn)為一過性,間歇性或持久性,導(dǎo)致孕婦不同時期GBS檢測結(jié)果不同。,性生活活躍,多次妊娠,妊娠期間糖尿病等因素更容易獲得GBS。,,B族鏈球菌流行病學(xué)

4、,B族鏈球菌危害,母嬰傳播是新生兒感染的主要途徑，母嬰傳播發(fā)生在臨產(chǎn)，新生兒暴露于有Ｂ族鏈球菌產(chǎn)道，可吞進和吸入細(xì)菌。,GBS陽性的孕婦中新生兒感染率,GBS對孕婦的危害,,抑制乳酸桿菌生長，pH值升高，利于雜菌。,胎膜早破羊膜腔感染，早產(chǎn)、晚期先兆流產(chǎn)。,GBS對絨毛膜的吸附力及穿透力最強，宮內(nèi)感染的主要原因。,GBS,胎膜早破,早產(chǎn),刺激子宮收縮,GBS對孕婦的危害,關(guān)于263例高危孕婦的研究,,,GBS感染患者治療后的情

5、況如下: 早產(chǎn)62例中有13例GBS感染經(jīng)治療后，其中6例至37周后分娩，時間最長1個月，新生兒體重達2 600 g；胎膜早破＋早產(chǎn)136例中有31例GBS感染經(jīng)治療后，其中6例延長了孕周， 最長延長15天，達足月分娩；晚期先兆流產(chǎn)38例中有9例GBS感染，經(jīng)過治療，4例早產(chǎn)，孕周增長最長的達6周（24周入院至30＋2周剖宮產(chǎn)結(jié)束分娩，早產(chǎn)兒體重1 800 g經(jīng)搶救存活，隨訪6個月目前情況良好）。：經(jīng)GBS干預(yù)治療后,可延長孕周

6、,使胎兒獲得宮內(nèi)生長機會，增加存活率和生存質(zhì)量,降低極低出生體重兒和圍產(chǎn)兒死亡率,減少母嬰感染率及其并發(fā)癥。,參考文獻：中國婦幼保健2009年第24卷 《B族溶血性鏈球菌感染與胎膜早破、早產(chǎn)、晚期先兆流產(chǎn)的關(guān)系與干預(yù)》劉劍等.,GBS對孕婦的危害,GBS對新生兒的危害,癥狀包括呼吸窘迫，呼吸暫停，以敗血癥最常見，肺炎和腦膜炎是早發(fā)型的形式早期病死率高達50％，近年來，為4-6％無癥狀帶菌母親分娩傳播。主要為足月兒 和 近 足 月

7、兒 。,早發(fā)型感染危害,James Hanley. Neonatal infections: group B streptococcus[J]. Clinical Evidence.,GBS對新生兒的危害,新生兒B族鏈球菌感染死亡1例分析,新生兒出生后3h吃奶差，反應(yīng)欠佳；出生后8h情況加重，四肢微涼、體溫正常；出生后13h呼吸急促、反應(yīng)低下、刺激不哭。以敗血癥、呼吸功能不全、新生兒肺炎急轉(zhuǎn)兒科；出生后21h病情進一步加重，提示

8、嚴(yán)重感染、酸中毒、低鈣及心肌受損；出生后38h出現(xiàn)呼吸表淺、暫停等；出生后41h呼吸首先停止，然后心跳停止，經(jīng)搶救無效死亡。,資料來源：《中國實用婦科與產(chǎn)科雜志》2008年10月第24卷第10期 ——新生兒B族鏈球菌感染死亡1例分析,北京兒童醫(yī)院《新生兒肺炎死亡病例中B族鏈球菌的檢測》,,,★收集200 例1953年至2004年間新生兒肺炎死亡病例回顧研究?！锼劳龅?00例肺炎患兒，有130例查實GBS陽性感染，高達65%。★

9、130例GBS陽性患兒，有74名＜7d，56名＞7d。早發(fā)型中29名為早產(chǎn)兒?！?00例患兒中，75例有完整臨床資料。其中35例可查到一項或多項與GBS感染有關(guān)的危險因素，如早產(chǎn)，低體重，胎膜早破，羊水異常等，GBS檢測結(jié)果均為陽性。結(jié)論：GBS是新生兒肺炎死亡病例中的重要病原，尤其在早發(fā)型肺炎病例中GBS感染占很大比重。,《中華兒科雜志》2006年11月第44卷第11期——新生兒肺炎死亡病例中B族鏈球菌的檢測,新生兒誤診分析1例,

10、西南某三甲軍區(qū)醫(yī)院政委孫女出生后出現(xiàn)感染，經(jīng)臨床科室、檢驗科經(jīng)驗判斷，疑似MRSA感染，建議臨床使用萬古霉素。政委不認(rèn)可該結(jié)果。后經(jīng)過熒光PCR法快速檢測，確診為B族鏈球菌感染，而臨床的癥狀與鏈球菌感染表現(xiàn)相近，經(jīng)過B族鏈球菌治療方案后，2天即痊愈。,GBS對新生兒的危害,常表現(xiàn)為隱匿發(fā)病，最初為腦膜炎，如發(fā)燒，昏睡嘔吐等，多伴敗血癥病死率約15%，但存活者30%-50%嚴(yán)重后遺癥，癡呆、腦積水，智力障礙等。感染一般系醫(yī)院內(nèi)

11、感染，90%主要是Ⅲ型引起發(fā)病多為產(chǎn)科并發(fā)癥的早產(chǎn)兒和低體重兒，發(fā)病率是足月的7倍，若發(fā)生膿毒血癥，病死率高。,晚發(fā)型感染危害,《新生兒B族鏈球菌腦膜炎13例臨床分析和隨訪》,,,★溫州某醫(yī)院2005年至2013年5月收治的13例新生兒B族鏈球菌腦膜炎的臨床資料進行回顧性分析?！?3例患兒治愈7例，好轉(zhuǎn)自動出院4例，因嚴(yán)重并發(fā)癥死亡2例。出院1個月后1例早發(fā)型伴腦積水早產(chǎn)兒在家中死亡?！?7例隨訪至10~24個月：3例早發(fā)型

12、患兒中，生長發(fā)育正常2例，運動發(fā)育落后1例；4例晚發(fā)型患兒，生長正常發(fā)育1例，運動發(fā)育落后2例，癲癇發(fā)作1例。結(jié)論：新生兒GBS腦膜炎住院時間長，死亡率高，易出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥和后遺癥。,————《中華兒科雜志》2014年2月第52卷第2期,90年代美國新生兒的發(fā)病率,1996年GBS的預(yù)防共識準(zhǔn)則,,,1996年預(yù)防GBS的共識準(zhǔn)則概述了兩種方法，對確定需要的IAP婦女?；A(chǔ)篩查：在35-37周的胃腸道，泌尿生殖道基于風(fēng)險的方

13、法： 早產(chǎn)，胎膜早破≥18小時 或產(chǎn)時發(fā)熱T≥38°C,美國CDC預(yù)防共識準(zhǔn)則,,,,,,,2011年,2014年,2010年,,,,,2015年,,,《孕前和孕期保健指南（第一版）》：建議在孕35-37周進行B族鏈球菌的篩查。,《圍產(chǎn)期GBS預(yù)防指南》：所有孕婦于35-37周篩查。,《早產(chǎn)臨床診斷與治療指南》：篩查宮頸陰道GBS感染有可能預(yù)防早產(chǎn)。,《胎膜早破的診斷與處理指南》：明確指出胎膜早破是B 族溶血性

14、鏈球菌上行性感染的高危因素，是導(dǎo)致孕婦產(chǎn)時及產(chǎn)褥期感染、胎兒感染及新生兒感染的重要病原菌，應(yīng)重視GBS感染的防治。,中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會,美國疾病預(yù)防控制中心建議,權(quán)威指南共識,,全球常規(guī)篩查GBS的地區(qū),,,,,中國部分省份及香港，日本等,,德國、法國、西班牙、波蘭、瑞士、意大利、比利時、捷克、斯諾文尼亞等,美國、加拿大,澳大利亞,,肯尼亞,,阿根廷,GBS檢測方法,在羊血培養(yǎng)基上培養(yǎng)48h后的GBS菌落 ：形成灰白、光滑、圓形突

15、起小菌落有明顯的溶血圈。,GBS培養(yǎng)法,熒光PCR儀給出客觀的判別標(biāo)準(zhǔn),陽性,弱陽,陰性,PCR檢測方法,B族鏈球菌核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）,,優(yōu)點：簡便快捷、靈敏度高（物理破碎）重復(fù)性好、特異性強（分子信標(biāo)）閉管操作、避免污染,國內(nèi)首家，發(fā)明專利,GBS核酸檢測試劑盒適用,生殖道分泌物和直腸分泌物,標(biāo)本類型,熒光PCR法的取材方法,新生兒鼻咽拭子的取材方法,GBS感染檢查時機及治療方案,新生兒：母親陽性、出生后有高危

16、疑似GBS感染癥狀、同產(chǎn)房內(nèi)有陽性者,不需要干預(yù),GBS（+）,對癥治療,GBS（-）,產(chǎn)時高危因素：分娩時<37 周，產(chǎn)時發(fā)熱≥38 ℃,胎膜早破≥12小時,進行GBS檢測,不需要干預(yù),GBS（+）,立即干預(yù),GBS（-）,不需要干預(yù),孕35~37周取陰道和直腸拭子檢測上次新生兒GBS感染史本次妊娠有菌尿癥,GBS（+）,立即干預(yù),產(chǎn)前干預(yù),有癥狀,無癥狀,GBS（-）,2010 GBS預(yù)防醫(yī)療指南：抗生素治療方案,有無

17、青霉素過敏,青霉素G，首次劑量500萬單位,然后每4小時250?300萬單位，直至分娩或者氨芐西林，首次劑量2g，然后每4個小時1g，直到分娩,病人在接受青霉素或頭孢菌素時有無出現(xiàn)下列任一癥狀？過敏癥、血管性水腫、呼吸窘迫、蕁麻疹,頭孢唑啉，首次劑量2G，然后每8個小時1g，直到分娩,是否對紅霉素和克林霉素敏感,萬古霉素每12小時1g（靜脈注射）直至分娩,克林霉素每8小時900mg（靜脈注射）直至分娩,,,,,國內(nèi)治療推薦,3,2,1

18、,,中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會產(chǎn)科學(xué)組,青霉素G 首次劑量480 萬單位靜脈滴注,240 萬單位/4 h 直至分娩?；虬逼S青霉素,負(fù)荷量2 g 靜脈滴注,然后每4 小時1 g 的劑量靜脈滴注直至分娩,對青霉素過敏者則選用頭孢唑啉,2 g 作為起始劑量靜脈滴注,然后每8 小時1 g 直至分娩。,對頭孢菌素類過敏者則用紅霉素500 mg,每6 小時1 次靜脈滴注,或克林霉素900 mg 靜脈滴注,每8 小時1 次。,PCR快速檢測GBS的臨床