臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收要求和要點(diǎn)ppt課件

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收要求和要點(diǎn),寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)診斷中心 杜宗孝 2016.08,2,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室申報及驗(yàn)收程序,二級以上醫(yī)院,,填寫《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)置申請書》,,,,省衛(wèi)計(jì)委醫(yī)政處,相應(yīng)的衛(wèi)生行政部門,,省臨床檢驗(yàn)中心初步技術(shù)審核,,合格者開始試運(yùn)行（三個

2、月），同時報省衛(wèi)計(jì)委備案,,驗(yàn)收合格后，授予驗(yàn)收合格證書（證書有效期五年）,,（省級醫(yī)療機(jī)構(gòu)）,（地、市(縣)級醫(yī)療機(jī)構(gòu)）,3,驗(yàn)收依據(jù),《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》 衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室（血站核酸檢測）工作導(dǎo)則《臨床基因擴(kuò)增檢測實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收報告》,4,為什么要進(jìn)行驗(yàn)收？,方法敏感技術(shù)要求高存在問題

3、多假陰性、假陽性不規(guī)范人員素質(zhì),5,驗(yàn)收要達(dá)到的目的,保證檢測質(zhì)量防止實(shí)驗(yàn)室污染建立LAB內(nèi)部質(zhì)量管理模式嘗試強(qiáng)制性實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,6,9,PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的空氣流向可按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)進(jìn)行，防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。可按照從試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進(jìn)行?？赏ㄟ^安裝排風(fēng)扇、負(fù)壓排風(fēng)裝置或其他可行的方

4、式實(shí)現(xiàn)。,10,PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則,進(jìn)入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行 各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的 設(shè)備、物品不得混用。不同工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。,PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則,工作結(jié)束后，必須立即對工

5、作區(qū)進(jìn)行清潔。實(shí)驗(yàn)臺表面應(yīng)可耐受次氯酸鈉等化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗(yàn)臺表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效。由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動紫外燈（254nm波長），在工作完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺上60～90cm內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對（bp），對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴(kuò)增片段必須延長照射時間，最好是照射過夜。實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，所有操作符合《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19

6、489-2008）。,12,PCR實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收內(nèi)容,實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和設(shè)備設(shè)施和環(huán)境人員設(shè)備管理和質(zhì)控物 檢測過程,標(biāo)本管理 記錄 報告 質(zhì)量控制 抱怨,等十章共三十七條,附件1 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表,本片來自李金明教授,臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一般原則,各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作,“十六字口訣”,本圖來自李金明教授 15,理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置A,16,,理想的PCR實(shí)

7、驗(yàn)室設(shè)置B,本圖來自李金明教授,17,本圖來自李金明教授,18,本圖來自李金明教授,本圖來自李金明教授,本圖來自李金明教授,A,B,錯誤的設(shè)置,21,臨床標(biāo)本的接收,應(yīng)在四個測定區(qū)域之外的地方或適合的地方。接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中，不能接收從其它檢測如生化、免疫檢驗(yàn)等分出來的標(biāo)本 在核酸提取時，由基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室人員將標(biāo)本帶入至標(biāo)本制備區(qū)。,23,試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū),功能：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離

8、心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。試劑準(zhǔn)備區(qū)的儀器設(shè)備主要有冰箱、微量加樣器、混勻器、可移動紫外燈、專用工作服和鞋、消耗品（帶濾芯吸頭、一次性手套等）、專用記錄本和記錄筆。加樣器應(yīng)定期校準(zhǔn)。,24,標(biāo)本制備區(qū),功能：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。,25,標(biāo)本制備區(qū),標(biāo)本制備區(qū)內(nèi)的儀器設(shè)備主要有生物安全柜 、加樣器、高速臺式冷凍離心

9、機(jī)、水浴箱和/或加熱模塊、混勻器、冰箱、可移動紫外燈、專用工作服和鞋、消耗品（帶濾芯吸頭、一次性手套等）、專用記錄本和記錄筆。加樣器應(yīng)定期校準(zhǔn)。如需處理大分子DNA，應(yīng)當(dāng)具有超聲波水浴儀。 加熱模塊和水浴應(yīng)使用已經(jīng)校準(zhǔn)的溫度計(jì)定期對所設(shè)置的溫度進(jìn)行校準(zhǔn)。,27,擴(kuò)增區(qū),功能：cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測。擴(kuò)增區(qū)的主要儀器就是核酸擴(kuò)增熱循環(huán)儀，該儀器需進(jìn)行校準(zhǔn)。,28,產(chǎn)物分析區(qū),功能：擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測定，如雜交、酶切電泳、變

10、性高效液相分析、測序等。本區(qū)是唯一能打開擴(kuò)增后反應(yīng)管的地方。由于本工作區(qū)應(yīng)設(shè)置為負(fù)壓狀態(tài)，空氣流向?yàn)橛赏庀騼?nèi)，以防止擴(kuò)增產(chǎn)物氣溶膠流出，故本區(qū)可無緩沖間。本區(qū)所使用的儀器設(shè)備可能有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱、測序儀等。酶標(biāo)儀應(yīng)定期校準(zhǔn)，洗板機(jī)每次使用完都應(yīng)進(jìn)行清洗，其它如加樣器和水浴箱可按有關(guān)方法進(jìn)行校準(zhǔn)。,核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記）、直接或酶切后瓊脂

11、糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴(kuò)增產(chǎn)物時，必須使用洗板機(jī)洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl中，并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。,30,規(guī)定應(yīng)具有的SOP

12、,儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)程序、儀器設(shè)備的校準(zhǔn)程序、儀器設(shè)備的操作程序、臨床標(biāo)本的收集程序、臨床標(biāo)本的處理（核酸純化）程序、臨床標(biāo)本的保存程序、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析檢測的操作程序、,試劑的質(zhì)檢操作程序、消耗品購置驗(yàn)收質(zhì)檢程序、廢棄物的處理程序、內(nèi)務(wù)管理程序、室內(nèi)質(zhì)量控制程序、抱怨處理程序。,31,實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和設(shè)備檢查重點(diǎn),實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化分區(qū)及相應(yīng)標(biāo)識儀器設(shè)備及在用標(biāo)識保持實(shí)驗(yàn)室空氣流向的措施各區(qū)物品的專用標(biāo)識,實(shí)驗(yàn)室

13、清潔SOP要點(diǎn),目的:為了使實(shí)驗(yàn)室臺面、地面和儀器設(shè)備在使用后，處于潔凈和無感染性狀態(tài)，以防止出現(xiàn)因儀器設(shè)備不潔影響檢測或儀器使用壽命；防止因?qū)嶒?yàn)室臺面、地面和儀器設(shè)備的生物傳染危險性造成實(shí)驗(yàn)室人員感染，以及防止實(shí)驗(yàn)室交叉污染而出現(xiàn)假陽性結(jié)果等。 適用范圍應(yīng)包括實(shí)驗(yàn)室地面、臺面和儀器設(shè)備等的清潔。 按實(shí)驗(yàn)室臺面、地面和儀器設(shè)備分開來寫各自的具體清潔方法，要具體而又有可操作性。 應(yīng)規(guī)定工作人員在清潔時，必須按試劑準(zhǔn)備區(qū)?標(biāo)本制備區(qū)?

14、擴(kuò)增(及產(chǎn)物分析)區(qū)方向進(jìn)行，不得逆行 規(guī)定每一工作區(qū)域的清潔必須使用專用的清潔用具，不得混用 規(guī)定有潛在生物傳染危險性材料濺出時的消毒清潔方法,34,檢測技術(shù)人員要求---人員培訓(xùn)及能力評估,培訓(xùn)：符合資質(zhì)的人員還要接受實(shí)驗(yàn)室生物安全以及廠家的上崗前儀器設(shè)備操作、維護(hù)及校準(zhǔn)等的培訓(xùn)。技術(shù)培訓(xùn)內(nèi)容應(yīng)覆蓋工作人員所涉及的所有工作范疇，培訓(xùn)的評估結(jié)果是確定人員是否適合其崗位的依據(jù)。能力評估：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立操作人員能力評估機(jī)制。每年至少實(shí)

15、施一次人員的能力評估，以評估其臨床基因擴(kuò)增檢測工作的勝任程度。參照評估結(jié)果制定人員持續(xù)培訓(xùn)計(jì)劃。操作人員的操作誤差分析、檢測過程變更可作為培訓(xùn)需求納入培訓(xùn)活動，需記錄人員的能力評估過程。,35,應(yīng)有培訓(xùn)和能力評估的記錄,37,設(shè)備管理,所有設(shè)備應(yīng)得到正確維護(hù)，應(yīng)有設(shè)備維護(hù)程序文件；加樣器、溫度計(jì)、擴(kuò)增儀等設(shè)備應(yīng)有明顯標(biāo)識表明其校準(zhǔn)狀態(tài)；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存每一臺儀器設(shè)備的檔案材料，對檔案材料的具體內(nèi)容作詳細(xì)規(guī)定。,檢測系統(tǒng)的確認(rèn)、運(yùn)行與維護(hù)

16、,檢測系統(tǒng)的確認(rèn) 實(shí)驗(yàn)室必須實(shí)施檢測系統(tǒng)的確認(rèn)活動。確認(rèn)活動包括檢測系統(tǒng)購置前的設(shè)計(jì)確認(rèn)，使用前的安裝確認(rèn)、運(yùn)行確認(rèn)和性能確認(rèn)，檢測系統(tǒng)使用后的性能監(jiān)控及再確認(rèn)。除應(yīng)提供廠商的安裝確認(rèn)報告之外，實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)對每個檢測系統(tǒng)進(jìn)行分析靈敏度、重復(fù)性等性能進(jìn)行驗(yàn)證。,38,性能驗(yàn)證：按檢測系統(tǒng)（包括試劑）說明書進(jìn)行各指標(biāo)的復(fù)現(xiàn),40,檢 測 方 法,標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）：儀器設(shè)備操作和校準(zhǔn)程序；標(biāo)本收集處理程序；擴(kuò)增檢測工作程

17、序；儀器試劑的選購和質(zhì)檢程序；消耗性材料的購買、驗(yàn)收、質(zhì)檢和貯存程序。必須使用經(jīng)國家有關(guān)部門批準(zhǔn)的試劑和儀器.SOP應(yīng)現(xiàn)行有效及便于使用。,41,儀器設(shè)備的維護(hù)和校準(zhǔn)SOP,責(zé)任人維護(hù)和校準(zhǔn)的基本方面：光路、濾光片、波長、加熱模塊的清潔、具體的校準(zhǔn)點(diǎn)選擇（如加樣器的校準(zhǔn)體積點(diǎn)選擇、溫度計(jì)的校準(zhǔn)溫度點(diǎn)選擇等）、維護(hù)和校準(zhǔn)的具體方法。校準(zhǔn)合格的判斷標(biāo)準(zhǔn) 維護(hù)和校準(zhǔn)的間隔時間,42,試劑和消耗品的質(zhì)檢 SOP,試劑質(zhì)檢的基本方面，

18、如試劑的抗干擾能力（主要是針對提取試劑），即對溶血、脂血標(biāo)本擴(kuò)增抑制作用的了解。可通過自行制備含已知量病毒核酸的不同程度溶血或脂血的標(biāo)本進(jìn)行質(zhì)檢。如為定量檢測試劑，還應(yīng)包括檢測的重復(fù)性、線性范圍等的質(zhì)檢。如為定性檢測試劑，則應(yīng)重點(diǎn)考察測定下限，可用系列稀釋的含已知量靶核酸的血清標(biāo)本進(jìn)行。 核酸提取用離心管質(zhì)檢的基本方面。 帶濾心吸頭的質(zhì)檢主要是濾心的密封性和抑制反應(yīng)的因素。,44,標(biāo) 本 管 理,本章包括五條。建立唯一編號識別系統(tǒng)

19、，避免標(biāo)本混淆；標(biāo)本接收時的狀態(tài)記錄；標(biāo)本的適用性和充分性；標(biāo)本貯存的標(biāo)準(zhǔn)操作程序及貯存溫度控制措施;標(biāo)本接收及安全處置程序；維護(hù)實(shí)驗(yàn)室誠實(shí)性的必要措施。,臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收和保存 SOP,特定標(biāo)本采集的具體方法步驟 明確規(guī)定標(biāo)本的采集容器要求 明確標(biāo)本的采集量 明確標(biāo)本采集后送到實(shí)驗(yàn)室檢測所能容許的最大時間間隔，亦即標(biāo)本采集后，應(yīng)在多長時間內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室 明確標(biāo)本采集后，在送至實(shí)驗(yàn)室檢測前的保存方式和條件 明

20、確標(biāo)本從采集處運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室過程中所要求的運(yùn)送條件 明確標(biāo)本接收時，簽收的程序、拒收的標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)本唯一編號的規(guī)則 規(guī)定標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的短期（應(yīng)有具體時間）和長期（應(yīng)有具體時間）保存條件和要求,46,47,實(shí)驗(yàn)記錄及其管理 SOP,日常檢驗(yàn)過程中應(yīng)記錄的基本內(nèi)容的規(guī)定，如儀器設(shè)備操作、維護(hù)和校準(zhǔn)過程及有關(guān)數(shù)據(jù)；檢驗(yàn)試劑來源和批號；檢驗(yàn)標(biāo)本的來源和唯一編號；試劑的配制；實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件的控制記錄；實(shí)驗(yàn)室清潔的記錄；質(zhì)控的記錄；原始檢測數(shù)據(jù)及其推

21、導(dǎo)記錄等 對實(shí)驗(yàn)記錄者的簽名方式的規(guī)定和要求 實(shí)驗(yàn)記錄管理的基本方面：指定專門的管理人；有專門的保存處如柜子等；記錄的登記歸檔方法；記錄的借閱及銷毀記錄；記錄保存的時間；電子記錄的備份保存具體方法及保存時間等,報 告,檢測結(jié)果的報告應(yīng)準(zhǔn)確、清晰和客觀；定性測定報告“陰性”或“陽性”；定量測定則以拷貝數(shù)/ml或IU/ ml報告；避免二者之間的混淆；每份報告應(yīng)包括以下信息：標(biāo)題、唯一標(biāo)識、檢測標(biāo)本說明、標(biāo)本特性和狀態(tài)、標(biāo)本接收

22、日期和檢測日期、檢測方法、檢測和校核人員簽字及發(fā)出日期、參考結(jié)果或范圍；如對報告有效性有疑問，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)立即通知臨床相關(guān)科室予以改正；用電話、傳真、電子郵件報告結(jié)果時的保密原則。,50,報 告？,通常報告存在的問題： 唯一標(biāo)識、標(biāo)本特性和狀態(tài)、標(biāo)本接收日期、檢測方法、校核人員簽字,51,52,室內(nèi)質(zhì)量控制 SOP,明確室內(nèi)質(zhì)控物（陽性和陰性）的來源及濃度 明確所選用的質(zhì)控方法 明確失控的判斷標(biāo)準(zhǔn)或所采用的失控規(guī)則

23、 明確失控后的分析及處理措施,參加室間質(zhì)量評價 SOP,明確規(guī)定室間質(zhì)評樣本的接收記錄方式、保存條件及實(shí)驗(yàn)編號規(guī)則 明確室間質(zhì)評樣本的檢測流程，要強(qiáng)調(diào)的是，室間質(zhì)評樣本應(yīng)以與臨床標(biāo)本相同的方式處理和檢測 明確室間質(zhì)評樣本的報告流程，即填寫、復(fù)核和簽發(fā)如何進(jìn)行，由誰負(fù)責(zé) 明確對返回結(jié)果的分析流程和責(zé)任人 明確室間質(zhì)評檢測失敗的原因分析流程 明確如果測定準(zhǔn)確性出現(xiàn)問題后，如何針對性采取措施的流程,54,55,,,,56,,57,

24、投訴處理 SOP,明確投拆第一接觸人對投拆的處理流程，即如何記錄、如何針對相關(guān)投訴的進(jìn)一步處理程序、是否需要報告和如何報告、以及如何向投拆人返回處理意見等?？蓪⑼对V分為不同類如對檢驗(yàn)結(jié)果正確性、服務(wù)態(tài)度、報告單填寫錯誤等分別編寫處理流程 投拆有效時的如何改進(jìn)和采取何種措施的具體流程。應(yīng)非常具體并具有可操作性,58,實(shí)驗(yàn)室的日常工作管理,工 作 項(xiàng) 目 核 查 點(diǎn)水

25、浴箱、微量恒溫器（加熱模塊） □校準(zhǔn)及記錄溫度 次氯酸鈉溶液 □新鮮配制生物安全柜 □先起動運(yùn)行30分鐘后再開始工作 室內(nèi)質(zhì)控 弱陽性質(zhì)控（定性）

26、 □有 低、中、高濃度質(zhì)控（定量） □有 陰性質(zhì)控：原樣本 □有 經(jīng)歷提取過程的空管 □有 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液管 □有實(shí)驗(yàn)臺面

27、 □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔 □紫外照射加樣器、離心機(jī)

28、 □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔實(shí)驗(yàn)室各區(qū) □遵循單一工作流向

29、 □紫外照射,59,臨床PCR檢驗(yàn)流程記錄表 檢驗(yàn)日期 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 擴(kuò)增儀中保存文件名： 使用說明：1．本記錄表須嚴(yán)格遵循試劑準(zhǔn)備區(qū)?標(biāo)本制備區(qū)?擴(kuò)增區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)）單一流向移動，嚴(yán)禁逆向移動。2．各項(xiàng)工作執(zhí)行后，在相應(yīng)敘述前的“?”內(nèi)打“?”。3．本記錄表最后與

30、相應(yīng)的標(biāo)本接收記錄等歸檔保存于擴(kuò)增區(qū)的專用文件柜內(nèi)，以備查找。,實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備? 試劑在有效期內(nèi) ? 擴(kuò)增儀、加樣器和溫度計(jì)在校準(zhǔn)的有效 1 期內(nèi)? 生物安全柜的濾膜在使用有效期內(nèi) ? 消毒溶液在有效期內(nèi)? 沖眼器內(nèi)無菌生理鹽水在有效期內(nèi) ? 離心管、帶濾心吸頭質(zhì)檢合格

31、 操作者：,60,試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）實(shí)驗(yàn)前 ： ? 打開通風(fēng)設(shè)備 ? 實(shí)驗(yàn)臺面清潔（水或70%酒精擦拭）? 冰箱溫度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷凍室（?18℃?2℃）

32、 ℃? 實(shí)驗(yàn)室溫度： ℃（允許范圍：10~30℃）；相對濕度： （允許范圍：30%~70%）PCR試劑來源： （可直接列出有關(guān)廠家名稱） 批號： 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 本次實(shí)驗(yàn)用量： 人份，剩余量： 人份。其他有關(guān)試劑配制：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升

33、；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制4％NaOH溶液 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制 毫升；? 其他： 儀器設(shè)備使用：離心機(jī)：? 正常 ? 不正常 振蕩器：? 正常 ? 不正

34、常實(shí)驗(yàn)后：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺面、地面、加樣器和離心機(jī)，并進(jìn)行紫外照射30分鐘以上。? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者：,61,標(biāo)本制備區(qū)（2區(qū)）實(shí)驗(yàn)前： ? 打開通風(fēng)設(shè)備 ? 實(shí)驗(yàn)臺面清潔（水或70

35、%酒精擦拭）? 冰箱（柜）溫度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷凍室（?18℃?2℃） ℃? 實(shí)驗(yàn)室溫度： ℃（允許范圍：10~30℃）；相對濕度： （允許范圍：30%~70%）陽性室內(nèi)質(zhì)控物來源： 濃度及批號： 擴(kuò)增位置： 陰性室內(nèi)質(zhì)控物來源： 批號：

36、 擴(kuò)增位置： 所取理的標(biāo)本（對應(yīng)標(biāo)本接收的唯一編號）及擬擴(kuò)增位置：1917252101826311192741220285132129614223071523318162432核酸提取及加樣過程：按XXX（列出編號）SOP進(jìn)行。儀器設(shè)備使用： 生物安全柜：? 正常 ? 不正常

37、 恒溫儀溫度校準(zhǔn)： ℃離心機(jī)：? 正常 ? 不正常 振蕩器：? 正常 ? 不正常實(shí)驗(yàn)后：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺面、地面及儀器設(shè)備。? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者：,62,63,64,姓 名

38、 性 別 病歷號 采集時間 接收時間 標(biāo)本特性 拒收原因 ?男 ?女 月 日 時 月 日 時 ?全血 ? （列出原因號） ?男 ?女

39、 月 日 時 月 日 時 ?全血 ? （列出原因號） ? ? ?

40、?男 ?女 月 日 時 月 日 時 ?全血 ? （列出原因號） 標(biāo)本拒收原因：1．患者姓名不符。 2．標(biāo)本容器為非不含任何添加劑的真空采血管。3．采血量低于2 ml。 4． 標(biāo)本采用肝素抗

41、凝。5. 容器破損。 6．標(biāo)本采集后送檢時間超過6小時。7．標(biāo)本重度溶血。 8．標(biāo)本脂血。9．標(biāo)本不正確。 10．其他：,臨床PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本拒收記錄,65,分析你已做的,每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析 表象與真象多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的綜合分析 趨勢的內(nèi)在含義儀器設(shè)備的使用情況分析 維護(hù)與校準(zhǔn)周期的有效性,66,技術(shù)驗(yàn)收的其它內(nèi)容,就有關(guān)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理方面與具體工作有關(guān)的內(nèi)容進(jìn)

42、行口試和/或筆試；現(xiàn)場測試多為已知HBV DNA和/或HCV RNA血清盤，看實(shí)際檢測和結(jié)果報告。,67,驗(yàn)收基本程序,材料初審：實(shí)驗(yàn)室設(shè)置、人員、儀器設(shè)備、試劑、標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）文件驗(yàn)收準(zhǔn)備：給擬委派專家發(fā)出技術(shù)驗(yàn)收任務(wù)書、被驗(yàn)收單位發(fā)出驗(yàn)收通知，由省臨床檢驗(yàn)中心協(xié)調(diào)?，F(xiàn)場驗(yàn)收,68,實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員資格審定,衛(wèi)生技術(shù)人員資格證書 有資質(zhì)單位培訓(xùn)證書,69,70,實(shí)驗(yàn)室的日常工作管理,工 作 項(xiàng) 目

43、 核 查 點(diǎn)水浴箱、微量恒溫器（加熱模塊） □校準(zhǔn)及記錄溫度 次氯酸鈉溶液 □新鮮配制生物安全柜 □先起動運(yùn)行30分鐘后再開始工作 室內(nèi)質(zhì)控 弱陽性質(zhì)控（

44、定性） □有 低、中、高濃度質(zhì)控（定量） □有 陰性質(zhì)控：原樣本 □有 經(jīng)歷提取過程的空管 □有 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液管

45、 □有實(shí)驗(yàn)臺面 □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔

46、 □紫外照射加樣器、離心機(jī) □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔實(shí)驗(yàn)室各區(qū)

47、 □遵循單一工作流向 □紫外照射,71,驗(yàn)收原則－抽樣,對實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員采用抽樣問詢對實(shí)驗(yàn)室的記錄采取抽樣檢查的方法進(jìn)行抽取有代表性的部份進(jìn)行檢查,抽樣存在有不全面的風(fēng)險,72,驗(yàn)收方法,觀察（實(shí)驗(yàn)室設(shè)置、儀器設(shè)備、環(huán)境和實(shí)驗(yàn)操作等是否規(guī)范）； 審核文件（實(shí)驗(yàn)室SOP的規(guī)范和可操作性）

48、 詢問（考核實(shí)驗(yàn)室工作人員對實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范化的熟悉程度）或筆試（現(xiàn)場筆試） 現(xiàn)場實(shí)驗(yàn)（要求其按常規(guī)檢測臨床標(biāo)本的程序進(jìn)行，看其是否按實(shí)驗(yàn)室所制定的程序進(jìn)行和記錄）。,73,觀 察,實(shí)驗(yàn)室設(shè)置實(shí)驗(yàn)室環(huán)境儀器、用具實(shí)驗(yàn)操作制度措施落實(shí)等,74,審核－文件,制度程序（包括SOP）檔案記錄,75,詢問－溝通,有關(guān)硬件有關(guān)軟件,76,考核－口試或筆試,對實(shí)驗(yàn)室制度、程序等熟悉程度，如 有患者家屬要求電話告知

49、XXX丙肝的PCR檢測結(jié)果，你會怎樣去做？,對實(shí)驗(yàn)技術(shù)的熟悉程度，如 為什么在HCV RNA檢測中要加水對照？,77,現(xiàn)場實(shí)驗(yàn),考核過程考核結(jié)果,78,現(xiàn)場驗(yàn)收核心,實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及儀器設(shè)備配備的科學(xué)性、合理性和充分性；文件制定的科學(xué)性、合理性和可操作性；實(shí)際運(yùn)行情況和相關(guān)記錄；,79,其它有關(guān)技術(shù)驗(yàn)收表格,驗(yàn)收評審意見匯總表整改要求需要說明的其它問題,80,現(xiàn)場驗(yàn)收后的意見交換,對于在驗(yàn)收過程中發(fā)現(xiàn)的問題與實(shí)驗(yàn)

50、室負(fù)責(zé)人交換意見驗(yàn)收組將擬定的最后結(jié)論向被驗(yàn)收實(shí)驗(yàn)室通報。,81,缺陷分布表,1.實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和設(shè)備4.4%2.設(shè)備和環(huán)境18.1%3.人員7.8%4.設(shè)備管理19.9%5.檢測方法12.5%,6.標(biāo)本管理14.5%7.記錄9.3%8.報告3.7%9.質(zhì)量控制5.9%10.抱怨3.9%,82,主要缺陷,2.1 工作區(qū)，能源，溫控，通風(fēng)等占22項(xiàng)2.5 試劑管理，生物防護(hù)等占31項(xiàng)4.2 加樣器，擴(kuò)增儀和酶標(biāo)儀等無標(biāo)識

51、占37項(xiàng)4.3 加樣器，擴(kuò)增儀和酶標(biāo)儀等檔案不全占34項(xiàng)5.1 質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)程序不完善占31項(xiàng)6.2 標(biāo)本收集、處理、儲存或安全處置程序不健全占31項(xiàng)7.1 適合自身實(shí)際困難規(guī)章制度不完善占27項(xiàng)9.1 質(zhì)量控制操作程序不健全占23項(xiàng),83,存在的問題,對設(shè)置要求理解不夠深入文件準(zhǔn)備不夠充分文件容易出現(xiàn)雷同文件寫的“太好”，給實(shí)施帶來困難,84,解決方法,統(tǒng)一認(rèn)識改進(jìn)認(rèn)可方式規(guī)范工作程序跟蹤技術(shù)發(fā)展,85,統(tǒng)一認(rèn)識,實(shí)

52、驗(yàn)室分區(qū)－使用全自動擴(kuò)增檢測儀的原則上有獨(dú)立的三間房即可；冰箱主要控制適宜溫度；不同區(qū)域的溫濕度監(jiān)測、能源保證要與實(shí)驗(yàn)要求相一致；紫外燈的目的是保證有效消毒；,86,改進(jìn)認(rèn)可方式,實(shí)驗(yàn)室可試運(yùn)行3個月后，再派專家組現(xiàn)場審核由原有審核實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和文件基礎(chǔ)上，增加對實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行狀態(tài)的審核；,87,缺陷分類,嚴(yán)重缺陷1、實(shí)驗(yàn)室設(shè)置不符合要求2、人員未經(jīng)過培訓(xùn)3、儀器、試劑未經(jīng)批準(zhǔn)4、未參加室間質(zhì)量評價5、未開展室內(nèi)質(zhì)量控制,8