第5章-cellquest-pro軟件

1、第5章CellQuestPro軟件軟件5.1概述概述CellQuestPro是從流式細胞儀上進行數(shù)據(jù)獲取和分析的通用軟件。使用者可由CELLQuestPro軟件來從事儀器之調(diào)整與設(shè)定，可用以進行細胞檢品的檢驗測量，CELLQuestPro軟件同時是細胞儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)內(nèi)的必要軟件。在數(shù)據(jù)分析方面，CELLQuestPro軟件提供使用者雙色或多色分析功能，可以定量各類細胞族群的百分比，細胞受染的熒光強度，也可以制作一維直方圖、二維散點圖、

2、二維密度圖、二維等高線圖、及三維圖譜，并且可作文字處理的中間插圖，無需再剪貼拼湊，適用于論文發(fā)表，及會議報告使用。CELLQuestPro軟件功能強大且靈活，并與Macintosh的多任務環(huán)境完全兼容。5.1.1收取收取(Acquisition)即收取并儲存流式細胞儀上數(shù)據(jù)的過程。在收取前，需用您的樣本來最佳化儀器的條件。5.1.2分析分析(Analysis)將收取的數(shù)據(jù)進行進一步分析。在分析時，將讀取數(shù)據(jù)文件，然后可畫Region(區(qū)

3、)、設(shè)置Marker(界限)、和進行統(tǒng)計。在CellQuest中，可畫單參數(shù)直方圖、雙參數(shù)散點圖、密度圖和等高圖。5.1.3從收取到分析從收取到分析(Acquisition?Analysis)在CellQuest中，從收取到分析的功能允許在數(shù)據(jù)收取結(jié)束后可從收取圖轉(zhuǎn)換到分析圖。剛剛收取的數(shù)據(jù)及在收取時限定的格式出現(xiàn)在圖中，如RegionMarker等。5.2工具欄工具欄工具欄在CellQuestPro軟件啟動后就會出現(xiàn)，見圖一。工具欄可

4、用來畫圖、選擇區(qū)域、設(shè)置標尺和輸入文本等。選擇點擊，可選擇一個或多個目標，進行改大小或移動。C：等高圖(ContourPlot)，點擊，可畫等高圖，可自定義圖的大小。3D：3維圖，點擊，可畫3維圖，可自定義圖的大小。H：直方圖，點擊，可畫直方圖，可自定義圖的大小。D：密度圖，點擊，可畫密度圖，可自定義圖的大小。d：點圖：點擊，可畫點圖，可自定義圖的大小。H：直方圖marker：點擊，可在直方圖上定位marker的左邊界和右邊界。Q：象限

5、marker：點擊，可在點圖、密度圖和等高圖上定位marker?？s?。狐c擊，然后點擊圖，將放大圖縮小到原大小。放大：點擊，然后點擊圖，將縮小圖放大到原大小。圖1工具欄按鈕工具欄按鈕在實驗文件中，有3種圖：獲取、分析和獲取到分析。一個實驗文件可含上述3種圖的組合，但獲取圖不能用來分析，分析圖不能用來獲取。5.3.3儀器條件文件儀器條件文件實驗條件文件中包括儀器的電壓，閾值，補償?shù)葍x器條件。這些條件也已經(jīng)自動保存在FCS數(shù)據(jù)文件中的文檔部分

6、。也可以單獨保存成一個儀器條件文件。5.3.4統(tǒng)計文件統(tǒng)計文件所有直方圖、區(qū)域、門和象限統(tǒng)計結(jié)果都可以輸出成表符限制性文檔。這些輸出文件可用于將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)移到其他應用軟件中，如電子表格或數(shù)據(jù)庫。5.4CellQuestPro的儀器控制的儀器控制在CellQuestPro軟件中，儀器的控制選單位于Cytometer菜單中。用CellQuestPro進行3色分析中，應用陰性對照和調(diào)補償用對照進行儀器條件設(shè)置。陰性對照可用不加抗體組或同型對照組。

7、它將用于調(diào)節(jié)FSC、SSC探測器、FSC閾值、設(shè)淋巴細胞區(qū)region、確認FL1FL2FL3的設(shè)置及象限設(shè)置。調(diào)補償用對照包括單陽性熒光試劑，如包括下列試劑：CD8FITC組、CD19PE組、CD3PerCP組。調(diào)節(jié)探測器和放大器可使所需信號出現(xiàn)在數(shù)據(jù)圖的適當位置。細胞通過激光束時產(chǎn)生光信號，然后轉(zhuǎn)換成電信號，并在散點圖上相對應于一個道值。依據(jù)所選的分辨率的不同，道值有0255、01023不同范圍。5.4.1探測器（探測器（Detec

8、t）在流式細胞儀中有二種探測器：光電二極管和光電倍增管(PMTs)。光電二極管對光的敏感度低于光電倍增管。探測器的調(diào)節(jié)菜單位于Cytometer菜單下DetectAmps，調(diào)節(jié)窗口如下圖所示。光電二極管用于探測FSC，因為FSC是強信號，可通過電壓而選擇對FSC信號的不同放大。E00：將信號放大1(100)倍。E01：將信號放大10(101)倍。E02：將信號放大100(102)倍。E03：將信號放大1000(103)倍。E1：將信號放