乙酰膽堿酯酶的分離純化及固定化技術研究.pdf

1、乙酰膽堿酯酶(AChE)是一種重要的生物功能物質。它能夠選擇性地催化底物乙酰膽堿水解，且其催化活性能被有機磷或氨基甲酸酯類農藥所抑制。利用這一特性，針對有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留測定的膽堿酶抑制快速檢測技術近年來越來越受到重視。但是，乙酰膽堿酯酶的來源問題一直是困擾農藥殘留快速檢測技術發(fā)展的一個重要因素。如果采用進口酶源不但價格較昂貴，而且到貨周期較長，難以滿足檢測過程的需求。此外，由于游離酶性質不穩(wěn)定，極易失活，不能重復使用，只有固

2、定化酶才具有使用價值。本文主要對AChE的分離純化及固定化技術進行了研究。 首先，本文以胎牛血清為乙酰膽堿酶源，對其進行了分離純化技術研究。通過采用硫酸銨逐級沉淀、葡聚糖凝膠柱層析、DEAE纖維素柱層析三步分離純化過程，可得到單點純的乙酰膽堿酯酶，表現(xiàn)在凝膠電泳上即由硫酸銨沉淀液的4條譜帶減少至一條譜帶。 其次，本文對乙酰膽堿酯酶的固定化技術進行了研究。采用交聯(lián)法對酶進行固定是一種廣泛采用的固定化方法，本文對影響固化

3、乙酰膽堿酯酶活性的固定化條件，諸如pH值、BSA、GA、明膠的最佳使用濃度進行了實驗研究。經(jīng)交聯(lián)法固定的乙酰膽堿酯酶，在室溫下放置6個月以后酶活性仍可保持60％以上。但是采用交聯(lián)法對酶進行固定化過程中必須使用雙功能試劑戊二醛，此試劑本身會對乙酰膽堿酯酶的活性造成較大傷害，所以經(jīng)固定化以后酶的活力回收率較低。目前，一種光交聯(lián)試劑聚乙烯醇苯乙烯吡啶(PVA-SbQ)在酶的固定化過程中倍受青睞，本文在實驗室合成出PVA-SbQ。經(jīng)PVA-Sb