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1、,,藥物相關(guān)基因檢測(cè)在腎內(nèi)科的臨床應(yīng)用,中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院藥學(xué)部2017. 12. 26,“別嘌醇”致Stevens-Johnson綜合征 (剝脫性皮炎),,,每年220萬患者出現(xiàn)藥物不良反應(yīng)每年需花費(fèi)1770億美元藥物撤離市場(chǎng)的最主要原因之一導(dǎo)致5%住院率每年70萬人傷殘或死亡排在美國(guó)住院病人死因的第6位59%藥物不良反應(yīng)由藥物代謝酶的遺傳多態(tài)導(dǎo)致,National Vital Statistics Reports,
2、Vol. 56, No. 10, March 7, 2008, 2001United States Data,藥物不良反應(yīng)很嚴(yán)重,藥物治療個(gè)體反應(yīng)差異是普遍現(xiàn)象,使用相同劑量后體內(nèi)藥物濃度和總量不同,藥物有效性的個(gè)體差異,,降壓藥的劑量范圍,降糖藥的劑量范圍,,年齡老年,兒童,新生兒,,性別,體重/身高,,合并癥,病程,,,,,,,,影響治療效果的因素,器官功能肝臟, 腎臟, 心臟,環(huán)境因素食物 /吸煙 / 合并用藥,無效,安全
3、有效,毒性,相同治療方案,,決定性因素??!,藥物效應(yīng)和毒性差異,基因組,基因多態(tài)性,,,,,,,,,藥物靶點(diǎn),藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體,藥物代謝酶,,,基因,,基因相關(guān)的劑量效應(yīng),與藥物作用相關(guān)蛋白的基因多態(tài)性多有劑量效應(yīng),精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的演化,,精準(zhǔn)醫(yī)學(xué):個(gè)體化和人人受益,59%藥物不良反應(yīng)由藥物代謝酶的遺傳多態(tài)導(dǎo)致,,,CG,,TA,,SNP,CYP2C9*2,No enzymatic activity,,430C>T (Arg144Cys)
4、,Cys,個(gè)體差異的遺傳基礎(chǔ)-單核苷酸多態(tài)性(SNP),90%以上的人類變異是由SNP引起導(dǎo)致人類藥物代謝和反應(yīng)差異的主要原因,,G?T突變,遺傳變異的類型,...C C A T T G A C...,...C C A T T G A C...,…G G T A A C T G...,…G G T A A C T G...,...C C A T T G A C...,...C C G T T G A C...,…G G T A A C
5、 T G...,…G G C A A C T G...,...C C G T T G A C...,...C C G T T G A C...,…G G C A A C T G...,…G G C A A C T G...,wt/wt野生型純合子,SNPs的基因型,,,,X,X,X,wt/mut野生型雜合子,mut/mut突變純合子,遺傳因素引起個(gè)體差異的作用環(huán)節(jié),通過檢測(cè)藥物相關(guān)基因,預(yù)先將患者分為:(1)藥物的應(yīng)答組或無應(yīng)答
6、組(2)藥品不良反應(yīng)的高風(fēng)險(xiǎn)組或低風(fēng)險(xiǎn)組(3)設(shè)計(jì)個(gè)體化給藥方案(選擇合適的藥品,計(jì)算給藥劑量),,不良反應(yīng)最小療效最佳,,精準(zhǔn)用藥,科室相關(guān)藥物,阿司匹林/GP IIIa PlA2 、PEAR1、PTGS1、GP1BA、LTC4S、GSTP1別嘌醇/HLA-B*58013.他克莫司(FK506)/CYP3A5*34.糖皮質(zhì)激素沖擊(甲強(qiáng)龍等)/PAI-1(4G/5G),別嘌醇,別嘌醇,別嘌醇,別嘌醇,他克莫司,他克莫司,病
7、例,病例,病例,檢驗(yàn)結(jié)果,結(jié)果解讀,啟示,糖皮質(zhì)激素沖擊,長(zhǎng)期接受糖皮質(zhì)激素治療或接受大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊治療的患者中9%-40%可能會(huì)發(fā)生股骨頭壞死,同時(shí)伴有糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松。研究發(fā)現(xiàn),PAI-1基因的4G等位基因發(fā)生股骨頭壞死的風(fēng)險(xiǎn)比5G等位基因高2~3倍。ABCB1基因型的3435C比3435T發(fā)生股骨頭壞死的風(fēng)險(xiǎn)也高2~3倍。相關(guān)藥物基因:1、纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1):內(nèi)源性纖溶活性的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,
8、2、ABCB1 3435:p糖蛋白家族,藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,MDR1基因,每日劑量、激素暴露時(shí)間與股骨頭壞死有著密切關(guān)系,PAI-1 4G5G基因型頻率與股骨頭壞死(%),糖皮質(zhì)激素沖擊,ABCB1 3435CT基因型頻率與股骨頭壞死(%),注:CT、TT者,均為PAI-1 4G5G,糖皮質(zhì)激素沖擊,糖皮質(zhì)激素沖擊,基因型風(fēng)險(xiǎn)度與股骨頭壞死發(fā)生概率,糖皮質(zhì)激素沖擊,技術(shù)背景,正在應(yīng)用的基因檢測(cè)技術(shù),? Southern blot分析 ?
9、PCR與實(shí)時(shí)熒光PCR ? 基因芯片(aCGH/CMA) ? 熒光原位雜交(FISH) ? Sanger測(cè)序 *? 新一代測(cè)序 (NGS),實(shí)驗(yàn)室選擇試驗(yàn)平臺(tái),目前實(shí)驗(yàn)室選擇的檢測(cè)平臺(tái)是屬于一代測(cè)序的數(shù)字熒光雜交測(cè)序。,優(yōu)點(diǎn):1.檢測(cè)速度快。2.非擴(kuò)增,抗污染能力強(qiáng),試驗(yàn)準(zhǔn)確。對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求較低。3.操作方便,無需提取基因組,白細(xì)胞膜裂解后即可測(cè)序。,缺點(diǎn):1.無法檢測(cè)長(zhǎng)序列。2.無法定量,只能檢測(cè)以SNP為主的定性。
10、3.只能檢測(cè)已知突變,由于無PCR步驟,DNA鏈無延伸。無法檢測(cè)未知突變。,我院開展藥物基因檢測(cè)情況,TL998A熒光檢測(cè)儀 基本原理:用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針,按照堿基互補(bǔ)的原則,與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合,形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。 具有快速、檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)、雜交特異性高和可以多重染色等特點(diǎn)。,初期對(duì)所有位點(diǎn)進(jìn)行準(zhǔn)確性驗(yàn)證,與Sanger法進(jìn)行比較,一致性為99%。,各個(gè)平臺(tái)實(shí)驗(yàn)室醫(yī)院每年按期參與衛(wèi)生部與上海臨床
11、檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)評(píng),目前為止所有醫(yī)院參與檢測(cè)次數(shù)達(dá)300次,通過率超過98%。,2012年1月起至今,200余家三甲醫(yī)院采用數(shù)字熒光分子雜交測(cè)序技術(shù),建立個(gè)體化治療基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室,同時(shí)輔助實(shí)驗(yàn)室人員開展藥物基因組學(xué)服務(wù)工作。,國(guó)內(nèi)諸多三甲醫(yī)院的選擇,明確的操作SOP,根據(jù)設(shè)備及試劑特性,制定相應(yīng)的操作SOP。保證各個(gè)實(shí)驗(yàn)室操作,質(zhì)控統(tǒng)一,可控。定期對(duì)所有實(shí)驗(yàn)室設(shè)備進(jìn)行維護(hù)保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。,樣本運(yùn)送溫度和時(shí)間的要求。DNA檢測(cè)樣本,可室
12、溫下運(yùn)送, 建議8h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。如所需運(yùn)送時(shí)間較長(zhǎng),則應(yīng)將樣本置于冰上,必須保證樣本與冰屑充分接觸, 且冰屑應(yīng)達(dá)到樣本的高度,建議采集后4h內(nèi)送到。 樣本保存溫度和時(shí)間的要求。用于DNA檢測(cè)時(shí),樣本可在2~8℃ 保存72h。如果樣本中含有紅細(xì)胞,應(yīng)盡可能去除紅細(xì)胞后,再進(jìn)行凍存。 DNA:如果純化后的DNA無DNA酶的污染,則可在TE緩沖液中室溫保存26周;2-8℃保存一年;-20℃保存7年;-70℃保存7年以上。懷疑可能
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