應(yīng)用PCR-DGGE分析磁性流化床生物脫硫反應(yīng)器的菌群多樣性.pdf

1、控制環(huán)境污染已成為當(dāng)今各級(jí)政府和學(xué)術(shù)界面臨的重大課題，微生物法去除SO<,2>是一種新型簡(jiǎn)單高效的處理方法，這種方法主要是靠脫硫系統(tǒng)中生物膜上的硫酸鹽還原菌菌群和無色硫細(xì)菌菌群起作用，但是硫酸鹽還原菌和無色硫細(xì)菌都包括很多的菌種，究竟該生物膜上有多少菌種，有哪些優(yōu)勢(shì)菌種，這為進(jìn)一步闡明微生物脫硫機(jī)理、更好的應(yīng)用和推廣微生物脫硫方法提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究生物膜的微生物多樣性，傳統(tǒng)方法已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足。PCR-DGGE技術(shù)是以聚合

2、酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為基礎(chǔ)的變性梯度凝膠電泳，并且可以和傳統(tǒng)方法、雜交技術(shù)、克隆測(cè)序技術(shù)等結(jié)合起來，從而全面認(rèn)識(shí)微生態(tài)的組成。DGGE主要是利用含有濃度線形遞增的變性劑的聚丙烯酰胺凝膠電泳來分離DNA片段，它的分辨精度比瓊脂糖電泳和一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳更高，甚至可以檢測(cè)到一個(gè)核苷酸水平的差異。 本研究采用CTAB法抽提菌群的總DNA，然后擴(kuò)增16S rDNA的V3區(qū)，然后進(jìn)行DGGE分離不同的菌種，進(jìn)行克隆測(cè)序以及系統(tǒng)發(fā)育分析。

3、 本研究首次應(yīng)用PCR-DGGE技術(shù)分析不同時(shí)期微生物煙氣脫硫兩個(gè)反應(yīng)器的生物膜多樣性，并進(jìn)一步對(duì)部分DGGE條帶進(jìn)行了克隆測(cè)序，并繪制了進(jìn)化樹。DGGE結(jié)果表明在厭氧反應(yīng)器的啟動(dòng)期含有五個(gè)菌種，負(fù)荷運(yùn)行期和穩(wěn)定運(yùn)行期都可觀察到四個(gè)菌種，其中兩個(gè)為優(yōu)勢(shì)種；在好氧反應(yīng)器的啟動(dòng)期含有八個(gè)菌種，負(fù)荷運(yùn)行期和穩(wěn)定運(yùn)行期都可觀察到六個(gè)菌種，其中各含有兩個(gè)優(yōu)勢(shì)種。通過對(duì)運(yùn)行穩(wěn)定期的條帶進(jìn)行回收、克隆、測(cè)序，利用Blast軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果在GenBa

4、nk中進(jìn)行了同源性對(duì)比，利用ClustalX1.83和Mega軟件，通過鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。結(jié)果表明與條帶 S3-2 相近的是 Uncultured bacterium geneclone：BSA2B-04，相似性達(dá)到 98.84％；條帶 S3-3 相近的是Iron-reducing enrichment clone Cl-A2，相似性達(dá)到 100％；與條帶S3-4 相近的是 Uncultured bacterium mlel-9，相