版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、胃腸道菌群是機體的重要組成部分,其種類繁多,數(shù)量龐大,約有30多個屬500多種細菌,大約1×1014個活細菌,比機體細胞總數(shù)還多10倍。正常菌群是動物生存的必要條件,其結(jié)構多樣性及種群結(jié)構的變化與機體的健康和疾病的發(fā)生、發(fā)展有密切關系。PCR-DGGE是基于16SrDNA的可變區(qū)PCR擴增的序列特異性熔鏈溫度不同進行分離的,并且可以檢測出序列中一個核昔酸的差異。因此通過該技術直接擴增16SrDNA的可變區(qū),構建DNA指紋圖譜,建立快速檢
2、測的分子分型平臺,能廣泛用于腸道復雜微生物區(qū)系菌群結(jié)構演替和多樣性分析研究,是目前應用于胃腸道菌群結(jié)構多樣性和種群結(jié)構變化研究的一種較為廣泛的分子生物學方法。 本文利用變性梯度凝膠電泳(DenaturingGardientGelElectrophoresis,DGGE)技術,對兩窩(A、B兩組)共16頭不同時間段(0、1、3、9、15、21、28、35日齡)健康仔豬的十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸中細菌菌群的結(jié)構多樣性和
3、動態(tài)變化進行了檢測,為今后對仔豬腸道菌群的進一步研究奠定一定的實踐基礎,本課題建立出一套適用于實驗室研究動物腸道細菌多樣性的DGGE檢測方案。首先應用DGGE技術分析仔豬腸道細菌的多樣性,了解仔豬腸道菌群的時空變化規(guī)律,并尋找出一部分優(yōu)勢菌群;然后對共有條帶和特殊條帶進行回收、克隆并測序,利用Blast工具將測序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫中的已知序列進行比對,找出與其同源性最高的DNA序列,并對序列進行了分析。 采用DGGE技術
4、分析細菌多樣性時,凝膠濃度為7.15%,變性劑梯度范圍在30%-60%之間,恒溫60℃,85V電泳約12h左右,DGGE帶譜的分離效果較好。結(jié)果表明:小豬在出生后數(shù)小時(吃初乳前)就可以檢測到有少量細菌定植腸道,隨著小豬日齡的增長,各個腸段細菌種類和數(shù)量也逐漸增多,至3日日齡時細菌種類和數(shù)量已相當豐富。隨后至9日齡、15日齡時小豬腸道內(nèi)細菌種類、數(shù)量逐漸變緩。至20日齡腸道內(nèi)細菌種類和數(shù)量有所增加,隨后28日齡又有所下降,至35日齡時各
5、個腸道細菌種類和數(shù)量逐漸趨于穩(wěn)定。其中十二指腸和空腸細菌種類和數(shù)量相對較少,盲腸和結(jié)腸最多。 通過對DGGE圖譜中一些共有以及特殊的條帶進行測序發(fā)現(xiàn):切膠回收的條帶所代表的細菌與現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫中的細菌有很高的同源性,大部分在90%以上,有的同源性甚至達到了100%。條帶A0-1與已鑒定的Clostridiumperfringens相似性為100%,表明仔豬出生數(shù)小時Clostridiumperfringens就已經(jīng)存在于仔豬的各段腸
6、道。A1-1與已鑒定的Escherichiacoli相似性為99%,表明仔豬出生一天后Escherichiacoli已經(jīng)成為各段腸道的優(yōu)勢菌群。此外在三日齡仔豬腸道內(nèi)檢測到Lactobacillusacidophilus和lactobacillusvaginalis。隨著仔豬日齡的增加,所能檢測的絕大部分都為不可培養(yǎng)細菌。說明在仔豬斷奶后期生長過程中,不可培養(yǎng)菌群、未經(jīng)鑒定的菌群和一些未知的菌群可能起重要作用。 在今后的研究中,
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人腸道菌群PCR-DGGE方法的建立及脾虛患者的研究.pdf
- PCR-DGGE法分析分娩方式對新生兒早期腸道菌群的影響.pdf
- PCR-DGGE對六種淡水魚類腸道菌群結(jié)構的比較研究.pdf
- 不同日齡仔豬腸道中TWEAK-Fn14表達規(guī)律研究.pdf
- 應用PCR-DGGE和rep-PCR技術對大鼠及成人肝硬化肝移植后腸道菌群多樣性的研究.pdf
- 利用PCR-DGGE技術檢測、鑒定乳酸菌.pdf
- PCR-DGGE技術在水牛瘤胃產(chǎn)甲烷古菌探索中的應用.pdf
- 基于PCR-DGGE指紋分析技術的不同低溫保鮮方法對魷魚品質(zhì)影響的研究.pdf
- 應用PCR-DGGE分析磁性流化床生物脫硫反應器的菌群多樣性.pdf
- PCR-DGGE和RT-PCR技術在赤潮藻檢測中的應用.pdf
- 應用PCR-DGGE和454焦磷酸測序分析兒童齲病相關口腔菌群多樣性.pdf
- 利用PCR-DGGE研究軍曹魚腸道和水環(huán)境的細菌群落.pdf
- 不同日齡仔豬胃腸道Obestatin蛋白含量及GHRL基因轉(zhuǎn)錄水平測定.pdf
- 采用PCR-DGGE方法測定枸杞多糖對小鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用.pdf
- 應用PCR-DGGE技術研究大麻漚麻系統(tǒng)中的細菌多樣性.pdf
- 主養(yǎng)草魚池塘三種混養(yǎng)模式下魚類消化道菌群PCR-DGGE比較.pdf
- 仔豬主要腸道菌群分布的研究和益生菌對仔豬生長發(fā)育及免疫功能的影響.pdf
- 應用PCr-DGGE分析添加菌劑對堆肥微生物群落多樣性的影響.pdf
- PCR-DGGE分析高溫制曲中細菌群落變化的研究.pdf
- 寡果糖對人源菌群仔豬腸道菌群結(jié)構和宿主代謝的影響.pdf
評論
0/150
提交評論