微波浸提草珊瑚黃酮的工藝研究-食品研究與開發(fā)

1、1八角內(nèi)生真菌的分離及其抗氧化活性初步研究八角內(nèi)生真菌的分離及其抗氧化活性初步研究李海云12，阮貴華2，李子院2（1.桂林理工大學(xué)廣西礦冶與環(huán)境科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，廣西，桂林，541004；2.桂林理工大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院，廣西，桂林，541004）摘要：摘要：采用組織貼片培養(yǎng)分離法，分別從八角果、葉、枝等健康組織中分離純化獲得24、32和23株內(nèi)生真菌。分別采用總抗氧化性能測定、DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)對79株內(nèi)生真菌抗氧化活性進(jìn)行了篩選。

2、結(jié)果表明，從八角果實(shí)和枝條中分離獲得的內(nèi)生真菌BGEF11和BJEF13發(fā)酵液具有較強(qiáng)的抗氧化活性，其總抗氧化性能分別達(dá)147.1111.87（μgVcmL）和148.1613.11（μgVcmL），對DPPH自由基清除率分別為84.84%和93.58%。經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定，BGEF11和BJEF13均為球毛殼菌。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：內(nèi)生真菌；八角；抗氧化；球毛殼菌IsolationAntioxidantActivitiesofEndophyti

3、cFungifromIlliciunVerumLIHaiyun12RUANGuihua2LIZiyuan2(1.GuangxiScientificExperimentCenterofMiningMetallurgyEnvironment，GuilinUniversityofTechnologyGuangxiGuilinChina5410042.CollegeofChemistryIlliciumverumantioxidantactiv

4、ityChaetomiumglobosum隨著人們健康意識的增強(qiáng)，天然抗氧化劑越來越得到重視。目前已在眾多天然植物中發(fā)現(xiàn)具有抗氧化活性物質(zhì)[12]，但由于植物資源有限、活性物質(zhì)含量較低、植物生長周期長、生長環(huán)境要求較苛刻等缺陷，從植物中提取天然抗氧化活性物質(zhì)受到很大的限制。在此背景下，植物內(nèi)生菌資源的開發(fā)開始受到人們的重視。內(nèi)生菌是指一類在其部分或全部生活史中存活于健康植物組織內(nèi)部，而不使宿主植物表現(xiàn)出明顯感染癥狀的微生物[3]。植物內(nèi)

5、生菌能產(chǎn)生多種活性物質(zhì)，具備多種生物學(xué)活性，而且具有微生物易培養(yǎng)、易控制，生長繁殖迅速，不受季節(jié)、氣候和地域的限制等優(yōu)點(diǎn)，是一類開發(fā)潛力巨大的生物資源。隨著國內(nèi)外對植物內(nèi)生菌理論研究的日益深人和技術(shù)方法的不斷改進(jìn)，其在生物制藥、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及發(fā)酵工業(yè)等領(lǐng)域的應(yīng)用前景非常廣闊，現(xiàn)已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)[45]。目前，已在鹽生海蘆筍[6]、蒺藜[7]、粉背雷公藤[8]、葛根[9]、銀杏[10]、木豆[11]及其他藥用植物[12]中分離出可產(chǎn)

6、抗氧化活性物質(zhì)的內(nèi)生菌。本文對廣西特色香料植物八角（Illiciumverum）內(nèi)生真菌進(jìn)行分離并對其抗氧化活性菌株進(jìn)行篩選，以期為廣西特色香料植物的深入開發(fā)利用提供新的思路。1材料與方法材料與方法1.1材料材料1.1.1植物樣品植物樣品八角果、枝、葉健康組織分別于2008年9月、2009年4月采自南寧高峰林場。1.1.2培養(yǎng)基培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL。液體培養(yǎng)基（PD）：馬鈴

7、薯200g，葡萄糖20g，水1000mL。1.1.3試劑試劑基金項(xiàng)目：廣西礦冶與環(huán)境科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心資助項(xiàng)目(KH2013YB013)，廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2012GXNSFAA053030）第一作者：李海云（1975—），男（漢族），副教授，研究生學(xué)歷，主要從事天然活性物質(zhì)研究。3從果實(shí)中分離出24株（占總分離菌株的30.4%，編號為BGEF01~24），從枝條中分離出32株（占總分離菌株的40.5%，編號為BJEF01~32），從葉中

8、分離出23株（占總分離菌株的29.1%，編號為BYEF01~23）。顯微鏡檢結(jié)果表明在PDA培養(yǎng)平板上，多數(shù)內(nèi)生真菌不產(chǎn)孢。產(chǎn)孢的菌株經(jīng)鑒定主要有：毛殼屬（Chaetomium）、毛霉屬（Muc）、鏈格孢屬（Alternaria）、曲霉屬（Aspergillus）、木霉屬（Trichoderma）等。2.2八角內(nèi)生真菌抗氧化活性菌株的篩選八角內(nèi)生真菌抗氧化活性菌株的篩選抗氧化活性是眾多天然活性物質(zhì)具有的生理活性之一，目前已建立多種抗氧化

9、活性體外評價(jià)方法，各種方法基于的原理不同。由于是體外評價(jià)方法，因此一般評價(jià)天然物質(zhì)的抗氧化活性時(shí)均需選擇至少兩種或兩種以上的體系進(jìn)行評價(jià)以獲得較為準(zhǔn)確的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)以篩選具有抗氧化活性菌株為目的，因此選擇總抗氧化性能和DPPH自由基清除性能兩個(gè)簡單易得的指標(biāo)對八角內(nèi)生真菌的抗氧化活性進(jìn)行評價(jià)。2.2.1八角內(nèi)生真菌發(fā)酵液總抗氧化活性八角內(nèi)生真菌發(fā)酵液總抗氧化活性按1.2.3方法測定各菌株發(fā)酵液乙酸乙酯萃取液的總抗氧化能力，結(jié)果見表1。表

10、1結(jié)果表明，79株內(nèi)生真菌總抗氧化能力各異，以抗壞血酸表征的總抗氧化活性明顯高于培養(yǎng)基空白對照的菌株有32株，約占總菌株的40%，其中中抗氧化活性高于50μgVcmL的菌株有11株，約占總菌株數(shù)的14%，其余菌株無抗氧化活性或抗氧化活性較弱。在所有菌株中，BGEF11和BJEF13表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗氧化能力，其總抗氧化活性分別為147.1111.87（μgVcmL）和148.1613.11（μgVcmL）。表1八角內(nèi)生真菌發(fā)酵液的總抗氧化活

11、性Table1TotalantioxidantactivityofthebrothofendophyticfungiisolatedfromIlliciumverum.菌株總抗氧化活性（μgVcmL）菌株號總抗氧化活性（μgVcmL）菌株總抗氧化活性（μgVcmL）菌株總抗氧化活性（μgVcmL）培養(yǎng)基空白9.970.95BGEF20——BYEF1612.011.01BJEF13148.1613.11BGEF0169.361.03BGE

12、F2110.600.68BYEF1769.061.04BJEF14——BGEF0223.131.22BGEF22——BYEF18——BJEF1528.321.35BGEF039.250.65BGEF23——BYEF1910.660.85BJEF1613.030.86BGEF0413.541.17BGEF2431.650.86BYEF2026.520.95BJEF178.950.64BGEF0523.911.53BYEF01——BYEF2

13、1——BJEF18——BGEF067.540.86BYEF02——BYEF22——BJEF19——BGEF07——BYEF0310.570.65BYEF2311.050.41BJEF20——BGEF0813.451.04BYEF045.510.84BJEF01——BJEF2148.491.82BGEF0976.882.72BYEF055.180.23BJEF0217.170.71BJEF2255.692.16BGEF1013.990.6

14、3BYEF06——BJEF0364.352.08BJEF23——BGEF11147.1111.87BYEF0748.491.17BJEF04——BJEF2483.741.85BGEF12——BYEF08——BJEF059.040.92BJEF2522.140.79BGEF1372.710.99BYEF098.680.54BJEF06——BJEF26——BGEF1467.650.92BYEF10——BJEF0723.371.08BJEF2

15、77.750.66BGEF1565.131.40BYEF11——BJEF0825.651.39BJEF28——BGEF16——BYEF128.440.48BJEF0910.360.36BJEF29——BGEF17——BYEF13——BJEF10——BJEF30——BGEF1813.090.60BYEF14——BJEF1111.951.00BJEF3120.851.22BGEF19——BYEF158.140.92BJEF12——BJEF3

16、214.920.77表中數(shù)據(jù)為三次平行測定的“平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差”；“——”表示未測出A6952.2.2八角內(nèi)生真菌八角內(nèi)生真菌DPPH自由基清除活性自由基清除活性按1.2.4方法測定各菌株發(fā)酵液乙酸乙酯萃取液對DPPH自由基的清除性能，結(jié)果如表2所示。表2結(jié)果表明，各菌株對DPPH自由基清除能力與總抗氧化性能結(jié)果基本一致，多數(shù)菌株發(fā)酵液乙酸乙酯提取液對DPPH自由基均有一定的清除能力。清除率接近或大于50%的菌株有BGEF09、BGEF1