抗hbv核酶的研究進(jìn)展_1

1、抗HBVHBV核酶的研究進(jìn)展核酶的研究進(jìn)展乙型肝炎病毒是引起乙型肝炎的病原體。在我國HBV感覺率達(dá)10%，而傳統(tǒng)的抗病毒藥物遠(yuǎn)期療效均不顯著，尋找新型抗HBV藥物成為迫切需要。核酶是一類具有生物催化功能的RNA，可定點(diǎn)切割RNA靶分子，從而達(dá)到有效阻斷基因表達(dá)的目的[1]。通過合理的設(shè)計(jì)及操作，核酶可阻斷HBV的復(fù)制及表達(dá)。所以在基因治療領(lǐng)域倍受重視。1核酶的類型及設(shè)計(jì)到目前為止，人們發(fā)現(xiàn)的核酶共有六種類型。即Ⅰ類內(nèi)含子、RNaseP、

2、錘頭狀核酶、發(fā)夾狀核酶、丁型肝炎核酶和VS核酶。通過對(duì)這六類核酶組成及結(jié)構(gòu)的研究，人們已經(jīng)開始利用錘頭狀、發(fā)夾狀核酶的特點(diǎn)，人工合成所需要的核酶。WEizsacker[2]、湯華[3]。竺來發(fā)等人[4]所設(shè)計(jì)針對(duì)HBV的核酶，均采用這種傳統(tǒng)方式。Hselh等[5]則就HDV核酶研究對(duì)乙型肝炎病毒的阻斷作用。對(duì)于核酶的合成，有兩種方法。①是用DNARNA合成儀直接合成。②先合成核酶的雙鏈或單鏈模板，然后用T4DNA連接酶將其整合并克隆至合

3、適的表達(dá)載體，讓其表達(dá)出核酶。這是理設(shè)計(jì)的核酶，催化效率也低于天然核酶。根據(jù)RNA分子進(jìn)行技術(shù)提出進(jìn)行體外篩選方法，在抗HIV中已有報(bào)道，對(duì)抗HBV也是一種可行的方法。②多位點(diǎn)核酶的聯(lián)合作用，針對(duì)靶RNA分子的不同位點(diǎn)進(jìn)行多位點(diǎn)破壞，進(jìn)一步提高核酶的剪切率，這樣既可防止HBV的變異引起變異逃避，也可減少空間構(gòu)型的影響。許多設(shè)計(jì)都采用了這種思路，如Weizsacker所用三個(gè)核酶的串聯(lián)作用。③與定向技術(shù)相結(jié)合，如用HBV外膜蛋白包裝含有H

4、DV核酶的弱毒株，可使其定向作用于靶器官肝臟。日本學(xué)者山田修平設(shè)計(jì)抗HCV的核酶時(shí)，使用唾液粘蛋白定向等等。④核酶與反義技術(shù)相結(jié)合。核酶與RNA誘餌相結(jié)合，這種方法在抗HIV核酶中已有許多研究，如Homman等人的報(bào)道，抑制效率可提高4～7倍[8]。目前的研究現(xiàn)狀抗HBV核酶的研究是核酶應(yīng)用研究的一個(gè)熱點(diǎn)。竺來發(fā)等人設(shè)計(jì)針對(duì)HBcAgmRNA編碼序列的核酶。在Mg存在下，將137nt的核酸準(zhǔn)確地水解得到97nt和40nt兩個(gè)片段，可有效