第七章 一般培養(yǎng)試劑介紹

1、杭州市解放路豐家兜234號(hào)電話：057187703020傳真：05718783451511、合成培養(yǎng)基（液）基本成分有哪些？、合成培養(yǎng)基（液）基本成分有哪些？合成培養(yǎng)基的種類雖多，但一般均含有氨基酸、維生素、糖類、無機(jī)離子和一些其它的輔助性成分。（1）氨基酸：是合成培養(yǎng)基的主要成分，合成培養(yǎng)基中以必需氨基酸為主。不同種類的細(xì)胞對氨基酸的要求也不同，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰

2、胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長不良而死亡。（2）維生素：細(xì)胞生長代謝中大多數(shù)的酶、輔酶是依靠維生素來形成的。在細(xì)胞培養(yǎng)中，盡管血清是維生素重要來源，但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細(xì)胞系生長。（3）糖類：培養(yǎng)基中的碳水化合物包括葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉等，主要提供細(xì)胞生長的能量，也可參與合成蛋白質(zhì)和核酸。（4）無機(jī)離子：培養(yǎng)基含有平衡鹽溶液的鉀、鈉等無機(jī)鹽，有些培養(yǎng)基含有微量元素，如

3、Fe2、Zn2、Ca2等。（5）其它成分：有時(shí)可在少數(shù)合成培養(yǎng)基中加入代謝的中間產(chǎn)物、氧化還原劑、三磷酸腺苷、輔酶A等。為適應(yīng)某些特殊培養(yǎng)的需要可以補(bǔ)加一些新的成分，如雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM培養(yǎng)液，使用時(shí)還需要補(bǔ)加丙酮酸鈉和2巰基乙醇。2、平衡鹽溶液、平衡鹽溶液平衡鹽溶液（BSS）是組織細(xì)胞培養(yǎng)中常用的基本液體。它可以維持滲透壓、調(diào)節(jié)pH值及供給細(xì)胞生存所需的能量和無機(jī)離子成分。主要作為合成培養(yǎng)基（液）的基礎(chǔ)液及用于洗滌組織、細(xì)胞等

4、。常用的平衡鹽溶液有PBS、Hanks液（HBSS）與DHanks液等。各種平衡鹽溶液的主要區(qū)別在于氯化鈉的濃度、離子的濃度及緩沖系統(tǒng)不同，可根據(jù)需要選用適當(dāng)?shù)钠胶恹}溶液。3、消化液、消化液原代培養(yǎng)中欲分散組織、細(xì)胞時(shí)，傳代中欲使細(xì)胞脫離附著的底物時(shí)均需使用消化液。組織細(xì)胞培養(yǎng)中常用的消化液為胰蛋白酶、EDTA兩種溶液，使用時(shí)可以單獨(dú)使用或混合使用。胰蛋白酶是從動(dòng)物胰臟分離的一種水解酶，其主要功能為使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解、細(xì)胞分散。胰蛋白

5、酶分離細(xì)胞的能力與細(xì)胞種類及細(xì)胞的特性有關(guān)，不同種類的細(xì)胞以及不同數(shù)量的細(xì)胞采用胰蛋白酶消化的時(shí)間亦不相同。濃度大、溫度高、新配制的胰蛋白酶可使細(xì)胞分離速度增快。胰蛋白酶溶液在pH8.0，溫度為37℃時(shí)，作用能力最強(qiáng)。注意：鈣離子、鎂離子和血清蛋白的存在會(huì)降低胰蛋白酶活力。消化細(xì)胞時(shí)，加入一些血清或含血清的培養(yǎng)液，或胰蛋白酶抑制劑能終止胰蛋白酶對細(xì)胞的消化作用。保存條件：配制好的胰蛋白酶溶液必須保存在20℃冰箱中，以免分解失效。請?jiān)谌芙?/p>

6、的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用為能螯合Ca2、Mg2，使細(xì)胞分離，對細(xì)胞毒性小。常用的濃度為0.02%。吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司杭州市解放路豐家兜234號(hào)電話：057187703020傳真：0571878345153解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。（3）血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因

7、是由于血清中脂蛋白的變性所造成的，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血渭解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物并不影響血清本身的質(zhì)量。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。（4）何謂熱滅活？一般是以56℃30分鐘來處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E可以使補(bǔ)體去

8、活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有：溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。（5）有必要做熱滅活嗎？實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常

9、常會(huì)讓研究者誤認(rèn)為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量?。?）如何避免沉淀物的產(chǎn)生我們建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列的操作：①解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法(20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如20℃至37℃)，非常容易產(chǎn)生沉淀物。②解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將