1無菌試驗操作規(guī)程-2015版中國藥典

1、第1頁共6頁文件名稱文件編碼制定人日期部門審核日期批準(zhǔn)人日期生效日期頒發(fā)部門無菌試驗操作規(guī)范無菌試驗操作規(guī)范使用區(qū)域分發(fā)部門：1.目的目的：制定無菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗操作正確。2.范圍范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于本公司成品無菌檢驗操作。3.3.職責(zé)：職責(zé)：生產(chǎn)部負(fù)責(zé)提供待檢驗產(chǎn)品，質(zhì)量部負(fù)責(zé)檢驗，出具檢驗報告。4.4.內(nèi)容：內(nèi)容：4.1.標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：《中國藥典》2015年版通則（1101）無菌檢查法。4.2.簡述：無菌檢查方法系用于檢查無菌

2、醫(yī)療器械是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。4.3.環(huán)境要求：該項檢查應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行。其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影響供試品中微生物的檢出。操作前環(huán)境潔凈度應(yīng)經(jīng)驗證。日常檢驗需對試驗環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。4.4.方法驗證：進(jìn)行該項檢查前應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗。4.5.人員要求：無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)培訓(xùn)。4.6.檢驗數(shù)量

3、及檢驗量：4.6.1.接種每種培養(yǎng)基所需的最少檢驗數(shù)量(表1)供試品批產(chǎn)量N(個）接種每種培養(yǎng)基的最少檢驗數(shù)量醫(yī)療器具≤10010050010%或4件（取較多者）10件2%或20件（取較少者）4.6.2.檢驗量（表3）供試品供試品裝量每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量醫(yī)療器具外科用敷料棉花及紗布縫合線、一次性醫(yī)用材料帶導(dǎo)管的一次性醫(yī)療器具其他醫(yī)療器具取100mg或1cm3cm整個材料二分之一內(nèi)表面整個器具（切碎或拆散開）4.7.儀器用具：

4、垂直層流超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱、顯微鏡、手提滅菌器、離心機、雙碟、試管、三角瓶、刻度離心管、注射器（針頭）、剪刀、鑷子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光燈365nm、真空泵、一次性使用集菌培養(yǎng)器。4.8.消毒劑配制：75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。第3頁共6頁4.10.3.潔凈室的清潔與滅菌在每次操作前，應(yīng)作好清潔工作，并用0.2%新潔爾滅溶液或2%來蘇爾或75％乙醇擦洗超凈臺工作臺面及可能污染的死角，然后開啟紫外線燈

5、殺菌半小時，超凈臺空氣過濾器自凈半小時。操作完畢后，用上述消毒液，再次處理工作臺面，開紫外光燈殺菌30分鐘以上。4.11.操作4.11.1.開啟傳遞窗外側(cè)門，將物品表面消毒后置傳遞窗內(nèi)，關(guān)閉窗門。4.11.2.操作人員按《進(jìn)入潔凈室更衣程序》洗手、更衣?lián)Q工作鞋，換無菌衣、褲、口罩。進(jìn)入潔凈室內(nèi)，開啟內(nèi)側(cè)門，取出物品，關(guān)閉內(nèi)側(cè)門，經(jīng)緩沖間帶入潔凈室內(nèi)，物品放置于實驗臺上，關(guān)閉潔凈室門，人員離開潔凈室，繼續(xù)用紫外燈照射半小時，關(guān)燈，再將用具

6、放入超凈臺內(nèi)。4.11.3.配制的培養(yǎng)基應(yīng)在涼暗處保存，一般不得超過2周。臨用前細(xì)菌和霉菌培養(yǎng)基分別經(jīng)30～35℃和20～25℃培養(yǎng)不少于48小時和72小時，證明無菌生長時方可使用。4.11.4.陽性對照試驗：a.應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽性對照菌，無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌；抗厭氧菌的供試品以生孢梭菌為對照品；抗真菌的供試品以白色念珠菌為對照品。b.陽性對照

7、試驗的菌液制備同方法驗證試驗。c.取各陽性對照菌懸液（含菌量小于100CFU）及供試品（用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量），以無菌操作加入相應(yīng)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48～72小時，檢查應(yīng)生長良好。（陽性對照試驗操作應(yīng)與微生物限度檢查操作隔離進(jìn)行，防止交叉污染）。4.11.5.陰性對照試驗：取供試品的相應(yīng)溶劑或稀釋劑沖洗液同法操作，培養(yǎng)14日應(yīng)無菌生長4.11.6.供試品檢查：供試品外部消毒：包裝外壁用75％乙醇擦拭，待干。供試品準(zhǔn)備：

8、方法一，打開包裝，直接剪取合適規(guī)格的內(nèi)部產(chǎn)品，隨用隨剪，取部分器械（100mg或1cm3cm）培養(yǎng)；方法二，用100ml生理鹽水沖洗內(nèi)包裝的產(chǎn)品表面，將濾液過濾，取濾膜培養(yǎng)。在近火焰旁以左手持培養(yǎng)基，右手半握拳，以小指和無名指拔開培養(yǎng)基管棉塞，管口通過火焰，移至火焰下側(cè)，將準(zhǔn)備好的供試品加入一培養(yǎng)基管內(nèi)。每次試驗取一半供試品經(jīng)上述處理分別接入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基管中，另一半分別接入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管中。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽

9、流體培養(yǎng)基在30～35℃培養(yǎng)14天，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基在20～25℃培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日檢查是否有菌生長，并填寫無菌檢查記錄。如供試品管出現(xiàn)渾濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀判斷時，可取該培養(yǎng)液接種在另一支相同新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。另取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基管一支，同法操作，操作結(jié)束后，接種對照菌液1ml（小于10