elisa設(shè)置陰性、陽性、空白對(duì)照涉及實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性評(píng)價(jià)

1、ELISAELISA設(shè)置陰性、陽性、空白對(duì)照涉及實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性評(píng)價(jià)設(shè)置陰性、陽性、空白對(duì)照涉及實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性評(píng)價(jià)一ELISA試驗(yàn)有效性與三項(xiàng)對(duì)照什么是“有效性”（Validity）？要獲得準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果“有效性”評(píng)價(jià)，就會(huì)關(guān)系到：為什么要設(shè)置“陰性、陽性和空白”等不可缺少的三項(xiàng)對(duì)照？要用什么樣的物質(zhì)擔(dān)當(dāng)“陰性、陽性和空白對(duì)照（品）”？這“三項(xiàng)對(duì)照”如何設(shè)置、需要設(shè)置幾個(gè)孔位？獲得的測(cè)定值如何“認(rèn)可、取舍與計(jì)算”？隨后，又如何依照陽性對(duì)照

2、均值（PCx）與陰性對(duì)照均值（NCx）的差值（PN，或NP）大小做出“試驗(yàn)結(jié)果有效性”的最終裁決呢？…等等，這一連串的問題，在國外“正規(guī)”品牌的ELISA試劑《使用說明書》中都有明細(xì)和詳盡的說明。既有理論要點(diǎn)提示，又有具體細(xì)致的舉例解說。很可惜，在90年前后，國內(nèi)興起ELISA檢測(cè)熱潮之際，在一片“國外試劑說明書太詳細(xì)、太復(fù)雜、不容易看明白、…”等等“一片埋冤”聲中，正好迎合國內(nèi)商家的“意愿”。從此以后，國產(chǎn)ELISA試劑的說明書，越來

3、越簡(jiǎn)單。這其中商家就有兩個(gè)“好處”：好處之一，用A4、或B5，甚至比B5還要小的一張紙，代替國際試劑的好幾頁的“使用說明書”（等同于一份“操作手冊(cè)”），每年就可節(jié)省一大筆印刷成本費(fèi)；好處之二，如同國際試劑說明書上向用戶交待的各種表明本試劑質(zhì)量有關(guān)的詳盡內(nèi)容，國產(chǎn)試劑的所謂“說明書”上統(tǒng)統(tǒng)可以“刪除、回避、拒絕”向用戶通報(bào)和承諾。我90年前后收集的雅培、巴斯德、阿克蘇等相關(guān)試劑的原文說明書，幾經(jīng)搬動(dòng)全都處理，很是可惜。近日，杭州檢疫局朋友

4、送了一份生物梅里埃中國有限公司的中文版《人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書》。對(duì)照閱讀之下，深深感到這才是一份真正意義上的《使用說明書》呀！在我下文提到的若干“概念、問題”，從中都可以找到答案。我現(xiàn)在參照我本人1993年的《肝炎ELISA試劑質(zhì)量與檢測(cè)結(jié)果有效性評(píng)價(jià)》會(huì)議講稿相關(guān)內(nèi)容，就“三項(xiàng)對(duì)照與檢測(cè)結(jié)果有效性”表示如下認(rèn)識(shí)和討論。二三項(xiàng)對(duì)照要求與用途ELISA檢測(cè)，按照試劑說明書要求，每次試驗(yàn)、每塊扳上都要設(shè)

5、置以下3項(xiàng)對(duì)照和用途：5ZJ8Yh1空白對(duì)照：僅用稀釋液代替檢測(cè)樣本、用以觀測(cè)最終反應(yīng)的顯色“本底”、并用于酶標(biāo)儀消除、扣除“本底”，即：以本底為“零”讀取陽性、陰性對(duì)照孔和樣本檢測(cè)孔的吸光值（A）；或者，在計(jì)算陰性對(duì)照均值（NCx）、陽性對(duì)照均值（PCx）、樣本讀數(shù)的SC.O.值時(shí)減去空白對(duì)照的本底吸光值。早年的酶標(biāo)儀無自動(dòng)扣除空白對(duì)照孔讀數(shù)功能，這種酶標(biāo)議現(xiàn)已淘汰不用了，寫上這段話的意思是補(bǔ)充說明設(shè)置空白對(duì)照的用途?？瞻卓拙唧w如何讀

6、取讀數(shù)，則依照說明書操作。例如，生物梅里埃中國有限公司的中文版《人類免疫缺陷病毒過數(shù)種試驗(yàn)進(jìn)行“篩試”、把含有“干擾性物質(zhì)”的血清剔除、不用，以避免出現(xiàn)“假陽性”干擾試驗(yàn)結(jié)果。km0R)i（2）陽性對(duì)照（品）設(shè)置，也可區(qū)分為兩種類型與用途：P|Cp)8一是陽性對(duì)照主要用于評(píng)價(jià)該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果是否有效和試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設(shè)的陽性對(duì)照的測(cè)量值不列入Cutoff值計(jì)算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。Z%)`0R

7、j二是陽性對(duì)照的設(shè)置，不僅用于評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果是否有效和試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性，而且計(jì)入Cutoff的計(jì)算。此時(shí)的Cutoff值的含義是代表該標(biāo)志物在健康（正常）人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測(cè)值超過該上限（Cutoff）時(shí)表示有診斷意義。例如抗—HBe、抗—HBc、抗—HBcIgM等。)Wm:t三陰性與陽性對(duì)照平均值計(jì)算與判斷fys!c1陰性對(duì)照平均值NCx有效性計(jì)算判斷舉例：A3a[1]（1）第一類NCx計(jì)算與評(píng)價(jià)：以HBsAg為

8、例45dgB巴斯德HBsAgEIAKit。（2）第二類NCx計(jì)算與評(píng)價(jià)：可包括抗—HBc、抗—HBe。以抗—HBc、抗—HBe為例：:=Jj=ZⅠ.取3孔陰性對(duì)照A值的平均值：Ke(@Tq抗—HBcNCx=（1.0270.9891.278）3=1.065zf#v5=$抗—HBeNCx=（1.1691.0880.993）3=1.083；%rCGTS4D請(qǐng)各位注意：這2個(gè)NCx是不是很接近1.00呀？也就是說，十分接近C.O.I.（C.O.

9、S，或C.O.A）=1.00！這不是一種偶然，而是國際試劑（如雅培）的“質(zhì)量”標(biāo)志。如果偏大，例如1.50以上，或者偏小，0.50以下，待檢樣本中會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)什么現(xiàn)象呢？請(qǐng)讀者自己思考吧。sjpIⅡ.各孔NC值均應(yīng)＜2.000，并處于≥0.5NCx至≤1.5NCx之間。若其中1孔NC值偏離該范圍時(shí)，棄去，再計(jì)算2孔的NC值的NCx。如有2孔NC值偏離該范圍時(shí)，應(yīng)重新試驗(yàn)。2陽性對(duì)照平均值PCx有效性計(jì)算與評(píng)價(jià)也分為兩類：!eb`D5（1）