大黃苷元聯(lián)合尿激酶動(dòng)脈溶栓對(duì)血栓栓塞性腦缺血大鼠

1、1大黃苷元聯(lián)合尿激酶動(dòng)脈溶栓對(duì)血栓栓塞性腦缺血大鼠大黃苷元聯(lián)合尿激酶動(dòng)脈溶栓對(duì)血栓栓塞性腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響?劉敬霞1李建生2王冬3劉軻2梁生旺2李寧2蘇靜2郭曉燕2孫捷2（1.寧夏醫(yī)科大學(xué)銀川750004；2.河南中醫(yī)學(xué)院老年醫(yī)學(xué)研究所鄭州450003；3.河南省洛陽市婦女兒童保健中心兒童醫(yī)院洛陽471000）[摘要]目的目的：探討大黃苷元聯(lián)合不同時(shí)間窗溶栓治療對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的阻抑作用及其對(duì)相關(guān)調(diào)控

2、基因蛋白表達(dá)的影響。方法方法：大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、尿激酶溶栓組（簡稱溶栓組）、大黃苷元組和聯(lián)合組（大黃苷元尿激酶組）。大鼠自體血栓結(jié)合線栓阻塞大腦中動(dòng)脈制備血栓栓塞性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?。大鼠分別于缺血后3h、6h、9h經(jīng)導(dǎo)管由頸內(nèi)動(dòng)脈用尿激酶進(jìn)行溶栓。動(dòng)脈給尿激酶后24h，觀察大鼠腦組織病理改變；免疫組織化學(xué)法檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡和凋亡相關(guān)基因蛋白BaxCaspase3和bcl2表達(dá)。結(jié)果結(jié)果：各模型組大鼠病理改變明顯，TUNEL細(xì)胞

3、增多、Bax和Caspase3表達(dá)增強(qiáng)、bcl2表達(dá)下調(diào)；各用藥組較模型組TUNEL細(xì)胞減少，6h和9h組Bax和Caspase3表達(dá)減弱、6h組bcl2表達(dá)上調(diào)；各組9h分別較其3h的TUNE細(xì)胞數(shù)增加、Bax增強(qiáng)、bcl2減弱；聯(lián)合組分別較單一用藥各時(shí)間組TUNEL細(xì)胞數(shù)減少、6h和9h組Bax及Caspase3表達(dá)減弱、bcl2表達(dá)上調(diào)。結(jié)論：腦缺血可使促凋亡基因Bax表達(dá)上調(diào)和抑凋亡基因bcl2下調(diào)，引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡，且隨缺血時(shí)

4、間延長而明顯。大黃苷元及溶栓可下調(diào)Bax和Caspase3、上調(diào)bcl2表達(dá)，對(duì)腦缺血神經(jīng)細(xì)胞凋亡有阻抑作用，以二者聯(lián)合用藥的效果尤為理想。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]腦缺血；大鼠；溶栓；大黃苷元；聯(lián)合；細(xì)胞凋亡InfluenceofRhubarbAglyconeAssociatedThrombolysisonNeurocyteApoptosisinRatswithThrombusoccludedCerebralIschemiaLIUJingxia

5、1LIJiansheng2WANGDong3LIUKe2LIANGShengwang2LINing2SUJing2GUOXiaoyan2SUNJie2（1.NingxiaMedicalUniversityYinchuan750004China.2.GeriatricsInstituteofHenanCollegeofTraditionalChineseMedicineZhengZhou450003China.3.ChinaChildre

6、nshospitalofFemmeChildCareCentreofLuoyangcityinHenanprovinceLuoyang471000China.）AbstractObjectives：TocomparedepressioneffectsofRhubarbAglyconeassociated?[基金項(xiàng)目]國家自然科學(xué)基金（C03050311）［收稿日期］20100111[通訊作者]﹡李建生，博士，教授，博士生導(dǎo)師，長期從事中

7、醫(yī)防治腦血管病的研究工作。Tel:037165676568；Email:Li_js8@。[第一作者]1劉敬霞，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，長期從事中醫(yī)防治腦血管病的研究工作。Tel:09516880501；Email:ljx199566@。3型號(hào)2.5，內(nèi)徑0.285mm）；凝血酶（濟(jì)南軍區(qū)生物制品藥物研究所，批號(hào)H41023661）；尿激酶（山東新華制藥股份有限公司，批號(hào)05401236）；大黃苷元（河南中醫(yī)學(xué)院藥物分析學(xué)科提供）。1.

8、2分組與處理大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、用藥組；用藥組又分為尿激酶溶栓組（簡稱溶栓組）、大黃苷元組和聯(lián)合組（大黃苷元尿激酶組）。模型組和用藥組大鼠根據(jù)腦缺血后干預(yù)時(shí)間點(diǎn)的不同分為3h、6h、9h3組，各組20只動(dòng)物。大鼠均于造模前4dig（1次日），大黃苷元組和聯(lián)合組用大黃苷元ig（用量為12.96mgkg），其余均灌以等體積的生理鹽水。腦缺血后不同時(shí)間點(diǎn)經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行區(qū)域動(dòng)脈給藥，模型組用生理鹽水，溶栓組與聯(lián)合組用尿激酶，尿激酶用量50

9、00ukg。，1.3造模及取材參考改良的Zhang法制備自體血栓結(jié)合線栓阻塞大腦中動(dòng)脈制備血栓栓塞性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ蚚5]，留置導(dǎo)管。區(qū)域動(dòng)脈給藥后24h冰盤上取腦，制備標(biāo)本，待行指標(biāo)測定。1.4觀察指標(biāo)1.4.1腦組織病理觀察切取的腦組織用4%的多聚甲醛固定常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色，光鏡下觀察腦組織病理形態(tài)改變，根據(jù)受損程度由輕到重進(jìn)行分級(jí)[6]，觀察大鼠例數(shù)；病理損傷程度由輕到重分級(jí)（鏡下見出血者均為Ⅳ級(jí)）：Ⅰ級(jí)025%

10、，Ⅱ級(jí)2650%，Ⅲ級(jí)5175%，Ⅳ級(jí)＝75%。1.4.2TUNEL陽性細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測；操作按試劑盒說明進(jìn)行；梗死灶半暗帶區(qū)及梗塞區(qū)分別取互不重疊的3個(gè)(2010)視野，計(jì)TUNEL染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)，取其均數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。1.4.3Bax表達(dá)免疫組織化學(xué)檢測；操作按實(shí)際和說明進(jìn)行；顯微鏡計(jì)算機(jī)彩色圖像處理系統(tǒng)觀測Bax蛋白陽性反應(yīng)產(chǎn)物面積；免疫組織化學(xué)定量計(jì)算公式得出陽性單位（PU）值。1.4.4Caspase3表達(dá)免疫組化法檢測；

11、操作按試劑盒說明書進(jìn)行；顯微鏡計(jì)算機(jī)彩色圖像處理系統(tǒng)觀測Bax蛋白陽性反應(yīng)產(chǎn)物面積；免疫組織化學(xué)定量計(jì)算公式得出陽性單位（PU）值。1.4.5bcl2表達(dá)免疫組化法檢測；操作按試劑盒說明書進(jìn)行；顯微鏡計(jì)算機(jī)彩色圖像處理系統(tǒng)觀測Bax蛋白陽性反應(yīng)產(chǎn)物面積；免疫組織化學(xué)定量計(jì)算公式得出陽性單位（PU）值。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。等級(jí)資料用秩和檢驗(yàn)；計(jì)量資料以s表示，單因素方差分析統(tǒng)計(jì)。顯著性水準(zhǔn)取α＝0.05。x2結(jié)果