生化實驗思考題參考答案

1、生化實驗講義思考題參考答案生化實驗講義思考題參考答案實驗一實驗一淀粉的提取和水解淀粉的提取和水解1、實驗材料的選擇依據是什么？答：生化實驗的材料選擇原則是含量高、來源豐富、制備工藝簡單、成本低。從科研工作的角度選材，還應當注意具體的情況，如植物的季節(jié)性、地理位置和生長環(huán)境等，動物材料要注意其年齡、性別、營養(yǎng)狀況、遺傳素質和生理狀態(tài)等，微生物材料要注意菌種的代數和培養(yǎng)基成分的差異等。2、材料的破碎方法有哪些？答：(1)機械的方法：包括研磨

2、法、組織搗碎法；(2)物理法：包括凍融法、超聲波處理法、壓榨法、冷然交替法等；(3)化學與生物化學方法：包括溶脹法、酶解法、有機溶劑處理法等。實驗二實驗二總糖與還原糖的測定總糖與還原糖的測定1、堿性銅試劑法測定還原糖是直接滴定還是間接滴定？兩種滴定方法各有何優(yōu)缺點？答:我們采用的是堿性銅試劑法中的間接法測定還原糖的含量。間接法的優(yōu)點是操作簡便、反應條件溫和，缺點是在生成單質碘和轉移反應產物的過程中容易引入誤差；直接法的優(yōu)點是反應原理直觀

3、易懂，缺點是操作較復雜，條件劇烈，不易控制。實驗五實驗五粗脂肪的定量測定粗脂肪的定量測定─索氏提取法索氏提取法（1）本實驗制備得到的是粗脂肪，若要制備單一組分的脂類成分，可用什么方法進一步處理？答：硅膠柱層析，高效液相色譜，氣相色譜等。（2）本實驗樣品制備時烘干為什么要避免過熱答：防止脂質被氧化。實驗六實驗六蛋白質等電點測定蛋白質等電點測定1、在分離蛋白質的時候，等電點有何實際應用價值？答:在等電點時，蛋白質分子與分子間因碰撞而引起聚沉

4、的傾向增加，所以處于等電點的實驗十實驗十影響酶活性的因素影響酶活性的因素（1）本實驗中如何通過淀粉液加碘后的顏色的變化來判斷酶促反應快慢的？答：在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，經過一系列被稱為糊精的中間產物，最后生成麥芽糖和葡萄糖。變化過程如下：淀粉→紫色糊精→紅色糊精→麥牙糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、紅色糊精遇碘后分別呈藍色、紫色與紅色。麥芽糖和葡萄糖遇碘不變色。因此反應后顏色如為藍色說明酶活力低，淡黃色則說明酶活力高。（2）如何通過加

5、入班氏試劑后生成沉淀多少來反映酶促反應快慢的？答：淀粉與糊精無還原性，或還原性很弱，對本尼迪克特試劑呈陰性反應。麥芽糖、葡萄糖是還原糖，與本尼迪克特試劑共熱后生成紅棕色氧化亞銅的沉淀。因此，產生紅棕色氧化亞銅的沉淀越多說明酶活力越高。（3）通過本實驗，結合理論課的學習，小結出哪些因素影響唾液淀粉酶活性？是如何影響的？答：溫度、pH、激活劑、抑制劑等。高于或低于最適溫度或pH，酶活力都會降低；激活劑和抑制劑不是絕對的，只是相對而言，隨著濃

6、度的變化而變化。實驗十二實驗十二堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測定堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測定(1)試說明用硫酸銨分級分離酶的方法及應注意的事件。答：用鹽分級沉淀是一種應用非常廣泛的方法。由于硫酸銨在水中溶解度很大（20℃，每升可溶760克），并且對許多酶沒有很大的影響，因此它是最常用的鹽。例如：某酶（或蛋白質）發(fā)生鹽析的范圍為3565%飽和硫酸銨的濃度，因此可先選擇30%飽和硫酸銨濃度，去沉淀雜蛋白，然后選擇70%飽和硫濃度酸銨

7、，留沉淀（含所要的酶）。注意事項：在用硫酸銨沉淀酶蛋白時，要注意緩沖液的pH值和溫度，鹽的溶解度隨溫度不同而有較大的變化，同時酶的溶解度亦隨溫度的改變而改變。在加硫酸銨時，需事先將硫酸銨粉末研細。加入過程需緩慢并及時攪拌溶解。攪拌要緩慢，盡量防止泡沫的形成，以免酶蛋白在溶液中表面變性。(2)用正丁醇處理勻漿液可以有效地使堿性磷酸酶酶蛋白釋放，使酶的產量大大提高，這是為什么？答：因為堿性磷酸酶酶是一種膜蛋白，正丁醇處理后可使結合在膜上的蛋