實驗十二 菠菜葉中葉綠素的提取和分離

1、1實驗十二實驗十二菠菜葉中葉綠素的提取和分離（菠菜葉中葉綠素的提取和分離（070526）一實驗目的實驗目的1掌握從菠菜葉中提取葉綠素的方法；2了解薄層層析的原理，掌握薄層層析的一般操作和定性鑒定方法二實驗原理實驗原理1葉綠素提取葉綠素提取高等植物體內的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類，主要包括葉綠素a(C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H70O6N4Mg)、β—胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)等4種。葉綠

2、素a和葉綠素b為吡咯衍生物與金屬鎂的配合物，胡蘿卜素是一種橙色天然色素，屬于四萜類，為一長鏈共軛多烯，有α、β、γ三種異構體，其中，β異構體含量最多。葉黃素為一種黃色色素，與葉綠素同存在于植物體中，是胡蘿卜素的羥基衍生物，較易溶于乙醇，在乙醚中溶解度較小。根據它們的化學特性，可將它們從植物葉片中提取出來，并通過萃取、沉淀和色譜方法將它們分離開來。RR=H￡R=OH2薄層色譜薄層色譜薄層層析是快速分離和定性分析微量物質的一種極為重要的實驗

3、技術，具有設備簡單、操作方便而快速的特點。它是將固定相支持物均勻地鋪在玻片上制成薄層板，將樣品溶液點加在起點處，置于層析容器中用合適的溶劑展開而達到分離的目的。用此法分離時幾乎不受溫度的影響，可采用腐蝕性顯色劑，而且可在高溫下顯色，特別適用于揮發(fā)性小或在較高溫度下易發(fā)生反應的物質，同時也常用來跟蹤有機反應或監(jiān)測有機反應完成的程度。薄層層析按分離機制不同可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析等，最常用的為吸附薄層層析，在此主要討論。吸附層

4、析中樣品在薄層板上經過連續(xù)、反復的被吸附刑吸附及展開劑解吸附過程，由于不同的物質被吸附劑吸附的能力及被展開劑解吸附的能力不同，放在薄層上以不同速度移動而得以分離。通常用比移值(Rf)表示物質移動的相對距離：的距離展開劑前沿至原點中心點中心的距離色斑最高濃度中心至原?fR3吸附劑按其含水量的多少各分為五個等級：I級含水量最少，活性最高；V級含水量最多，活性最低；但并不是活性越高分離效果越好，選用哪種活性級別的吸附劑，要用實驗的方法來確定。

5、酸堿性：市售氧化鋁有酸性（用以分離酸性化合物）、中性、堿性（用以分離生物堿等堿性化合物），其蒸餾水洗出液的pH值分別為4、7.5、9—10；其中以中性氧化鋁應用最廣，可用來分離各種化合物，特別是那些對酸、堿敏感的化合物。硅膠沒有酸堿性之分。（3）展開劑）展開劑在樣品組分吸附劑展開劑三個因素中。對一確定組分，樣品的結構和性質可看作是一不變因素，吸附劑和展開劑是可變因素。而吸附劑的種類有限，因此選擇合適的展開劑就成為解決問題的關鍵。展開劑的

6、選擇有以下要求:（a）對待測組分有很好的溶解度。（b）能使待測組分與雜質分開，與基線分離。（c）使展開后的組分斑點圓而集中，不應有拖尾現象。（d）使待測組分的Rf值最好在0.4~0.5，如樣品中待測組分較多，Rf值則可在0.25~0.75范圈內，組分間的Rf值最好相差0.1左右。由于薄層色譜法用途非常廣泛，國內外均有現成的鋪有吸附劑的薄層板出售。一般實驗室中也可自己制備。(e)不與組分發(fā)生化學反應，或在某些吸附劑存在下發(fā)生聚合。(f)具

7、有適中的沸點和較低的粘滯度。展開劑的極性是指與樣品組分相互作用時。展開劑分子與吸附劑分子的色散作用、偶極作用、氫鍵作用及介電作用的總和。展開劑要根據樣品的極性及溶解度，吸附劑活性等因素進行選擇，總的原則是展開劑的極性能使組分的Rf值在0.5左右。常用溶劑極性次序是：石油醚環(huán)己烷苯乙醚氯仿乙酸丁酯正丁醇丙酮乙醇甲醇。如一種溶劑不能充分展開，可選用二元或多元溶劑系統(tǒng)。4展開槽與展開：展開槽與展開：薄層的展開在密閉的容器即展開槽或稱為層析缸中

8、進行。展開：展開：合適的展開劑用量為浸及下端硅膠，但不浸及樣點；點樣端向下，每次只展開一塊，放在正中，以免爬斜（進而展開傾斜）。5顯色：顯色：如果化合物本身有顏色，就可直接觀察它的斑點。如果本身無色，可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點（有苯環(huán)的物質都有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置；對于在紫外燈光下不顯色的，可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點（因為許多化合物都能和碘成黃棕色斑點），顯色后，立即用鉛筆標出斑點的位置。常用普適性顯色