熒光標(biāo)記法研究魚類GABA受體與藥物的相互作用.pdf

1、熒光標(biāo)記法是一種價格低廉，方法簡便，環(huán)境友好，靈敏度高的非放射性標(biāo)記手段。本文通過熒光標(biāo)記法研究魚類γ-氨基丁酸(GABA)受體與苯二氮類及殺蟲劑類藥物的相互作用，進(jìn)一步比較魚類和哺乳動物腦內(nèi)GA BA受體的異同，對研制高選擇性、環(huán)境友好的綠色農(nóng)藥具有重要意義。本文研究結(jié)果如下：
　　第一，采用1％ Nonidet P-40，1% Triton X-100，4% CHAPS，0.5% Lubrol-PX，2% OCTG，2%脫氧膽

2、酸鈉等六種去垢劑增溶GABA受體蛋白，比較了其溶出效率；結(jié)果表明1% Nonidet P-40溶出量最多，達(dá)到729μg/mL。
　　第二，通過比較Ro7-1986/1和氟蟲腈兩種親和柱對鳙魚腦GABA受體分離純效率，發(fā)現(xiàn)Ro7-1986/1親和柱對鳙魚GABA受體的分離效率高于氟蟲腈親和柱，分離效率為32.0%。
　　第三，成功制備兩種GABA受體的配體熒光復(fù)合物：FITC-Ro7和FITC-氟蟲腈，利用傅里葉紅外光譜(F

3、TIR)和氫譜核磁共振(1H-NMR)等手段對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。
　　第四，熒光標(biāo)記法實(shí)驗(yàn)測得Ro7-1986/1和氟蟲腈與魚類GABA受體的親和常數(shù)Kd值分別為67±5nmol/L和346±6nmol/L；最大結(jié)合量[RT]值分別為13.8±1.8pmol/mg protein和40.6±3.5pmol/mg protein。結(jié)果表明：同哺乳動物相比，Ro7-1986/1對鳙魚腦GABA受體結(jié)構(gòu)親和力與哺乳動物相似。而氟蟲腈對魚類

4、和昆蟲GABA受體親和力明顯比哺乳動物高，這可能是氟蟲腈對魚類毒性高于哺乳動物毒性的一方面原因。
　　第五，通過測定游離配體、含受體蛋白結(jié)合配體以及甲醇解離所得結(jié)合配體這三種方法比較，發(fā)現(xiàn)通過測定甲醇解離得到的Kd值最小，F(xiàn)ITC-Ro7和FITC-氟蟲腈的Kd值分別為67±5nmol/L和346±6nmol/L，更接近真實(shí)值。
　　第六，競爭性取代試驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)ITC-Ro7特異性結(jié)合隨GABA濃度的升高而逐漸增加，說明