層析分離方法

1、層析分離方法層析分離方法概述■層析法層析法――――是一種使不同分子相互分離的過(guò)程，當(dāng)一混合樣品被導(dǎo)入一固定相的支持體是一種使不同分子相互分離的過(guò)程，當(dāng)一混合樣品被導(dǎo)入一固定相的支持體中，而另一流體中，而另一流體(移動(dòng)相移動(dòng)相)通過(guò)時(shí)，由于樣品各組分與固定相和移動(dòng)相相互作用的大小不同，通過(guò)時(shí)，由于樣品各組分與固定相和移動(dòng)相相互作用的大小不同，使各組分通過(guò)固定相支持體的速率不同而得分離。使各組分通過(guò)固定相支持體的速率不同而得分離。層析法的特

2、點(diǎn)：層析法的特點(diǎn)：能分離一系列結(jié)構(gòu)較為相似的成分，以達(dá)到一般分離方法難以達(dá)到能分離一系列結(jié)構(gòu)較為相似的成分，以達(dá)到一般分離方法難以達(dá)到的目的。的目的?！鰧游龀Ｒ?jiàn)種類及用途層析常見(jiàn)種類及用途:a.柱層析柱層析――――分離量較大，主要用于分離制備；分離量較大，主要用于分離制備；b.薄層層薄層層析――――主要用于分析鑒定主要用于分析鑒定也可用于半微量制備。也可用于半微量制備。c.紙層析紙層析――――主要用于分析鑒定，也可用于半微量制備。主要用

3、于分析鑒定，也可用于半微量制備。■層析法按分離原理大體上又可以分為層析法按分離原理大體上又可以分為(1)吸附層析吸附層析(利用吸附能力的差別進(jìn)行分離利用吸附能力的差別進(jìn)行分離)，常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺，常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等；等；(2)分配層析分配層析(利用在二種不互溶的溶劑中分配比不同進(jìn)行分離利用在二種不互溶的溶劑中分配比不同進(jìn)行分離)，常用的支持劑為硅膠、，常用的支持劑為硅膠、硅藻土、纖維粉等，硅藻土、纖維

4、粉等，反相硅膠反相硅膠(鍵合硅膠鍵合硅膠)、液滴逆流層析則是分配層析與逆流分溶的發(fā)液滴逆流層析則是分配層析與逆流分溶的發(fā)展；展；(3)離子交換層析離子交換層析(利用離子解離強(qiáng)度不同進(jìn)行分離利用離子解離強(qiáng)度不同進(jìn)行分離)，常用的離子交換樹(shù)脂有強(qiáng)酸性，常用的離子交換樹(shù)脂有強(qiáng)酸性(磺酸型酸型)、強(qiáng)堿性、強(qiáng)堿性(季胺型季胺型)、弱酸性、弱酸性(羧酸型羧酸型)、弱堿性、弱堿性(三級(jí)胺型三級(jí)胺型)；(4)電泳電泳(利用電流通過(guò)時(shí)，離子趨電性不同進(jìn)行

5、分離利用電流通過(guò)時(shí)，離子趨電性不同進(jìn)行分離)，常用的有紙電泳、瓊脂電泳、，常用的有紙電泳、瓊脂電泳、凝膠電泳。凝膠電泳。(5)其他有氣體層析、凝膠層析、親和層析等，其他有氣體層析、凝膠層析、親和層析等，■層析方法的選擇：層析方法的選擇：(1)非極性的成分常選擇氧化鋁或硅膠吸附層析；非極性的成分常選擇氧化鋁或硅膠吸附層析；(2)極性較大則采用分配層析或弱吸附劑吸附層析；極性較大則采用分配層析或弱吸附劑吸附層析；(3)酸性、兩性成分可用離子

6、交換層析，有時(shí)也可用吸附層析及分配層析。酸性、兩性成分可用離子交換層析，有時(shí)也可用吸附層析及分配層析?！龈黝惢衔镞m宜的各類化合物適宜的層析方法：層析方法：a.一般生物堿的分離可用硅膠或氧化鋁層析，對(duì)極性較高的生物堿也可用分配層析，而一般生物堿的分離可用硅膠或氧化鋁層析，對(duì)極性較高的生物堿也可用分配層析，而對(duì)季胺型水溶性生物堿也可用分配層析或離子交換層析。對(duì)季胺型水溶性生物堿也可用分配層析或離子交換層析。b.甙類的層析分離往往決定于甙元

7、的性質(zhì)，如皂甙、強(qiáng)心甙，一般可用分配層析或硅膠甙類的層析分離往往決定于甙元的性質(zhì)，如皂甙、強(qiáng)心甙，一般可用分配層析或硅膠吸附層析。吸附層析。層析硅膠應(yīng)是中性無(wú)色顆粒，但是由于制作過(guò)程?？蓭в兴嵝?，如果酸性不強(qiáng)于層析硅膠應(yīng)是中性無(wú)色顆粒，但是由于制作過(guò)程?？蓭в兴嵝裕绻嵝圆粡?qiáng)于pH5，一般已可使用。一般已可使用。■商品層析硅膠合格的判定商品層析硅膠合格的判定a.PH值－一般先檢查其是否中性。取硅膠一份混懸于值－一般先檢查其是否中性。取

8、硅膠一份混懸于100份水中放置，應(yīng)得澄清份水中放置，應(yīng)得澄清的中性溶液。如濾液為酸性，應(yīng)水洗至中性，再行活化處理。的中性溶液。如濾液為酸性，應(yīng)水洗至中性，再行活化處理。b.鐵離子的檢查－一般將硅膠混懸于鹽酸中，攪拌，如含鐵離子則與鹽酸結(jié)合成鐵離子的檢查－一般將硅膠混懸于鹽酸中，攪拌，如含鐵離子則與鹽酸結(jié)合成復(fù)合物而顯黃色。有鐵離子存在即預(yù)示有其他金屬鹽存在的可能性，因此最好復(fù)合物而顯黃色。有鐵離子存在即預(yù)示有其他金屬鹽存在的可能性，因此

9、最好以鹽酸洗滌處理。在特殊情況下，硅膠須經(jīng)乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑預(yù)洗，至洗以鹽酸洗滌處理。在特殊情況下，硅膠須經(jīng)乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑預(yù)洗，至洗出液蒸干無(wú)殘?jiān)鼮橹埂３鲆赫舾蔁o(wú)殘?jiān)鼮橹?。由于硅膠容易吸水，因此用前最好經(jīng)由于硅膠容易吸水，因此用前最好經(jīng)120℃烘24小時(shí)活化，可不作活性測(cè)定。小時(shí)活化，可不作活性測(cè)定。■硅膠的改良：硅膠的改良：向?qū)游龉枘z中加入一種復(fù)合試劑，以改良吸附性能，提高分離效果，稱改良吸附劑。例向?qū)游龉枘z中加入一種復(fù)合試劑

10、，以改良吸附性能，提高分離效果，稱改良吸附劑。例如以硝酸銀處理的硅膠對(duì)不飽和烴類有極好的分離作用。以如以硝酸銀處理的硅膠對(duì)不飽和烴類有極好的分離作用。以1~10%復(fù)合試劑的水或丙酮溶復(fù)合試劑的水或丙酮溶液，與硅膠混勻，待稍干后于液，與硅膠混勻，待稍干后于110℃干燥即可。干燥即可。表72常用改良吸附劑常用改良吸附劑復(fù)合試劑復(fù)合試劑選擇性分離物選擇性分離物0.1~0.5N酸或堿酸或堿pH敏感物質(zhì)（生物堿、酸性、酚性、兩性物質(zhì)）敏感物質(zhì)（生

11、物堿、酸性、酚性、兩性物質(zhì)）AgNO3具有雙鍵或三鍵物質(zhì)具有雙鍵或三鍵物質(zhì)硼酸、硼酸鈉、堿式醋酸鉛硼酸、硼酸鈉、堿式醋酸鉛多羥基化合物多羥基化合物亞硫酸鈉亞硫酸鈉醛類醛類氯化鐵氯化鐵羥基喹啉類羥基喹啉類硫酸銅硫酸銅胺類胺類鐵氰化鋅鐵氰化鋅磺胺類磺胺類二、硅膠吸附層析的應(yīng)用二、硅膠吸附層析的應(yīng)用■硅膠層析的優(yōu)、缺點(diǎn)：硅膠層析的優(yōu)、缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：(1)有些化合物用氧化鋁層析，吸附劑副反應(yīng)較多，而且某些副反應(yīng)即使用中性氧化鋁有些化合物用氧

12、化鋁層析，吸附劑副反應(yīng)較多，而且某些副反應(yīng)即使用中性氧化鋁仍難以避免。而硅膠作吸附劑雖也有個(gè)別發(fā)生異構(gòu)化，但一般副反應(yīng)較少；仍難以避免。而硅膠作吸附劑雖也有個(gè)別發(fā)生異構(gòu)化，但一般副反應(yīng)較少；(2)某些酸性、酚性物質(zhì)、色素等易與氧化鋁結(jié)合而不宜使用氧化鋁層析，硅膠則無(wú)此某些酸性、酚性物質(zhì)、色素等易與氧化鋁結(jié)合而不宜使用氧化鋁層析，硅膠則無(wú)此特性；特性；(3)氧化鋁層析樣品損失較多，而硅膠層析樣品回收率較高。氧化鋁層析樣品損失較多，而硅膠層