混合模式層析及其用于卵黃抗體分離純化研究.pdf

1、混合模式吸附層析技術(shù)(Mixed-mode adsorption chromatography)是近年來發(fā)展的一種新型生化分離技術(shù).混合模式吸附劑的功能配基同時(shí)含有疏水基團(tuán)和離子交換基團(tuán),兼具疏水作用和靜電相互作用,可以通過靜電相吸來強(qiáng)化吸附或靜電排斥來協(xié)助解吸.另外,配基密度通常比較高,具有典型的耐鹽吸附特性,可以不需要調(diào)節(jié)原料液的離子強(qiáng)度直接層析分離,減少分離步驟,提高分離效率.本文重點(diǎn)研究了兩種混合模式吸附劑-Streamline

2、 Direct HST和:MEP HyperCel,考察了模型蛋白的吸附規(guī)律和影響因素,探討了相關(guān)的吸附機(jī)理,并將混合模式吸附層析應(yīng)用于卵黃抗體的分離純化,達(dá)到了較好的分離效果. 主要內(nèi)容可分為以下四個(gè)方面:(1) Streamline Direct HST對(duì)模型蛋白的靜態(tài)吸附.以牛血清白蛋白(BSA)和牛血紅蛋白為模型蛋白,考察pH和鹽濃度對(duì)Streamline Direct HST吸附蛋白質(zhì)的影響.結(jié)果表明,Streamli

3、ne Direct HST對(duì)蛋白質(zhì)的吸附隨pH的變化而變化,存在最適pH使得吸附容量最大,蛋白質(zhì)分子體積的變化在一定程度上會(huì)影響吸附容量.當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與吸附劑存在靜電吸引作用時(shí),吸附過程由靜電相互作用主導(dǎo),吸附等溫線符合Langmuir吸附方程;當(dāng)存在靜電排斥作用時(shí),吸附等溫線則呈現(xiàn)典型的多分子層吸附模式.(2)Streamline Direct HST分離卵黃抗體.結(jié)果表明,在pH4-6范圍內(nèi)StreamlineDirectHST對(duì)卵黃稀

4、釋液中大多數(shù)蛋白質(zhì)都有較強(qiáng)的吸附能力,鹽濃度對(duì)卵黃抗體吸附的影響很小,改變pH可以實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)洗脫.由于StreamlineDirect HST對(duì)卵黃抗體的選擇性不高,通過改變上樣pH和洗脫條件難以實(shí)現(xiàn)卵黃抗體的有效分離.(3)MEP HyperCel對(duì)模型蛋白的靜態(tài)吸附.以溶菌酶和BSA為模型蛋白,HCIC吸附劑MEP HyperCel對(duì)蛋白質(zhì)的吸附呈現(xiàn)復(fù)雜的規(guī)律.MEPHyperCel在pH 6-12間對(duì)溶菌酶都有吸附,吸附容量隨著p

5、H的增加而增加.結(jié)果表明,pH是影響MEP HyperCel吸附蛋白質(zhì)的主要因素.MEPHyperCel對(duì)蛋白質(zhì)吸附能力強(qiáng),可能造成洗脫困難,實(shí)驗(yàn)中無法實(shí)現(xiàn)MEPHyperCel對(duì)血紅蛋白的有效洗脫.(4):MEP HyperCel分離卵黃抗體.結(jié)果表明MEP HyperCel對(duì)卵黃抗體具有良好的吸附選擇性.通過分離條件的優(yōu)化,MEP HyperCel一步分離卵黃抗體純度達(dá)到95﹪以上.MEP HyperCel吸附具有耐鹽特性,因此可以