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文檔簡介
1、抗菌測試抗菌測試試劑及儀器試劑及儀器(1)菌種:大腸桿菌;金黃色葡萄球菌;白色念球菌。(依條件而定)(2)樣品:含0%、3%、5%、7%、9%納米改性竹炭的聚丙烯母粒,3%纖維,含3%、5%納米改性竹炭聚丙烯無紡布,改性、未改性的竹炭粉體,外加竹炭滌綸、炭黑滌綸母粒。(可酌情選擇)(3)試劑:磷酸二氫鉀(或磷酸二氫鈉),瓊脂,牛肉膏,蛋白胨,氯化鈉,氫氧化鈉,鹽酸,去離子水。(4)儀器設(shè)備:分光光度計,濕熱壓力蒸汽滅菌鍋,電熱鼓風(fēng)干燥箱
2、,恒溫恒濕培養(yǎng)箱,超凈工作臺,數(shù)顯恒溫磁力攪拌器,玻璃恒溫水浴,菌落計數(shù)器,電子天平,三角燒瓶,培養(yǎng)皿,試管,定量刻度吸管,玻璃棒,等。實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容在進(jìn)行無菌操作時,所用的實驗材料、用具、實驗臺面、操作者的手均需消毒、滅菌、以保證無雜菌干擾,操作者的手可以用乙醇擦拭消毒。緩沖液及生理鹽水稀釋液配制緩沖液及生理鹽水稀釋液配制制備34g100ml磷酸二氫鉀緩沖溶液,用NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值為7.2~7.3,冷藏保存。實驗前取1ml緩沖溶
3、液用去離子水稀釋至800ml,分別裝入試管、燒杯、燒瓶,在0.1MPa、121℃下高溫滅菌20min,冷藏待用。制備0.85%氯化鈉,在試管內(nèi)各裝9ml鹽水,封口,在103kPa的滅菌鍋內(nèi)滅菌20min。培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制制備液體培養(yǎng)液(營養(yǎng)肉湯):牛肉膏5.0g,蛋白胨10g,氯化鈉5.0g,蒸餾水1000ml,加熱溶解后,以0.1molL的NaOH調(diào)PH為7.2~7.3,趁熱分裝,0.1Mpa高壓蒸汽滅菌20min。制備固體培養(yǎng)基
4、(營養(yǎng)瓊脂):牛肉膏5.0g,蛋白胨10g,瓊脂粉25g,氯化鈉5.0g,蒸餾水1000ml,將除瓊脂以外的各成分加熱溶解后,以NaOH調(diào)PH為7.2~7.3,加入瓊脂粉,加熱煮沸,使瓊脂溶化,分裝入燒瓶,封口,0.1MPa蒸汽滅菌20min。菌懸液的制備菌懸液的制備用取菌環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平皿上,在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h(大腸桿菌為30℃、金黃色葡萄球菌為37℃、白色念珠菌為26℃),取平皿上2~3個典型的菌落移到盛有肉
5、湯培養(yǎng)基的三角燒瓶中,在適宜的溫度下?lián)u晃培養(yǎng)24h,使其進(jìn)入穩(wěn)定的對數(shù)生長期,用分光光度計在475nm波長處測定營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)液的光密度為280,將該培養(yǎng)物用磷酸二氫鉀緩沖液稀釋至1000倍。振蕩搖瓶試驗法振蕩搖瓶試驗法①稱取0.75g試樣放入250ml的三角燒瓶中,加入70ml磷酸鹽緩沖溶液,高壓滅菌后加入5ml菌懸液,振搖2min,吸取1ml用0.85%生理鹽水稀釋液作梯度稀釋至l02,作為振蕩前樣液。②將0.75g試樣放入上述含有
6、70ml磷酸鹽緩沖溶液和5ml菌懸液的三角燒瓶中,振搖2h,吸取1ml樣液,用0.85%生理鹽水稀釋液作梯度稀釋至l02,作為振蕩后樣液。③瓊脂傾注法接種平皿:分別吸取振蕩前和振蕩后樣液各1ml,置于滅菌平皿內(nèi),每個樣液接種兩個平皿。樣液移入平皿后,及時將涼至46℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。實驗時,可將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基放置在(461)℃水浴中,方便使用。④待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿,置于37℃恒溫下培養(yǎng)48h
7、取出,記錄菌落數(shù)。數(shù)據(jù)選擇依據(jù)數(shù)據(jù)選擇依據(jù)(1)菌種液濃度的選擇振蕩搖瓶試驗法在操作過程中有一個關(guān)鍵內(nèi)容就是菌種濃度的選擇,因為最后細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果需用菌落記數(shù)儀記數(shù),如果菌種液中細(xì)菌數(shù)目過多將無法記數(shù),而細(xì)菌數(shù)目過少,又影響實驗的準(zhǔn)確性。一般選擇菌種液濃度使最后記數(shù)結(jié)果在200~20000之間,經(jīng)參考有關(guān)資料,實驗確定營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)懸濁液濃度用分光光度計在475nm波長處測定光密度為280,可以滿足實驗要求。(2)振蕩時間的選擇振蕩的目
8、的是為了使抗菌試樣與實驗菌充分接觸。許多文獻(xiàn)認(rèn)為,對于抗菌整理過的織物,振蕩時間達(dá)30min時其培養(yǎng)基中的細(xì)菌即消失,而未經(jīng)處理的參照樣的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)卻隨著振蕩時間的延長而增加。因此選擇振蕩時間為30min。(3)培養(yǎng)時間的選擇細(xì)菌的培養(yǎng)是指將細(xì)菌溶液用瓊脂在培養(yǎng)皿中制備傾點板,在恒溫、恒濕狀態(tài)下使細(xì)菌成長繁殖為肉眼可見的菌團(tuán),以便于記數(shù)。一般培養(yǎng)時間為24h,為保證菌團(tuán)完全長成,可延長培養(yǎng)時間到48h。評價指標(biāo)評價指標(biāo)在相同條件下
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