高效液相色譜儀使用中常見問題及解決方法

1、高效液相色譜儀使用中常見問題及解決方法高效液相色譜儀使用中常見問題及解決方法劉萍1，侯西成2，郝滿良1（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，河北保定071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院，河北保定071001）摘要：介紹了高效液相色譜儀的組成，列舉了使用過程中常見的技術(shù)問題和儀器故障，并對其進行分析，提出了一些解決的辦法和對策。關(guān)鍵詞：高效液相色譜儀；問題；解決方法ConmonProblemsCountermeasurefOperationof

2、HPLCstruementLIUPing1，HOUXicheng2，HAOManliang1(1.CollegeofAnimalScienceTechnologyAgriculturalUniversityofHebeiBaoding0710012.CollegeofFestryScienceAgriculturalUniversityofHebeiBaoding071001)Abstract:Thestructureofhighper

3、foananceliquidchromatography(HPLC)wasintroducedinthispaper.ItillustratesthecommonpromblanstroubleinHPLCanalysisgivestherespectivelytoexchangeexperiencewithotherHPLCanalysis.Kevwds:HPLCirrstrumenproblemresolvent高效液相色譜法(Hi

4、ghperfomanceliquidchromatographyHPLC)是20世紀(jì)60年代末迅速發(fā)展起來的一種新型分離技術(shù)。它以經(jīng)典液相色譜為基礎(chǔ)采用了高壓送液泵、微粒型填料和各種高靈敏度檢測器。因此具有適用范圍廣、分離效率高、分析速度快、流動相可選擇范圍寬、檢測靈敏度高、色譜柱可反復(fù)使用、流出組分容易收集等優(yōu)點[1]。目前在醫(yī)藥衛(wèi)生、食品、環(huán)保等各個領(lǐng)域已得到了廣泛的應(yīng)用。世界各國已將該法收載于藥典[24]。高效液相色譜儀在使用過程

5、中難免會出現(xiàn)各種各樣的問題并將直接影響到所測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因即可清楚預(yù)防和排除這些故障的方法就可正確地使用儀器并最大限度地發(fā)揮儀器的性能。1.高效液相色譜儀系統(tǒng)高效液相色譜儀是實現(xiàn)液相色譜分析的儀器設(shè)備，其基本單元組成如圖1所示，是由溶液貯液器、泵、進樣器、色譜分離柱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)幾部分組成[5]。圖1高效液相色譜儀器的組成高壓泵從溶液貯器中抽走流動相，流經(jīng)整個儀器系統(tǒng)，形成密閉的液體流路

6、。樣品通過進樣系統(tǒng)注入色譜分離柱，在柱內(nèi)進行分離。柱流出液進入檢測器，使已被分離的組分逐一被檢測器收集，并將響應(yīng)值轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柡蠼?jīng)放大被數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜峰，通過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對記錄的峰值進行存儲和計算，從而完成整個分析過程[6]。2.常見問題及其解決方法2.1柱壓問題所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值，而是指壓力波動范圍在345kPa以內(nèi)(在使用梯度洗脫時柱壓平穩(wěn)、緩慢的變化是允許的）[7]。壓力過高、過低都屬于柱壓問題縮短色

7、譜柱的使用壽命。溶液貯液器泵進樣器色譜分離柱檢測器記錄儀控制系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)自手動進樣器器質(zhì)溶劑配成樣品中有強保留的物質(zhì)（高Ｋ′值）以饅頭峰樣使用保護柱，如有必要，在進樣之前；在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處將波長調(diào)整至最大吸收波長流動相的ｐＨ值沒有調(diào)節(jié)好加適量的酸或堿調(diào)至最佳ｐＨ值對于硅膠基質(zhì)的填料其所能承受的流動相范圍約為1~8[9]2.3保留時間漂移保留時間的改變也是很多液相色譜儀使用者常碰到的問

8、題，簡單概括如下表3。表3保留時間漂移的原因及其解決方法原因原因解決方法解決方法柱溫控制不當(dāng)設(shè)定一個恒定的溫度，調(diào)好柱溫流動相的問題使用預(yù)混合則要注意每次配液的準(zhǔn)確性、精密度與ｐＨ值的變化；流動相被污染或加入添加劑后可能對待測組分存在干擾。色譜柱沒有平衡或被污染在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱（至少為0.5～1ｈ，在改變流動相時也需要0.5ｈ）或更換新色譜柱。流動相的問題使用預(yù)混合則要注意每次配液的準(zhǔn)確性、精密度與ｐＨ值的變化；

9、流動相被污染或加入添加劑后可能對待測組分存在干擾。流速變化重新設(shè)定流速泵中有氣泡從泵中除去氣泡2.4異常峰形異常的色譜峰指的是色譜圖中無峰或出現(xiàn)負(fù)峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱等情況[10]。具體問題具體分析，根據(jù)出現(xiàn)問題峰的原因采取不同的解決方法。（見表4）表4異常峰形及其分析出現(xiàn)情況出現(xiàn)情況分析及解決方法分析及解決方法色譜圖中未出峰系統(tǒng)未進樣或樣品分解；泵未輸液或流動相使用不正確；檢測器設(shè)置不正確。針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可所

10、出峰比預(yù)想的小樣品黏度過大；進樣故障或進樣體積誤差；檢測器設(shè)置不正確；定量環(huán)體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現(xiàn)問題一個峰或幾個峰是負(fù)峰流動相吸收本底值高；進樣過程中進入空氣；樣品組分的吸收低于流動相所有峰均為負(fù)峰信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒；光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡所有峰均為寬峰系統(tǒng)未達(dá)到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響出現(xiàn)雙峰或肩峰進樣量過大；樣

11、品濃度過高；保護柱或色譜柱柱頭堵塞；保護柱或色譜柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道鬼峰進樣閥有殘余，在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統(tǒng)；樣品中存在未知物，改進樣品的預(yù)處理；流動相污染，更換新流動相，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動相再次使用時要過濾；盡可能使用ＨＰＬＣ級試劑；流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除拖尾峰柱超載，降低樣品量；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾，對樣品進行清潔過濾；調(diào)整流動相；硅羥基作用，加入三