鹽脅迫處理對洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞凋亡情況、過氧化物酶分布的影響

1、鹽脅迫處理對洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞凋亡情況、過氧化物酶分布的影響【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、鞏固細(xì)胞中過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法；2、鞏固DNA凝膠電泳反應(yīng)的原理和方法；3、鞏固染色體染色反應(yīng)的原理和方法；4、了解洋蔥鱗莖細(xì)胞在不同濃度不同離子作用下的狀態(tài)?！緦?shí)驗(yàn)原理】細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡，普遍存在與生物界，是多細(xì)胞生物體在發(fā)育過程中或在某些環(huán)境因子的作用下發(fā)生的、由基因控制的、細(xì)胞遵循自身程序主動結(jié)束生命的過程。細(xì)胞凋亡主要特征包括：染色質(zhì)凝集

2、、斷裂、趨邊化，核裂解，質(zhì)膜出芽、形成凋亡小體、但細(xì)胞膜完整，這些現(xiàn)象可通過形態(tài)學(xué)觀察鑒定。過氧化物酶是一類重要的氧化還原酶，廣泛存在于植物、動物和微生物體內(nèi)的各種組織細(xì)胞中。在動物的中性粒細(xì)胞及肝、腎細(xì)胞中，在植物老化的組織中尤其豐富。過氧化物酶在細(xì)胞內(nèi)較多地存在于過氧化物酶體中，參與細(xì)胞中的各種氧化反應(yīng)，將底物氧化。聯(lián)苯胺與過氧化氫同時處理標(biāo)本時，細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶通過將底物過氧化氫分解，產(chǎn)生氧，進(jìn)而能把無色的聯(lián)苯胺氧化脫氫，生成藍(lán)

3、色的聯(lián)苯胺藍(lán)。聯(lián)苯胺藍(lán)很不穩(wěn)定，可自然地轉(zhuǎn)變?yōu)樽厣穆?lián)苯胺棕。因此可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定細(xì)胞內(nèi)過氧化物酶的存在狀況。中性紅是一種弱堿性pH指示劑，變色范圍pH6.4～8.0之間（由紅變黃）。在中性或微堿性環(huán)境中，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌，由于液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng)，因此，進(jìn)入液泡的中性紅便解離出大量陽離子而呈現(xiàn)櫻桃紅色，在這種情況下，原生質(zhì)和細(xì)胞壁一般不著色；死細(xì)胞由于原生質(zhì)變性凝固，細(xì)胞液不能維持在液泡內(nèi)，因此，

4、用中性紅染色后，不產(chǎn)生液泡著色現(xiàn)象，相反，中性紅的陽離子，卻與帶有一定負(fù)電荷的原生質(zhì)及細(xì)胞核結(jié)合，而使原生質(zhì)與細(xì)胞核染色。改良苯酚品紅可對染色體染色，是近年來觀察植物染色體時新使用的比較理想的染色劑。，0.5molLMgCl2，0.1molLCaCl2，0.5molLCaCl2，清水中，每種各設(shè)置兩組平行實(shí)驗(yàn)，標(biāo)記。4、每2個小時取出個培養(yǎng)液中的洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，按照以下步驟進(jìn)行操作。分別記錄2、4、6、8小時后發(fā)生的現(xiàn)象，拍照，并填入以

5、下表格。一、中性紅檢驗(yàn)細(xì)胞活性一、中性紅檢驗(yàn)細(xì)胞活性1、用吸管在載玻片的中央滴一滴清水；2、用鑷子從洋蔥的內(nèi)表皮上撕取一小塊透明薄膜，用中性紅染色1015min。3、把薄膜置于清水中漂洗1015min，用濾紙吸干表面水分；4、將表皮細(xì)胞置于載玻片上展開，滴一滴清水，蓋上蓋玻片，鏡檢。二、過氧化氫酶的顯示（聯(lián)苯胺反應(yīng)）二、過氧化氫酶的顯示（聯(lián)苯胺反應(yīng)）1、用鑷子撕取處理過的洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞一小塊透明薄膜；；2、分別浸在溶有0.1%鉬酸銨（起

6、催化作用）的鹽水溶液的培養(yǎng)皿中5min；3、分別浸在有聯(lián)苯胺溶液的培養(yǎng)皿內(nèi)2min至切片出現(xiàn)藍(lán)色；4、在0.85%鹽水溶液中洗1min；5、將表皮細(xì)胞置于載玻片上展開，用濾紙吸干表面水分，滴一滴清水，蓋上蓋玻片，鏡檢。三、染色體染色（改良苯酚品紅）三、染色體染色（改良苯酚品紅）1、用鑷子撕取處理過的洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞一小塊透明薄膜；2、用改良苯酚品紅染液染色20min，沖洗表面浮色；3、將表皮細(xì)胞置于載玻片上展開，用濾紙吸干表面水分，滴一滴