生物樣品微量藥物的分析技術(shù)(130535)

1、1生物樣品微量藥物的分析技術(shù)體內(nèi)藥物分析是指體內(nèi)樣品（生物體液、器官或組織）中藥物及其代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)的定量分析。體內(nèi)藥物分析與體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究和臨床治療藥物監(jiān)測(cè)密切相關(guān)，它直接關(guān)系到藥物的體內(nèi)作用機(jī)制探討與質(zhì)量評(píng)價(jià)和藥物臨床使用的安全、有效與合理。藥物產(chǎn)生藥理作用的強(qiáng)度與其在體內(nèi)作用部位（受體組織）的濃度直接相關(guān)，而藥物在體內(nèi)主要依靠血液輸送至作用部位，因此血藥濃度可作為藥物在作用部位濃度的表觀指標(biāo)，即血液是體內(nèi)藥物分析的

2、主要樣品。另外，尿液、唾液、頭發(fā)和臟器組織等也可作為體內(nèi)樣品。藥物在體內(nèi)的某些代謝產(chǎn)物常具有一定的生理活性，它們?cè)隗w內(nèi)的變化規(guī)律對(duì)母體藥物的藥理學(xué)與毒理學(xué)評(píng)價(jià)極為重要；機(jī)體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)往往參與機(jī)體重要的生理過(guò)程，其變化規(guī)律的異常改變也與某些疾病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。所以，體內(nèi)特定藥物代謝物和機(jī)體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)也是體內(nèi)藥物分析監(jiān)測(cè)的目標(biāo)。藥物進(jìn)入體內(nèi)后，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與存在狀態(tài)均可能發(fā)生顯著變化。在體液中，藥物的存在形式多樣化，除游離

3、型的原形藥物或其代謝物，也有原形藥物或其代謝物與葡萄糖醛酸等內(nèi)源性小分子經(jīng)共價(jià)結(jié)合的結(jié)合物（或稱(chēng)綴合物，conjugate），還有與蛋白質(zhì)分子經(jīng)氫鍵及其他分子間力結(jié)合的結(jié)合型藥物；而且藥物及其代謝物的濃度通常很低、干擾物質(zhì)多。在測(cè)定體內(nèi)藥物及其特定代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)時(shí)，除少數(shù)情況將體液作簡(jiǎn)單處理后可直接測(cè)定外，通常在測(cè)定之前要對(duì)體內(nèi)樣品進(jìn)行分離凈化與濃集等樣品前處理，從而為體內(nèi)樣品中藥物的測(cè)定提供良好的環(huán)境與條件。常用的樣品前處

4、理方法包括：去除蛋白質(zhì)、綴合物水解、化學(xué)衍生化、分離濃集等方法。其中，去除蛋白質(zhì)法主要有溶劑沉淀法、中性鹽析法、強(qiáng)酸沉淀法、超濾法及熱凝固法；分離濃集法通常采用液相萃取、固相萃取與膜分離技術(shù)。從藥物的研究到臨床應(yīng)用，藥物質(zhì)量的正確評(píng)價(jià)尺度是有效性和安全性，即根據(jù)藥物在體內(nèi)的表現(xiàn)作出評(píng)價(jià)。新藥進(jìn)入臨床之前，首先在試驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)和毒代動(dòng)力學(xué)研究。所以，體內(nèi)藥物分析的對(duì)象不僅是人3內(nèi)樣品中生物大分子類(lèi)藥物的測(cè)定；生物學(xué)或微生物學(xué)方

5、法適用于體內(nèi)樣品中抗生素類(lèi)藥物的測(cè)定。建立可靠的和可重復(fù)的定量分析方法是進(jìn)行體內(nèi)樣品分析的基礎(chǔ)。為了保證分析方法的可行性與可靠性，體內(nèi)樣品分析方法在用于實(shí)際樣品的分析之前，必須對(duì)方法進(jìn)行充分的方法學(xué)驗(yàn)證。體內(nèi)樣品分析方法的驗(yàn)證分為全面驗(yàn)證和部分驗(yàn)證兩種情況。對(duì)于首次建立的體內(nèi)樣品分析方法、新的藥物或新增代謝物定量分析，應(yīng)進(jìn)行全面的方法驗(yàn)證。分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容包括分析方法的效能指標(biāo)（即：特異性、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和定量范圍、定量下限、精密度與準(zhǔn)確度

6、）與樣品（包括：體內(nèi)樣品、制備樣品及標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液）穩(wěn)定性及提取回收率的驗(yàn)證。第一節(jié)常用體內(nèi)樣品的制備與貯藏一、體內(nèi)樣品的種類(lèi)體內(nèi)藥物分析采用的體內(nèi)樣品包括血液、尿液、唾液、頭發(fā)、臟器組織、乳汁、精液、腦脊液、淚液、膽汁、胃液、胰液、淋巴液、糞便等樣品。但其中最常用的是血漿或血清，因?yàn)樗鼈兛梢暂^好地體現(xiàn)藥物濃度和治療作用之間的關(guān)系。當(dāng)藥物在體內(nèi)被迅速代謝，且其代謝物大量排泄至尿中時(shí)，也采用尿液樣品，使在血樣中不易檢出的藥物，以代謝物形式在尿

7、液中被檢測(cè)。尿液可用于生物利用度、尿藥排泄量等的測(cè)定。某些藥物，如苯妥英等的唾液濃度被認(rèn)為可以代表血漿中游離藥物的濃度，所以唾液也可用于某些藥物的臨床治療監(jiān)測(cè)；如果懷疑藥物可損傷血腦屏障，腦脊液的藥物濃度偶爾也進(jìn)行測(cè)定；頭發(fā)作為體內(nèi)樣品可用于藥物濫用的監(jiān)測(cè)或微量元素的測(cè)定。在進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)研究藥物體內(nèi)吸收、分布狀態(tài)以及藥物過(guò)量中毒死亡患者的解剖檢驗(yàn)，常采用胃、腸、肝、腎、肺、腦、肌肉、組織等作為體內(nèi)樣品。在特殊情況下亦有采用乳汁、精液、淚