苯胺分解菌的帥選、培養(yǎng)及其功能研究.pdf

1、苯胺作為工業(yè)中的重要化工原料，也成為了環(huán)境中難降解污染物之一。目前，對苯胺類污染物的處理越來越受到重視，在處理苯胺的眾多方法中，微生物降解苯胺由于成本低、效率高、無二次污染等優(yōu)點，受到廣泛關(guān)注，而此方法的基礎(chǔ)即篩選出可以高效降解苯胺的菌株。本文進行的主要研宄包括苯胺降解菌的馴化、篩選分離與鑒定、生長條件優(yōu)化以及各種因素對降解效率造成的影響。本研究主要內(nèi)容包括：
　　⑴從馴化后的活性污泥中篩選苯胺降解菌，首先在富集培養(yǎng)基中進行富集培

2、養(yǎng)，再從富集培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接到篩選培養(yǎng)基，最后涂平板、劃線分離，純化培養(yǎng)。結(jié)果我們篩選得到一株可在含1000mg/L苯胺的無機鹽培養(yǎng)基中生長，3 d后對培養(yǎng)基中的苯胺降解率可達到50％左右的菌株，并對其命名為DK。我們對降解菌菌落觀察和革蘭氏染色實驗，確定菌株為革蘭氏陰性菌。經(jīng)過ATB細菌檢定儀的生理生化試驗、16S rDNA序列測定和基于16S rDNA序列系統(tǒng)樹分析，確定了菌株D K屬于代爾夫特菌屬iDelftia sp.)。菌株通過掃描

3、電鏡的觀察，外形大多呈桿狀，長度在3 u m左右，寬度小于0.5um，菌與菌之間已發(fā)生交聯(lián)。
　　⑵在LB培養(yǎng)基中通過正交試驗的設(shè)計，分別考察溫度、pH、搖床轉(zhuǎn)速以及苯胺濃度對菌株DK生長狀況的影響。結(jié)果顯示：四種因素中按照對菌株DK生長量影響大小順序依次為：pH>搖床轉(zhuǎn)速>溫度>苯胺濃度。分析確定了D K的最優(yōu)生長條件：溫度30℃，pH為8.0，搖床轉(zhuǎn)速250r/min，苯胺濃度0mg/L。無機鹽培養(yǎng)基中通過單因素的實驗設(shè)計，菌

4、株最佳培養(yǎng)時間在54h左右，最適生長溫度32℃，最適生長p H為6.0。在此條件下，繪制出菌株DK無機鹽培養(yǎng)基中生長曲線。菌株可以在含有較高濃度苯胺的培養(yǎng)基中存活，耐受度達到3500mg/L。
　?、峭ㄟ^單因素實驗設(shè)計，不同溫度、pH以及接種量對苯胺的降解率的影響，結(jié)果顯示：菌株D K降解苯胺的最佳溫度和pH分別為32℃和7.0，與菌株的最適生長條件不盡相同。隨著接種量增加，苯胺降解越快。在無機鹽培養(yǎng)基中，不同的苯胺濃度、不同的金

5、屬離子和外加碳源或者氮源對苯胺降解率的影響表現(xiàn)為：苯胺初始濃度較低條件下降解較快，較高濃度時降解較慢，表明苯胺不僅是該菌株的碳、氮源，高濃度苯胺也會抑制菌株D K的生長。Fe2+和Cu2+可以促進苯胺的降解，且 Fe2+對D K的降解促進效果較佳，優(yōu)于Cu2+。Cr(Ⅵ）和A l3+則抑制D K對苯胺降解作用，其中Cr(Ⅵ）抑制效果尤為突出，可使菌株對苯胺的降解完全停止，原因可能是Cr(Ⅵ）加入后對菌株有致死的效果。外加碳源、氮源的影響