耳聾操作培訓(xùn)

1、凱普技術(shù)支持中心2016.09,凱普耳聾產(chǎn)品操作培訓(xùn),成人男性和女性及新生兒（或患兒）外周血及血斑 抗凝外周血全血(不可用肝素抗凝)?？鼓?-8℃存放7天以內(nèi)；在-20℃或 -80℃；保存時間可至兩年以上，但要避免反復(fù)凍融。濾紙干血斑樣本：制備完成的采集卡常溫、干燥、避光最多可保存3周， 2℃~8℃可保存一個月， -20℃可保存三個月。羊水 羊水穿刺檢查宜在孕16～21周進行。2~8℃保存不超過24h，-20

2、℃或 -80℃其保存時間可至半年以上。建議先將羊水離心收集細胞后，倒掉上清再冷凍保存，以免細胞裂解，核酸釋放到液體中，影響DNA產(chǎn)量。 絨毛膜 早孕絨毛采樣檢查宜在孕8～11周進行。2~8℃保存不超過24h，-20℃或 -80℃其保存時間可至半年以上,,適用樣本及保存時間,抗凝血全血樣本DNA提取方法,血液取樣前應(yīng)混合均勻,裂解過程中最好顛倒幾次，有利于裂解充分,加4度冰凍的無水乙醇可提高DNA回收效率,TE洗脫液

3、可稍微加熱，并將洗脫液加至硅膠膜上靜置再進行離心洗脫，有利于提高DNA的回收率。,羊水樣本DNA提取方法,1）取5-10ml羊水樣本，放入合適的離心管中，4000rpm離心10min2）去上清，在離心管中加入400ml的生理鹽水或溶液P，混勻3）取步驟2中的溶液200ul，下同血液DNA提取方法。剩余標(biāo)本保存，以備復(fù)查使用,血斑樣本DNA提取方法,以下步驟同血液DNA提取相同,注意：1，解凍完全的MIX試劑和-20℃保存的Taq酶

4、取出后需點動離心（必須?。?，二者按相應(yīng)的比例混合后，輕力混勻，點動離心。Taq酶不能在室溫放置時間過久2，因MIX和酶在混合后分裝過程中會有損失，建議在配試劑時A、B組按28μl進行計算3，若DNA質(zhì)量不佳，在加模板時可適當(dāng)加大模板量0.5-1μL4, MIX應(yīng)避免反復(fù)凍融,擴增體系的配置,耳聾易感基因擴增為多重PCR擴增，對PCR儀質(zhì)量要求較高，建議選用進口PCR儀(推薦使用ABI)，博日TC-96A PCR儀亦可。A

5、組耳聾和B組耳聾的PCR擴增程序一樣，可同時在同一臺PCR儀上進行擴增。最好選用進口PCR管，PCR管避免長時間在紫外線下照射，在上機前應(yīng)確保PCR管底無氣泡PCR擴增完成后可在4℃暫存，如需過夜放置，需將PCR產(chǎn)物放置在-20℃,擴增注意事項,雜交過程及其注意事項,同一樣本的A，B擴增產(chǎn)物加在一個反應(yīng)室內(nèi),WB1清洗時一定要用低速排液,雜交過程及其注意事項,雜交過程中實時問題處理參見21分型產(chǎn)品,結(jié)果判讀,耳聾結(jié)果判讀需謹(jǐn)慎對

6、待！,耳聾基因檢測結(jié)果由于無其他相關(guān)數(shù)據(jù)可供核對驗證，因此對結(jié)果的判讀應(yīng)當(dāng)尤為謹(jǐn)慎。對于新生兒篩查等標(biāo)本量較大的項目，陽性率相對較低，可以通過對陽性標(biāo)本進行測序以確認(rèn)最終的實驗結(jié)果。對雜交信號不強、背景不好的試驗結(jié)果，需謹(jǐn)慎對待；特別是對于線粒體DNA的相關(guān)位點如1494M、1555M，如無法確定是否有雜交信號需重做。對于雙重雜合或純合子，最好能夠安排再次重檢，以再次確認(rèn)實驗結(jié)果。,結(jié)果判讀,耳聾檢測結(jié)果判讀需謹(jǐn)慎對待！,免費測

7、序范圍,1 、正常對照點和突變點均未出的樣本，已經(jīng)過兩次或以上的復(fù)查，結(jié)果仍是如此的；2、正常對照點顯色正常，而突變位點的顯色較淺的樣本，已經(jīng)過兩次或以上的復(fù)查，結(jié)果仍是如此的；3、 檢測結(jié)果與其它產(chǎn)品不一致4、 試驗結(jié)果與理論不符,測序服務(wù),標(biāo)本郵寄地址：廣州市黃埔區(qū)中新知識城鳳凰三橫路71號收件人：姚婕：15880292285 。需測序標(biāo)本在寄送前需告知負責(zé)該家醫(yī)院的市場或技術(shù)人員以便后期跟進。因快遞公司不接受血液樣

8、品的郵寄工作，建議醫(yī)院將血液包裝過后郵寄，并附帶樣本基本情況的說明。,試劑盒范圍內(nèi)測序服務(wù),試劑盒范圍外測序服務(wù),試劑盒范圍外的特殊樣本從醫(yī)院正式開展之日起一年內(nèi)提供免費服務(wù)，之后按200元/例的標(biāo)準(zhǔn)收費。如臨床樣本中發(fā)現(xiàn)稀有型別，合作的學(xué)術(shù)成果，包括文章，專利等，公司和醫(yī)院共享。,測序服務(wù),,,1 廣東省內(nèi)：送測之日起8至12個工作日。2 廣東省外：送測之日起20個工作日。（因血液制品需走陸運，故省外樣本的測序時間較長）3 臨