人教課標版高中生物選修1教學課件2.2《土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)》共28張

1、課題2：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù),,1.研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用；2.進行微生物數(shù)量的測定；3.分析研究思路的形成過程，找出共性和差異性。,尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，分子式為H2NCONH2，不能直接被農(nóng)作物吸收。,土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。今天我們來學習如何分離以尿素為氮源的微生物。,1、尿素的利用,尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。

2、,2、細菌利用尿素的原因,土壤中的細菌分解尿素是因為它們能合成脲酶,3、常見的分解尿素的微生物,芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。,4、課題目的,①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌,②統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌,1、實例：DNA多聚酶鏈式反應是一種在體外將少量DNA大量復制的技術，此項技術要求使用耐高溫（93 ℃）的DNA聚合酶。,原因：因為熱泉溫度70～80 ℃

3、，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細菌被篩選出來。,要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等； 方法：⑴抑制大多數(shù)微生物不能生長；⑵造成有利于該菌生長的環(huán)境。 結果：培養(yǎng)一定時間后，該菌數(shù)量上升，再通過平板稀釋等方法對它進行純化培養(yǎng)分離。,2、實驗室中微生物的篩選原理：,培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)

4、育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。,3、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理,1、顯微鏡直接計數(shù)：,利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。,不能區(qū)分死菌與活菌； 不適于對運動細菌的計數(shù)； 需要相對高的細菌濃度； 個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；,缺點,2、間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法） ⑴原理：在稀釋度足夠高時，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的，即一個菌

5、落代表原先的一個單細胞。 ⑵常用方法：稀釋涂布平板法。,每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×MC代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。,計數(shù)法,,直接計數(shù)法平板計數(shù)法比濁法膜過濾法,從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。 取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。,“微生物

6、的天然培養(yǎng)基”,數(shù)量最大、種類最多,大約70%—90%是細菌,制備選擇培養(yǎng)基（尿素為唯一氮源）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,（對照作用）,思考？為什么還要制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基？,◆應在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^程中每一步都要在火焰旁進行,◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計數(shù)的平板,為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總

7、量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？,原因：土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為2185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。,結論：為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應當有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。,取0.1ml菌懸液,高濃度→低濃度，換槍頭,低濃度→高濃度，可不用換槍頭,接 種,涂布分離,在菌落計數(shù)時，

8、每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。 選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。,培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。 細菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d 放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d 霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。,按濃度捆成一摞,恒溫37℃培養(yǎng),菌落,1.通過對照實驗，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿

9、素的微生物。 2.提示：選擇每個平板上長有30—300個菌落的稀釋倍計算每克樣品的菌數(shù)最合適。同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)不能相差懸殊，如相差較大，表示實驗不精確。,結果分析與評價,3,1.對細菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是（ 　 ） A.在液體培養(yǎng)基上進行 B.至少接種一種細菌 C.接種一個細菌 D.及時補充消耗的營養(yǎng)物質(zhì) 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是( )

10、 A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3　　 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素,A,D,3.下列說法不正確的是（ 　 ）A.科學家從70－80度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶B.統(tǒng)計某一稀釋度的5個平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計值C.設置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度D.同其他生物環(huán)境