肝衰竭機制和治療研究進展

1、,肝衰竭機制和治療研究進展,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,肝衰竭患者病情危重極度乏力，消化道癥狀，腹脹或腹水；黃疸進行性加深（TB＞171umol/L或每天上升17umol/L）；明顯出血傾向，PTa＜40%；肝性腦病和/或肝臟進行性縮小。 肝細胞大片壞死,各種類型肝衰竭發(fā)病機制、關(guān)鍵物質(zhì)尚未明確內(nèi)科綜合治療：病死率達80％ 如何提高療效是國際性難題,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病

2、診治國家重點實驗室,肝衰竭的定義,肝衰竭是由多種因素引起肝細胞嚴重損害，導(dǎo)致其合成、解毒和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴重障礙，出現(xiàn)以黃疸、凝血功能障礙、肝性腦病和腹水等為主要表現(xiàn)的一種臨床綜合征,中華醫(yī)學(xué)會感染病分會、肝病分會肝功能衰竭與人工肝學(xué)組. 肝功能衰竭診療指南. 中華傳染病雜志.2006，24：422,我國肝衰竭診療指南已頒布,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,肝衰竭的分類,中華醫(yī)學(xué)會感染病分會、肝病分會肝功

3、能衰竭與人工肝學(xué)組. 肝功能衰竭診療指南. 中華傳染病雜志.2006，24：422,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,肝衰竭的病因,中國病毒性肝炎為主,歐美藥物 、酒精性為主,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,肝衰竭的病理生理,發(fā)病機制、關(guān)鍵物質(zhì)未明,阻斷惡性循環(huán)的治療措施有待改善,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,肝 衰 竭 發(fā) 病 機 制,目前認為肝損傷導(dǎo)

4、致肝衰竭發(fā)生的原因大致可以分為化學(xué)性損傷和免疫損傷兩大類化學(xué)性損傷與在肝臟解毒的物質(zhì)有毒性代謝產(chǎn)物相關(guān)，通過影響細胞膜、線粒體、胞內(nèi)離子的穩(wěn)定和各種降解酶類起作用。免疫性損傷和宿主自身免疫狀態(tài)及其易感性、細胞毒性T細胞反應(yīng)、巨噬細胞的激活、細胞因子、一氧化氮、補體等相關(guān)。,近年在應(yīng)用代謝組學(xué)方法研究肝衰竭發(fā)病過程中未知關(guān)鍵物質(zhì)及以內(nèi)毒素為軸線的腸道微生態(tài)失衡和肝衰竭相關(guān)性等方面取得了諸多進展,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病

5、診治國家重點實驗室,———腸道微生態(tài)在肝衰竭 發(fā)生發(fā)展中的作用,肝衰竭發(fā)病機制研究進展,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,微生態(tài)是人體的有機組成部分,人體正常菌群種類500余種 數(shù)量100萬億個（人體體細胞僅10萬億個） 平均重約1.5kg，相當(dāng)于肝臟的重量 99.9%是以雙歧桿菌和類桿菌為主的專性厭氧菌 0.1%是以腸桿菌科細菌為主的兼性厭氧菌,,1g,,,1000g(80%)

6、,,,20g,,200g,,20g,,10g,,20g,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,,森林砍伐等→ 宏觀生態(tài)破壞→ 洪水、沙漠化、沙塵暴等,宏觀生態(tài)破壞,政府已高度重視,,微觀生態(tài)破壞,21世紀全球面臨的新問題 　　　亟需新理論、新方法,抗生素免疫抑制劑肝病等疾病,微生態(tài)失衡嚴重危害人體健康,微生態(tài)失衡,細菌耐藥,難治性感染,肝衰竭等多器官功能不全,,,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科

7、 傳染病診治國家重點實驗室,Science, June 2005,308: 1635-1638,國際學(xué)界對腸道微生態(tài)的再認識,腸道微生物是人體提供營養(yǎng)，調(diào)控上皮發(fā)育和指導(dǎo)先天性免疫的不可缺少的“器官”,,Paul Eckburg, Stanford UniversitySteven Gill, Karen Nelson, TIGR/VI,,,,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,微生態(tài)學(xué)研究技術(shù)平臺的發(fā)展,Yu

8、 y, Sheng GP,et al J Proteom Res, 2007;6:2413-19,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,感染微生態(tài)與肝病相關(guān)系列研究,動物模型研究（大鼠）急性肝衰竭模型（30只）肝臟缺血再灌注模型（36只）肝移植模型（80只）,臨床研究慢性肝炎（30例）慢性重型肝炎患者（31例）肝硬化患者（51例）肝移植患者（113例）,采 樣 ： 血、糞便、肝組織、腸道組

9、織、腸系膜淋巴結(jié)等檢測內(nèi)容： 生化、內(nèi)毒素、細胞因子、細菌培養(yǎng)、分子生態(tài)、組織病理及代謝組學(xué),內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,研究發(fā)現(xiàn)慢性肝衰竭患者腸道菌群嚴重失衡,Li Lj，et al, Chin Med J . 2001:114(12):869-872,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,研究發(fā)現(xiàn)肝病腸道微生態(tài)失衡與內(nèi)毒素血癥 密切有關(guān),腸粘膜屏障損傷,腸道定植抗力↓,,,,,,,

10、Li Lj，et al, Chin Med J . 2001:114(12):869-872；,Li LJ et al, WJG 2004; 10(14) :2087-2090,,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,Chen CL,et al. J Infect 2007;54:98-102 Li Lj，et al, Chin Med J . 2001:114(12):869-872 Li Lj et al.W

11、orld J Gastroenterol. 2004,15:2087-90,.,應(yīng)用微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，可通過有效調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)，降低肝病內(nèi)毒素血癥，有效改善肝臟功能,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,腸道微生態(tài)變化與肝衰竭模式圖,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,———肝衰竭代謝組學(xué)研究以尋找 肝衰竭發(fā)生發(fā)展關(guān)鍵物質(zhì),肝衰竭發(fā)病機制研究進展,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診

12、治國家重點實驗室,繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)后，近年興起的生命學(xué)科主要研究由機體病理生理刺激或遺傳變異引起的多參數(shù)代謝應(yīng)答，以及代謝物變化規(guī)律,代謝組學(xué),代謝組學(xué)、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組與環(huán)境之間存在相互作用、相互依存的關(guān)系,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,闡明肝衰竭發(fā)生發(fā)展關(guān)鍵物質(zhì),主成分分析（PCA）降維處理,代謝譜分析對分組準確性,樣品采集、前處理,質(zhì)譜檢測代謝物,獲得大量代謝物數(shù)據(jù),起關(guān)鍵作用的代謝標志物分

13、析,肝衰竭代謝組學(xué)研究方法,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,建立了GC-MS研究代謝組學(xué)的方法,,,,J proteome res. 2007, In press,重型肝炎（肝衰竭）代謝組學(xué)研究,對血清樣品應(yīng)用新的衍生化方案進行代謝組學(xué)研究，氣相色譜質(zhì)譜（GC-MS）總離子流譜圖具有良好的重復(fù)性,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,代謝譜主成分分析判斷肝衰竭患者病情,,,,病例選擇：肝衰

14、竭24例健康對照23例,健康對照組和肝衰竭組經(jīng)主成分分析，可完全區(qū)分開,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,代謝譜與MELD分級進行判別分析，發(fā)現(xiàn)代謝譜可判斷肝衰竭嚴重程度，其預(yù)測正確率達91.7%,代謝譜與MELD分級比較,重型肝炎肝衰竭血清代謝組學(xué)研究為病毒性肝炎嚴重程度判斷標準的完善提供了新的思路,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,慢加急肝衰竭代謝組學(xué)研究,研究對象：慢加急肝衰竭3

15、7例健康對照50例實驗方法：LC-MS研究目的：檢測新的判斷疾病的標志物，為臨床診斷和治療提供依據(jù),,,,,差異代謝物,UPLC-Q-TOF檢測兩組不同來源分組代謝譜的差異,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,（?）健康人（?）肝衰竭患者,各項GC-MS檢測代謝物譜圖：谷胺酰胺、苯丙氨酸等顯著升高，乳糖、葡萄糖及三羧酸循環(huán)相關(guān)代謝物濃度下降，核苷血清水平升高，這些與肝臟損傷直接相關(guān),健康組,肝衰竭組,苯丙

16、氨酸,谷胺酰胺,乙二酸,纈氨酸,甘氨酸,葡萄糖,3-羥基-1,2,3-丙烷三羧酸,1-丙烯-1,2,3-三羧酸,尿素,乳酸,蘇氨酸,甘氨酸,L-脯氨酸,L-蘇氨酸,半乳糖,絲氨酸,甘油酸,脯氨酸,L-絲氨酸,脯氨酸,核糖,核糖醇,2-脫氧-吡喃型半乳糖,果糖,葡萄糖,松二糖,半乳糖,軟脂酸,肌醇,**,**,**,**,**,**,**,**,*,*,**,**,**,*,*,*,* p<0.05, ** p<0.01,,內(nèi)

17、科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,發(fā)現(xiàn)20余個生物標記物，其中甘氨鵝脫氧膽酸、溶血磷酯與傳統(tǒng)肝功能指標不同，對疾病診斷具有重要意義,J of Proteome Res. 2006, 5, 554-561,發(fā)現(xiàn)潛在的代謝標記物,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,潛在標記的代謝通路,溶血磷酯、膽紅素、膽酸、甘氨酸脫氧膽酸之間存在相互網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，并參與疾病的進展,傳統(tǒng)標記：膽紅素等,新鑒定的標記物,

18、,,溶血磷酯類,直接膽紅素,總膽紅素,膽酸,甘氨鵝脫氧膽酸,,,,,,,,,,,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,肝衰竭的治療,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,——人工肝研究進展,肝衰竭治療研究進展,人工肝治療原理,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,人工肝分型,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,非生物人工肝支持系統(tǒng)(ALSS)設(shè)計原理,血

19、液灌流：清除中分子量有毒物質(zhì)血漿吸附：吸附膽紅素、毒素血液透析 平衡水、電解質(zhì)，去除代謝產(chǎn)物血液濾過 清除中、小物質(zhì)有毒產(chǎn)物血漿置換：清除病毒和有毒物質(zhì)，補充蛋白質(zhì)、凝血因子，調(diào)整血氨基酸比例,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,選擇性血漿置換,普通血漿分離器用于重型肝炎的局限性血漿置換后球蛋白明顯下降原因是補充的新鮮血漿的球蛋白20g/L(正常值為20-35g/L將HGF等有益的物質(zhì)無選擇性的除

20、去，可能會影響到肝細胞的再生,EC-4A 選擇性血漿分離器,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,小孔徑(0.03 µm ) 血漿分離器用于肝衰竭治療的優(yōu)點（即選擇性血漿置換） *,由于其對球蛋白的篩選系數(shù)，避免了血漿置換后的低膠體滲透壓及低球蛋白血癥減少了置換的血漿量，一次治療節(jié)約1000的血漿由于HGF在體內(nèi)以分子量>200萬道爾頓的形式存在，利用小孔徑血漿分離器的應(yīng)用減少了肝細胞生長因子

21、的減少小孔徑血漿分離器在應(yīng)用中的另一個優(yōu)點是：跨膜壓非常平穩(wěn),*Li LJ, et al. Ther Apher 2005, 9(5):424-429,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,進展－－血漿透析濾過Plasma Dia-filtration (PDF),將血漿置換與血液透析、血液濾過等結(jié)合起來聯(lián)合應(yīng)用 清除向血管內(nèi)移動較慢的物質(zhì)可設(shè)定脫水量，控制體內(nèi)水分量血漿使用量減少，僅為PE使用量的一半（1

22、600ml）,,,補充液,,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,非生物型ALSS方案組合,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,ALSS治療取得顯著療效,*Li Lanjuan,et al. Chinese Medical Journal, 2001, 114(9):941-945,,肝功能明顯改善 P<0.001,內(nèi)毒素顯著下降 P<0.005,蛋氨酸顯著下降 P<0.

23、001,BCAA/AAA比值上升P<0.05,,治療前,,治療后,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,ALSS治療重型肝炎療效,自1986年以來，浙醫(yī)一院應(yīng)用ALSS治療重型肝炎1000余例（3600余例次），顯著降低重型肝炎病死率,重型肝炎的治愈好轉(zhuǎn)率,不同分期重型肝炎的治愈好轉(zhuǎn)率,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,典型病例

24、,,女性，30歲，產(chǎn)后罹患重型肝炎、肝性腦病3期，分別于入院后1、2、4天接受3次人工肝治療，肝功能和全身情況改善明顯,康復(fù)出院,,,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,3次ALSS治療PT變化圖,,3次ALSS治療ALT、TB變化圖,,,,天,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,典型病例,,患者，男性，10歲，因 “白癜風(fēng)”，服用“白癜靈”引起藥物性肝衰竭，“進行性眼黃，尿黃1周，神志欠清

25、1天”入院。父母一度要放棄治療，慕名入住我院后3月17日接受 血漿置換＋血漿灌流治療，20日接受選擇性血漿置換后完全康復(fù)出院,,,研究對象：存活組117 例患者 ( 存活時間>1個月 )和死亡組172 例患者 (存活時間0.05) 改善程度：無論24h還是72－120h, 兩組均改善，但死亡組均明顯小于存活組 (p<0.05), 特別是72–120 h. 根據(jù)24h、72－120h改善程度構(gòu)建兩個logistic 回歸

26、模型預(yù)測1個月存活率: 72–120 h明顯優(yōu)于 24 h (92.4% vs 66.4%).結(jié)論:,The curative effect of ALSS on 1-month mortality in AoCLF patients after 72 to 120 hours Int J Artif Organs 2007; 30: 10,人工肝療效早期評估,Biochemical parameters

27、 Improvement post-ALSS at 24 h post-ALSS at 72–120 h Survival group Control

28、 group Survival group Control groupINR -0.85 ± 4.36 -1.47 ± 2.82 -0.68 ± 1.78 ** 0.03 ± 2.67Albumin (g/L)

29、 1.24 ± 6.11 1.34 ± 21.99 2.28 ± 3.28 0.86 ± 15.92Globulin (g/L) -5.11 ± 9.71 -4.35 ± 16.00 -3.86 ±

30、; 16.70 -2.04 ± 16.41ALT(U/L) -218.07 ± 803.01 -126.9 ± 334.88 -194.14 ± 802.66 -70.57 ± 365.34AST(U/L) -113.90 ± 188.68

31、 -80.82 ± 434.31 -71.99 ± 375.67 -30.61± 169.80CHE (U/L) 2290.26 ± 3227.12 2556.35 ± 3120.39 1996.97 ± 2991.36 1048.98 ± 4699.76Tbil

32、 (μmol/L) -95.65 ± 117.68 -84.32 ± 133.84 -81.78 ± 233.33 -38.48 ± 140.89TB (μmol/L) -331.04 ± 208.93** -252.86 ± 222.30 -277.34

33、± 234.17** 23.39 ± 264.56Cre (μmol/L) -40.57 ± 7.33** -23.99 ± 13.89 -31.86 ± 46.89** -6.99 ± 13.96Urea (mmol/L) -1.28 ± 1.82

34、 -1.90 ± 9.23 -1.18 ± 4.85 -0.64 ± 1.79(MELD) score -2.32 ± 3.60 -2.27 ± 4.08 -2.21 ± 1.20** 1.02 &

35、#177; 1.67,AoCLF 患者預(yù)后取決于人工肝后72–120 h肝性腦病、TB、INR、CRE 改善程度,人工肝治療后獲得新生的病人,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,2000年以來 2002年，中華醫(yī)學(xué)會感染病分會肝衰竭與人工肝學(xué)組成立 推出《人工肝治療指南》，進一步規(guī)范了我國非生物型人工肝的臨床治療,2002年人工肝學(xué)組第一次會議,2006年，感染病分會與肝臟病分會聯(lián)合推出《肝衰竭診療指南

36、》，對肝衰竭的臨床診療具有重大指導(dǎo)意義,人工肝治療的標準化和規(guī)范化,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,全國非生物型人工肝開展情況（1）,截至2005年，我國大陸所有省市均已開展非生物型人工肝治療治療例數(shù)：從2000年起至今共治療例數(shù)20662例 治療效果：重肝治愈好轉(zhuǎn)率高至60%以上,,全國人工肝開展單位數(shù)情況,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,全國非生物型人工肝開展情況（2）,治療方

37、法ALSS：14932例 血漿置換：4373例血液濾過：290例活性炭/樹脂吸附：71例膽紅素吸附：426例MARS ：450例混合人工肝：120例,我國人工肝治療重型肝炎例數(shù)構(gòu)成,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,生物型人工肝研究進展,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,生物型人工肝,優(yōu)點清除有毒物質(zhì)補充活性物質(zhì)存在問題缺乏代謝功能血漿來源緊張限制應(yīng)用,優(yōu)點具有

38、合成、代謝和轉(zhuǎn)化功能關(guān)鍵技術(shù)與難點*缺乏理想肝細胞源缺乏高效生物反應(yīng)器,,非生物型人工肝,*Strain AJ,et al.Science,2002,295：1005-9,生物型/混合型人工肝是國內(nèi)外研究的熱點,混合型人工肝,優(yōu)點：整合兩者優(yōu)勢關(guān)鍵技術(shù)與難點：二者有機結(jié)合的裝置及參數(shù)等問題,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,生物型/混合型人工肝國外研究現(xiàn)狀,國外 生物型/混合型人工肝起步于20世紀80

39、年代后期 迄今有5種生物型/混合型人工肝進入I－III期臨床研究 國內(nèi) 20世紀90年代后期，浙江、重慶、廣東、江蘇、北京等地相繼開展BAL、HAL研究,研究熱點：安全、有效的人工肝用肝細胞源高效的生物反應(yīng)器BAL、HAL系統(tǒng)優(yōu)化及裝置研制,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,常規(guī)二步灌流法對大規(guī)模分離肝細胞的質(zhì)量不理想添加Hepes和Dispase等灌流液，進行四步灌流分離肝細胞獲滿意結(jié)果,原代肝

40、細胞分離方法的研究 －四步灌流法的建立,Dispase液灌流,,,,,含Hepes的平衡鹽緩沖液預(yù)灌流,EDTA液灌流,膠原酶液灌流,DNase洗滌液洗滌，收集肝細胞懸液,四步灌流法和二步灌流法的流程圖,灌流操作圖,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,四步灌流法提高了肝細胞活率（96%）、得率（5.3X107/g）和貼壁率（90%）,,申請發(fā)明專利：生物人工

41、肝用豬和人肝細胞的制備方法(200410084625.7)、用于生產(chǎn)人工肝細胞的試劑(200410084626.1)、 一種肝細胞凍存液（200410089587.4）,新方法為人工肝及細胞生物學(xué)研究提供高質(zhì)量的肝細胞,新鮮分離的肝細胞,培養(yǎng)24h后的肝細胞,,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,轉(zhuǎn)染,篩選,正常人肝細胞,,,,生物學(xué)功能鑒定,永生化肝細胞克隆,SV

42、40LT-pcDNA3.1(-) 重組載體,建立人源性永生化肝細胞系HepLL,人源性永生化肝細胞系構(gòu)建研究,傳代培養(yǎng),已穩(wěn)定傳 47 代HepLL具有原代肝細胞相似的生物學(xué)特征和功能,HepLL在裸鼠脾內(nèi)移植，表達肝細胞生物特性,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,在建成HepLL基礎(chǔ)上，又建立人源性永生化肝細胞系2株（HepLi－2、3）和豬永生化肝細胞系3株（HepLP－1、2、3）HepLL系列肝細胞系

43、已被多家研究機構(gòu)（上海交大、上海腫瘤研究所等）應(yīng)用于科學(xué)研究,人源性永生化肝細胞系為人工肝研究提供了潛在肝細胞源，并為肝細胞移植和體外藥物篩選提供新的細胞模型,,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,利用經(jīng)膠原改性的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)為構(gòu)建仿生支架進行原代人肝細胞培養(yǎng)PLGA支架可明顯促進肝細胞的貼壁和增殖提高肝細胞白蛋白的合成、氨的清除與尿素合成,肝細胞體外組織樣培養(yǎng)研究,—Li J, Li L,

44、et al.ASAIO J. 2006; 52 (3): 321-7.,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,肝細胞體外大規(guī)模培養(yǎng)、凍存研究,,可逆性永生化肝細胞,評價肝細胞活性和功能肝細胞形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)肝細胞數(shù)量肝細胞的活率、貼壁率白蛋白合成量細胞色素P450酶活力（安定轉(zhuǎn)化試驗）等,,,,新型轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng),,程序降溫、液氮儲存,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,微囊化肝細胞的大

45、規(guī)模培養(yǎng),AC(海藻酸鈉－殼聚糖)微囊包裹HepLL細胞置于轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)儀勻速旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)Hep LL細胞隨著時間延長，集聚成球，逐漸增多增大,微囊化肝細胞制作,微囊化肝細胞轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng),,微囊化HepLL細胞核仁明顯，富含線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及糖原顆粒，可見緊密連接及毛細膽管樣結(jié)構(gòu),毛細膽管樣結(jié)構(gòu),細胞間緊密連接,B,,,富含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,生物反應(yīng)器研究,理想生物反應(yīng)器膜或支架材料等具有

46、良好的生物相容性，便于肝細胞黏附、聚集良好的物質(zhì)交換效能易于“放大”，能夠容納至少1010個肝細胞,肝細胞與患者血漿（血液）進行物質(zhì)交換的場所,生物復(fù)合材料已經(jīng)成為生物反應(yīng)器研究的熱點之一,生物人工肝系統(tǒng)構(gòu)成示意圖,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,微囊化肝細胞懸浮培養(yǎng)反應(yīng)器體外評價,微囊化肝細胞懸浮培養(yǎng)反應(yīng)器,,微囊化肝細胞懸浮培養(yǎng)生物反應(yīng)器：（正在進行體外評價）,生物支架式生物反應(yīng)器PLGA支架、PL

47、GA/CS支架正在研究中（浙大高分子材化系合作）,生物支架式反應(yīng)器,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,生物型人工肝動物實驗研究,－國家自然科學(xué)基金面上項目（編號：30270369）資助,建立豬急性肝衰竭動物模型進行生物型人工肝療效和安全性評價研究,豬肝組織呈現(xiàn)出血性壞死,急性肝衰竭豬動物模型,兩只豬正在接受BAL治療,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,生物型人工肝能有效地改善肝衰竭豬肝功

48、能 生物型人工肝延長肝衰竭豬存活時間急性肝衰竭模型組：48±7h裝置對照組：43±8h人工肝治療組：106±23h,－Li LJ, et al. Journal of Hepatology, 2006,24:317-324－Li LJ, et al. International Journal of Artificial Organs, 2003 ,26:507-513－專利《一種雜合型人工肝

49、裝置》（ZL03255510.5）,受試動物生存曲線,* 與AHF組、Sham BAL組比較，P < 0.01,* 與AHF組、Sham BAL組比較，P < 0.05,* 與AHF組、Sham BAL組比較，P < 0.01,* 與Sham BAL組比較，P < 0.05,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,（三）人工肝支持系統(tǒng)聯(lián)合肝移植救治晚期重型肝炎,術(shù)前人工肝應(yīng)用能使患者更易耐受

50、手術(shù)　　有效改善一般情況及內(nèi)環(huán)境紊亂 　　降低ALT和膽紅素暫時替代肝臟功能以待擇期肝移植術(shù)后人工肝應(yīng)用原發(fā)性移植肝無功能 排斥反應(yīng) 肝移植術(shù)后合并多器官功能衰竭,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,,ALSS-LT組生存時間較ALSS組和non-　ALSS-non-LT組明顯延長　（P< 0.01）,ALSS聯(lián)合肝移植顯著延長生存時間 1月生存率87.3％，半年生存率73.9％

51、 最長存活已超過68個月，恢復(fù)正常工作,生存率比較,40,60,80,100,時間（M）,生存率（％）,0 1 6,20,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,典型病例,,,男性，42歲，罹患重型肝炎、肝性腦病3期，分別于移植前21、17、14、7、1天接受5次ALSS治療，肝功能和全身情況改善明顯,順利實施肝移植,恢復(fù)良好,五次ALSS治療TB變化圖,,,,,,,,內(nèi)

52、科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,入院,肝移植前人工肝治療,肝移植手術(shù),切除的肝臟,供肝,術(shù)后康復(fù),,,,,內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,,典型病例,,,患者女性，2５歲， 2007年10月3日因香港旅游進食海鮮后出現(xiàn)發(fā)熱，乏力，納差，惡心，服用泰諾，10月4日又出現(xiàn)發(fā)熱，查肝功能：ALT8076U/L，AST5970U/L，TB87umol/L，DB47umol/L。CT：肝臟脂肪浸潤

53、10.8肝功能：ALT8185U/L，TB131.7umol/L。CT：肝臟腫大，脾腫大，少量腹水。診斷為急性肝衰竭,,,2007年10月10日7pm血漿置換2007年10月11日行血漿置換＋血液灌流，當(dāng)晚接受活體肝移植肝移植20余天后出院,內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c學(xué)科 傳染病診治國家重點實驗室,問 題 與 展 望,肝衰竭依然是臨床診治的重要問題肝衰竭的發(fā)生發(fā)展機制需深入研究非生物型人工肝，人工肝聯(lián)合肝移植治療肝衰竭療效確切