病原性球菌及檢驗(yàn)

1、病原性球菌及檢驗(yàn),1. 簡(jiǎn)述病原性球菌的概念及種類。 2. 熟悉常見病原性球菌的主要生物學(xué)特性、 臨床意義。 3. 說出葡萄球菌、鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法。,學(xué)習(xí)目的與要求,對(duì)人有致病性的球菌主要引起化膿性炎癥,又稱化膿性球菌。主要包括有 1、G+球菌：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌。 2、G-球菌：腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌等。,第一節(jié) 葡萄球菌屬(Staphylococcu

2、s),,（一）形態(tài)與染色 G+， 球形，無(wú)鞭毛、無(wú)芽孢，呈葡萄串狀排列。,一、生 物 學(xué) 特 性,,（二）培養(yǎng)特性 　　營(yíng)養(yǎng)：要求不高，耐鹽。 　　 液體：均勻渾濁生長(zhǎng) 　　 普通瓊脂平板： 　　 血液瓊脂平板：,高鹽甘露醇平板：金黃色葡萄球菌為淡橙黃色菌落； 　　　　　　　　其他葡萄球菌為白色菌落。,,（三）生化反應(yīng) 　　活潑　分解多種糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸。(如：葡萄糖，麥芽糖，蔗糖，甘露醇） 　　觸酶（＋）（區(qū)別

3、于鏈球菌屬）,（四）抗原構(gòu)造 ?。?、蛋白抗原（ＳＰＡ） 　２、多糖抗原 　　金黃色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸 　　　　（檢測(cè)磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染診斷） 　　凝固酶（－）：甘油磷壁酸,,（五）分類:　　?。常矀€(gè)種及亞種 ?。?、按色素分類：金、白、檸 ?。?、按凝固酶分類： 　　　凝固酶陰性、凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌 ?。?、按噬菌體分類：金葡菌分為5群26型 4. 據(jù)色素、生化反應(yīng)分： 金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌

4、、腐生葡萄球菌,三種葡萄球菌的主要性狀,（六）抵抗力 無(wú)芽胞菌中最強(qiáng)，耐干燥，對(duì)石炭酸、升汞、龍膽紫敏感。 易產(chǎn)生耐藥性變異，如：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）。MRSA常呈多重耐藥，對(duì)青霉素、氧氟沙星及紅霉素的敏感率分別為1.3%、3%及14%。,長(zhǎng)期住院、反復(fù)使用各種廣譜抗菌藥物、燒傷或有傷口的病人及與MRSA定植或感染的病人接觸都是造成院內(nèi)MRSA流行的危險(xiǎn)因素。MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引

5、起院內(nèi)流行的主要來(lái)源。 MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來(lái)源。,耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）,二、致病性和免疫性,(一)致病物質(zhì) 金黃色葡萄球菌產(chǎn)生多種侵襲性酶與外毒素。 1．血漿凝固酶（coagulase)： 分：結(jié)合型凝固酶、游離型凝固酶。 鑒別金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)。,2．葡萄球菌溶血素（staphylolysin）,3．殺白細(xì)胞素（leukoc

6、idin） 4．腸毒素（enterotoxin）： （A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H 9個(gè)血清型） 5．表皮剝脫毒素（exfoliative toxin） 6. 毒性休克綜合征毒素1（toxic shock syndrome toxin 1, TSST1）,（二）所致疾病 　 1．侵襲性疾?。??。?）皮膚軟組織感染　特點(diǎn)：病灶局限且膿汁粘稠,（2）內(nèi)臟器官感染,（3）全身感染,（4）尿路感染,2．毒

7、素性疾病 　 （1）食物中毒,（2）燙傷樣皮膚綜合征 由表皮剝脫毒素引起。,（3）毒性休克綜合征 　　由TSST1引起,（4）假膜性腸炎,人類凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最為常見。 CNS主要引起以下幾種感染：泌尿系感染，細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，敗血癥等，其中大多為醫(yī)院內(nèi)感染。此外，心臟起搏器安裝、置換人工心臟瓣膜、長(zhǎng)期腹膜透析、靜脈滴注等亦可造成凝固酶陰性葡萄球菌的感染。,3、凝固酶陰性葡萄球菌的致病性,

8、三、微 生 物 學(xué) 檢 驗(yàn),（一）標(biāo)本采集 （二）檢驗(yàn)程序 （三）檢驗(yàn)方法,三、微 生 物 學(xué) 檢 驗(yàn),（一）標(biāo)本采集 　　　根據(jù)病情采集標(biāo)本 　　　種類：膿液、傷口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、腦脊液、糞便等。 注意：無(wú)菌操作，避免污染。,（二）葡萄球菌檢驗(yàn)程序,膿液、咽拭子、穿刺液 尿液、痰液,腦脊液　　　血液,糞便、嘔吐物,,,,,,,,,,,直接涂片染色,增菌培養(yǎng),分離培養(yǎng) （血平板）,分離培養(yǎng)

9、（高鹽甘露醇平板）,,,,,取可疑菌落,,鑒定試驗(yàn)　　　　　藥敏試驗(yàn),,涂片染色 血漿凝固酶 耐熱核酸酶 其他鑒定試驗(yàn),,報(bào)　告,,,初 報(bào),（三）檢驗(yàn)方法,1、直接涂片 適用于：正常情況下無(wú)菌的標(biāo)本（如腦脊液） 伴有炎癥細(xì)胞的其他體液標(biāo)本、膿液等,初步報(bào)告： 　　“查見革蘭陽(yáng)性葡萄狀排列球菌，疑為葡萄球菌” 　或：“查見類似葡萄球菌的革蘭陽(yáng)性球菌”,2、分離培養(yǎng)

10、50ml葡萄糖肉湯（增菌）,,渾濁,無(wú)菌（7天）,報(bào)告： 無(wú)菌生長(zhǎng),腦脊液、膿液、 穿刺液、咽拭、尿液,,血平板,,,,血液標(biāo)本5ml,糞便、 嘔吐物,,高鹽甘露醇平板,（三）檢驗(yàn)方法,3、鑒定試驗(yàn) （1）血漿凝固酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+） （2）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+） （3）耐熱核酸酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+） （４）腸毒素測(cè)定： 金黃色葡萄球菌產(chǎn)生 （5）SPA檢測(cè)： 金黃色葡萄球菌

11、（6）凝固酶陽(yáng)性和凝固酶陰性的葡萄球菌鑒定 （7）API葡萄球菌鑒定試劑盒,（四）結(jié)果評(píng)價(jià)和報(bào)告,1、金黃色葡萄球菌：無(wú)論任何標(biāo)本中分離到均 應(yīng)鑒定并報(bào)告臨床。 2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：從輸液導(dǎo)管、人工植入組織中分離到，應(yīng)視為致病菌。 3、尿培養(yǎng)計(jì)數(shù)：>103-104為陽(yáng)性菌尿標(biāo)準(zhǔn)。 4、其他凝固酶陰性葡萄球菌：引起感染流行或治療失敗時(shí)，應(yīng)鑒定到種。 5、金黃色葡萄球菌（MRSA)：頭孢菌素類抗生素體外藥敏試驗(yàn)

12、為敏感時(shí)，不應(yīng)報(bào)告，因體內(nèi)試驗(yàn)已證實(shí)MRSA對(duì)該類抗生素耐藥。,第二節(jié) 鏈球菌屬(Streptococcus),一、 鏈 球 菌,一、生 物 學(xué) 特 性,（一）形態(tài)與染色 G+，球形或橢圓形，呈鏈狀排列，無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞，有莢膜。,一、生 物 學(xué) 特 性,,（二）培養(yǎng)特性 　　條件：營(yíng)養(yǎng)要求較高，多數(shù)為兼性厭氧菌，少 數(shù)專性厭氧。 　　液體：沉淀生長(zhǎng)（絮狀或顆粒狀）。 　　普通瓊脂平板：不

13、生長(zhǎng)。 　　血液瓊脂平板：,,（三）生化反應(yīng) 　 活潑　分解多種糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸。 　 菊糖（-） 膽汁溶菌試驗(yàn)（-） optochin敏感試驗(yàn)（-）　　 觸酶（-）（區(qū)別于葡萄球菌屬）,（區(qū)別甲鏈與肺鏈）,,（四）抗原構(gòu)造 ?。?、多糖抗原（C抗原）： 群特異性。 　２、蛋白抗原（M、T、R、S） 型特異性，與致病有關(guān)的是M蛋白抗原。 3、核蛋白抗原：無(wú)特異性。,,

14、,,,,多糖抗原,蛋白質(zhì)抗原,,核蛋白抗原,鏈球菌抗原構(gòu)造模式圖,,,莢膜,,,（五）分類 40個(gè)種及亞種 ?。?、按溶血情況分類： （1）甲型溶血性鏈球菌：菌落周圍有1～2mm寬的草綠溶血環(huán)，稱甲型溶血或α溶血。為條件致病菌。 （2）乙型溶血性鏈球菌：菌落周圍形成一個(gè)2～4mm寬的透明溶血環(huán)，稱乙型溶血或β溶血。又稱溶血性鏈球菌。致病力強(qiáng)，引起多種疾病。 （3）丙型鏈球菌：無(wú)溶血環(huán)，不致病,,２、按抗原結(jié)構(gòu)分類：

15、 按C抗原分群：ABCD…20群，對(duì)人致病的以A群為主。 按M蛋白分型：如A群：100個(gè)型，B群：4型，C群：13個(gè)型。,（五）分類,,,（六）抵抗力 不強(qiáng)，60℃30min殺死，對(duì)多種消毒劑敏感。 乙鏈：對(duì)青霉素、四環(huán)素、紅霉素等敏感。,二、致病性和免疫性,（一）致病物質(zhì) 1、鏈球菌溶血素 （1）鏈球菌溶血素O (SLO) SLO抗體 抗鏈球菌溶血素O試驗(yàn)：協(xié)助診斷風(fēng)濕熱（>1:

16、400) （2）鏈球菌溶血素S (SLS)：無(wú)抗原性。,,2、致熱外毒素（猩紅熱毒素/紅疹毒素） 3、M蛋白,4、透明質(zhì)酸酶 5、鏈激酶 6、鏈道酶,（二）所致疾病 主要由A群鏈球菌引起。 1、化膿性感染：由皮膚傷口侵入，經(jīng)呼吸道侵入，其他 途徑（如產(chǎn)褥熱、蜂窩組織炎） 特點(diǎn)：病灶界限不清,膿汁稀薄,2．中毒性疾?。盒杉t熱 由產(chǎn)生致熱外毒素

17、的A族鏈球菌所致的急性呼吸道傳染病。,3．變態(tài)反應(yīng)性疾?。?風(fēng)濕熱 急性腎小球腎炎,二、致病性和免疫性,4．其他疾?。?甲型（草綠色）鏈球菌：引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（一）標(biāo)本采集 （二）檢驗(yàn)程序 （三）檢驗(yàn)方法,（一）標(biāo)本采集 　　　根據(jù)病情采集標(biāo)本 　　　種類：膿液、鼻咽拭子、血液等 風(fēng)濕熱查血清抗體,（二）　鏈球菌的檢驗(yàn)程序

18、,痰、膿、穿刺液咽拭子等,腦脊液,血 液,,,,,,,,,,,,,直接涂片染色,測(cè)抗原,分離培養(yǎng),增菌培養(yǎng) (5%CO2葡萄糖肉湯),,,血平板（5%CO2）,,可疑菌落,鑒定試驗(yàn),,,,,,,初步報(bào)告,,血清學(xué)鑒定 （分群）,,,,,桿菌肽試驗(yàn) optochin 膽汁溶菌試驗(yàn) 其他鑒定 敏感試驗(yàn) 試驗(yàn),,,,,（三）　鏈球菌的檢驗(yàn)方法,（

19、1）直接鏡檢： （痰、膿、穿刺液、 咽拭子等） 初報(bào)：發(fā)現(xiàn)G+球菌， 呈鏈狀排列,,,（2）分離培養(yǎng)： ① 血液、腦脊液 肉湯增菌 ② 膿液、咽拭子等 血平板分離,,,,（3）鑒定鏈球菌的主要試驗(yàn)： 根據(jù)形態(tài)、菌落、溶血情況進(jìn)行： ①桿菌肽敏感試驗(yàn)：A群敏感(d>10mm) ②Optochin敏感試驗(yàn)：肺炎鏈球菌d>18mm，

20、 d<15mm為陰性。 ③膽汁溶菌試驗(yàn)：肺炎鏈球菌+ ④CAMP試驗(yàn)：Ｂ群無(wú)乳鏈球菌為＋,⑤血清學(xué)鑒定： 試劑盒STREPTEX。用亞硝酸抽提待測(cè)菌的群特異性抗原，分別與包被有抗體的膠乳顆粒反應(yīng)。,⑥抗O試驗(yàn)： 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性腎小球腎炎， 效價(jià)>400為+,二、肺炎鏈球菌(S.pneumoniae),屬鏈球菌科，

21、鏈球菌屬。 廣泛分布于自然界，主要寄生于人類上呼吸道，多數(shù)不致病。,一、生 物 學(xué) 特 性,（一）形態(tài)與染色 G+， 矛頭狀，成雙（或短鏈）排列，無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞，有莢膜。,,（二）培養(yǎng)特性 　條件：營(yíng)養(yǎng)要求較高，兼性厭氧菌， 5-10% C02生長(zhǎng)最好。 產(chǎn)生自溶酶。 　液體：培養(yǎng)24h呈均勻混濁，后期因產(chǎn)生自溶而變得澄清。 　普通瓊脂平板：不生長(zhǎng)。 　血液瓊脂平板：灰白色，圓形，扁平，較小，周圍有草綠色溶血環(huán)

22、（α溶血）,,（三）生化反應(yīng) 　　活潑　分解多種糖類。 　　 菊糖（多數(shù) + ） 膽汁溶菌試驗(yàn)（+）　　 Optochin試驗(yàn)(+),區(qū)別甲鏈與肺鏈,,（四）抗原構(gòu)造 　１、莢膜多糖抗原： 據(jù)此將肺炎鏈球菌分85型，對(duì)人致病的有20多型。 Ⅰ-Ⅲ型引起大葉性肺炎。 　２、菌體多糖抗原： 可與CRP反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀。 3、M蛋白抗原： 型特異性。,（五）抵抗力 較弱

23、，加熱56℃ ，20min即死亡。 對(duì)一般消毒劑敏感，對(duì)干燥抵抗力較強(qiáng)。,莢膜變異：有莢膜的光滑（S）型菌有毒力，失去莢膜的粗糙（R）型毒力減低或消失。,（六）變異性,二、致病性和免疫性,（一）致病物質(zhì) 1、莢膜： 肺炎球菌的致病力，主要是莢膜的抗吞噬作用。 2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎鏈球菌溶素O等 溶血毒素“O”：自溶后釋放，能溶解人和動(dòng)物的紅細(xì)胞，高濃度對(duì)動(dòng)物有壞死及致死作用。,（二）

24、所致疾病 存在于正常人上呼吸道，為條件致病菌，僅在人體抵抗力下降時(shí)才引起疾病。 可引起：大葉性肺炎，胸膜炎，膿胸，慢性支氣管炎，中耳炎，腦膜炎，敗血癥等。,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（一）標(biāo)本采集 痰液，膿液，血液，腦脊液等。 （二）檢驗(yàn)程序 （三）檢驗(yàn)方法,檢驗(yàn)程序,痰、膿,腦脊液,血液,,,,,,,,,,,直接涂片 分離培養(yǎng),,革蘭染色、美蘭染色 莢膜腫脹試驗(yàn),,增菌培養(yǎng)（

25、葡萄糖肉湯、硫酸鎂肉湯）,,（血平板）,,挑選可疑菌落,,純培養(yǎng),,,,初報(bào),,,,,兔血清肉湯,,小白鼠毒力試驗(yàn),,,,,涂片 莢膜腫脹試驗(yàn),膽汁溶菌試驗(yàn) 菊糖發(fā)酵 Optochin試驗(yàn),,藥敏試驗(yàn),,報(bào) 告,,,,檢驗(yàn)方法,1、直接鏡檢 適用于：痰、膿、腦脊液標(biāo)本。 報(bào)告：“找到肺炎鏈球菌” 2、分離培養(yǎng) 硫酸鎂肉湯：均勻混濁生長(zhǎng)，有綠色熒光。 血平板：灰白色，圓形，扁平，較小，周圍

26、有草綠色溶血環(huán)（α溶血）,3、鑒定試驗(yàn) （1）莢膜腫脹試驗(yàn) （2）膽汁溶菌試驗(yàn)：+ （3）Optochin試驗(yàn)：+ （4）菊糖發(fā)酵試驗(yàn)：+ （5）小鼠毒力試驗(yàn)： 有毒力的菌株，接種后12-36h，死亡。,膽汁溶菌試驗(yàn)陽(yáng)性：,加入膽汁或10%去氧膽酸鈉，37℃，5-10min，激活本菌的自溶酶，出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。,Optochin敏感試驗(yàn)陽(yáng)性： 取肉湯培養(yǎng)液均勻涂于血平板上用optochin紙片貼于接種區(qū)中央（或

27、分區(qū)劃線法，紙片貼于1-2區(qū)），35℃需氧培養(yǎng)過夜，抑菌圈 >18mm。,Optochin test,肺炎鏈球菌的主要鑒定依據(jù),1、鏡下形態(tài)：革蘭陽(yáng)性球菌，矛頭狀成雙排列，平端相對(duì)，尖端向外； 2、血平板菌落特點(diǎn)：直徑0.5-1.5mm，灰白色，半透明，光滑（有些菌株為粘液狀），扁平，周圍有草綠色溶血環(huán)。 培養(yǎng)或放置24h以上，菌落中央可塌陷，呈臍窩狀。 3、生化鑒定： Optochin試驗(yàn)

28、+，膽汁溶菌試驗(yàn)+。,肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌的鑒別,形態(tài) 菌落 血清 膽汁 菊糖 Opto- 小鼠 肉湯 溶菌 chin 毒力試驗(yàn),,,,,肺鏈 甲鏈,矛頭狀， 稍大，濕潤(rùn) 渾濁 + + + + 成雙， 扁平， 有莢膜

29、臍窩狀,,,,,,,圓形， 較小，稍干， 沉淀 — — — — 無(wú)莢膜 圓，凸起,,（四）結(jié)果評(píng)價(jià)和報(bào)告,乙型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌為毒力強(qiáng)的致病菌，無(wú)論從任何臨床標(biāo)本中分離出均應(yīng)報(bào)告臨床。 及時(shí)鑒定和報(bào)告咽部標(biāo)本中分離出的化膿性鏈球菌，有利于早期治療，以減少并發(fā)癥（如風(fēng)濕熱，腎小球腎炎）的產(chǎn)生。 草綠色鏈球菌在重癥感染時(shí)，應(yīng)鑒定到種。,第三節(jié) 腸球菌屬,是腸道中的正

30、常菌群 導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)感染：如尿路感染、腹部和 盆腔感染、敗血癥、腦膜炎。,一、生物學(xué)特性,（一）形態(tài)染色 G+球菌，單個(gè)、成雙或短鏈狀排列。無(wú)莢膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。,營(yíng)養(yǎng)要求較高。能在高鹽（6.5%NaCl）、高堿（PH9.6）、高膽汁（40%）、10~45℃生長(zhǎng)。 菌落：圓形、中等大小、灰白色、不透明、S型，有γ或α溶血。,（二）培養(yǎng)特性,能分解多種糖類 觸酶（-） PYR（吡咯烷酮-β-萘基

31、酰胺）試驗(yàn)（+）,（三）生化反應(yīng),目前分18種。引起醫(yī)院內(nèi)感染常見的是糞腸球菌和屎腸球菌。 常用的分型方法：rRNA基因探針分型法。,（四）分型,（五）抵抗力 對(duì)理化因素抵抗力弱。 但對(duì)大多數(shù)抗生素天然耐藥。,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（一）標(biāo)本采集 尿液、血液、腦脊液、膿汁分泌物等。,（二）檢驗(yàn)程序,尿液、膿汁、穿刺液,血 液,,,,,,涂片染色 分離培養(yǎng)（血平板、5%CO2）,初 報(bào),挑選可疑菌落,,,,增菌培

32、養(yǎng)（葡萄糖肉湯、5%CO2）,,,,,,,,,PYR試驗(yàn),膽汁七葉苷試驗(yàn),6.5%NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn),血清學(xué)試驗(yàn),,其他鑒定試驗(yàn),報(bào) 告,,,,,（三）檢驗(yàn)方法,1、直接鏡檢 適用于：痰、膿、腦脊液、穿刺液標(biāo)本。 2、分離培養(yǎng) 血平板：灰白色，圓形，中等大小，不透明，S型菌落，周圍有α溶血或γ溶血。 選擇培養(yǎng)基：疊氮膽汁七葉苷瓊脂平板。,3、鑒定試驗(yàn) （1）菌屬鑒定試驗(yàn)： ①PYR試驗(yàn)：腸球菌、A群鏈球

33、菌、某些凝固酶陰性葡萄球菌為（+） ②膽汁七葉苷試驗(yàn)：+ ③ 鹽耐受試驗(yàn)：+ （4）種間鑒定試驗(yàn)：P175表17-3,第四節(jié) 奈瑟菌屬(Neisseria),特點(diǎn)：為一群G-雙球菌，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，有菌毛，需氧，氧化酶及觸酶 +。 種類：共九種，主要致病菌是 腦膜炎奈瑟菌(merningococcus) 淋病奈瑟菌(gonorrhoeae),一、腦膜炎奈瑟菌 (N.meningitidis

34、),即腦膜炎球菌， 是流行性腦脊髓膜炎的病原體,（一）生物學(xué)性狀,1．形態(tài)結(jié)構(gòu) 2．培養(yǎng)特性 3．生化反應(yīng) 4. 抗原結(jié)構(gòu) 5. 抵抗力特點(diǎn),（一）形態(tài)結(jié)構(gòu),G-，腎形成雙排列 在患者腦脊液標(biāo)本中位于中性粒細(xì)胞內(nèi) 無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛，具有莢膜、菌毛。,2．培養(yǎng)特性,營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含有血清或多種氨基酸、無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。 血平板：半透明，灰褐色，圓形，濕潤(rùn)光滑露滴樣菌落。 易自溶。,巧克力平板：圓形，扁平，藍(lán)灰色

35、，半透明，光滑濕潤(rùn)的菌落。 卵黃雙抗（EPV）平板：較大，無(wú)色，光滑濕潤(rùn)，扁平，邊緣整齊的菌落。 血清肉湯：呈微混濁。,3.生化反應(yīng),分解葡萄糖、麥芽糖：+ 硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，不分解尿素 氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性,4.抗原結(jié)構(gòu),可分9個(gè)血清群，對(duì)人致病的主要是A群,5．抵抗力特點(diǎn),對(duì)寒冷、光、熱力，干燥等十分敏感。室溫3h，60 ℃ 5min死亡。 采集標(biāo)本：注意保溫迅速送檢。 對(duì)磺胺類、青霉素、鏈霉素均敏感。,（二）致病性與免疫性

36、,1．致病物質(zhì)：菌毛、莢膜、內(nèi)毒素 　2．所致疾?。簜魅驹?、傳播途徑 　　　寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，與患者補(bǔ)體介導(dǎo)的殺菌活性缺陷有關(guān)。約2%-3%的人表現(xiàn)為流腦癥狀。,3. 免疫性 　 病原可產(chǎn)生群特異性抗體，但不持久。,(三) 微生物學(xué)檢驗(yàn),1．標(biāo)本采集 菌血癥期病人采集血液 有出血點(diǎn)或瘀斑者，可取瘀斑滲出液 有腦膜刺激癥狀，抽取腦脊液 　帶菌者：咽拭子,注意事項(xiàng)： 　　立即送檢 　注

37、意保溫（勿放冰箱） 防干燥 防紫外線,２、腦膜炎球菌的檢驗(yàn)程序,血 液,,增菌培養(yǎng)（葡糖肉湯）,,分離培養(yǎng) （巧克力、血平板）,,鑒定試驗(yàn),涂染檢 氧化酶 葡、麥糖 多價(jià)血清 藥敏試驗(yàn),,,,結(jié)果報(bào)告,鼻咽拭子,,卵黃雙抗平板,,,5~10%co2,37℃ 18~24h,37℃ 18~24h,37℃ 18~24h,,,腦脊液 瘀血點(diǎn),,離心,上　沉 清　淀 液　物,5~

38、10%ＣＯ2,,涂片 染色,,初步 報(bào)告,,直接凝集,,,,腦膜炎球菌的鑒定依據(jù),菌落特征符合 形態(tài)染色符合 分解葡、麥糖產(chǎn)酸 氧化酶、觸酶陽(yáng)性 血清凝集試驗(yàn)陽(yáng)性,二、淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）,即淋球菌 為淋病的病原體，人是唯一天然宿主和傳染源,（一）生物學(xué)性狀,1．形態(tài)結(jié)構(gòu) 2．培養(yǎng)特性 3. 生化反應(yīng) 4．抵抗力特點(diǎn),1．形態(tài)結(jié)構(gòu),G-，球形或腎形，成對(duì)排列 有莢膜，無(wú)芽胞和鞭毛,2．培養(yǎng)特性,

39、營(yíng)養(yǎng)要求高，30-37 ℃生長(zhǎng)，須在含有血液或血清的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，常用血液、巧克力等培養(yǎng)基 初次分離，須5-10%CO2才能生長(zhǎng)發(fā)育 菌落：凸起，光滑、圓形，灰褐色，半透明,3.生化反應(yīng),氧化酶試驗(yàn)：（+） 觸酶： （+） 葡萄糖（+） ，麥芽糖（-） 易自溶,4．抵抗力特點(diǎn),抵抗力弱， 在干燥環(huán)境中僅能存活1-2h，濕熱55 ℃ 5min,100 ℃立即死亡。室溫下存活1-2d。 對(duì)消毒劑極敏感,１、致病物質(zhì)：菌毛、外膜

40、蛋白、等 ２、所致疾?。?　　侵犯人類泌尿生殖系統(tǒng)引起淋病(首位性病) 　 新生兒眼炎,（二）致病性與免疫性,1．標(biāo)本采集,標(biāo)本：男性：尿道分泌物 　女性：陰道分泌物 全身性淋病：血液、泌尿、生殖道的各種分泌物、尿液 立即送檢,２．檢驗(yàn)程序,(三) 微生物學(xué)檢驗(yàn),膿汁、分泌物,,直接涂片染色,分 離 培 養(yǎng) 血、巧克力、TM平板,,,,,5－10%co2,35℃18－24h,鑒定試驗(yàn)

41、,,涂染檢 氧化酶 糖發(fā)酵 藥敏試驗(yàn),,報(bào) 告,,初步報(bào)告,35℃ 18－24h,,（１）直接涂片鏡檢,急性淋?。?　嗜中性粒細(xì)胞內(nèi)大量G-，腎形雙球菌——具有診斷意義 慢性淋?。虹R檢較困難,３．檢驗(yàn)方法,（２）分離培養(yǎng),即采集即培養(yǎng)，常用含有兩種以上抗生素（萬(wàn)古霉素、粘菌素、磺胺類等）的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)（如ML、TM） 5-10%CO2 培養(yǎng)基先預(yù)溫。,,氧化酶試驗(yàn)： （+） 觸酶： （+）（多數(shù)奈瑟

42、菌為陰性） 葡萄糖（+），麥芽糖（-） PCR：靈敏，特異，標(biāo)本不受限制(不需活菌),（３）鑒定,1.名詞解釋： 血漿凝固酶、SPA、抗鏈“o”試驗(yàn)、Optochin試驗(yàn)。 2.根據(jù)色素和生化反應(yīng)將葡萄球菌分成哪幾種？ 3.金黃色葡萄球菌的鑒定依據(jù)有哪些？ 4.根據(jù)鏈球菌在血平板上的溶血現(xiàn)象，將其分成哪些類型？甲鏈和乙鏈有何區(qū)別？ 5. 簡(jiǎn)述鏈球菌的檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法。 6. 腦膜炎奈瑟菌和

43、淋病奈瑟菌有哪些異同點(diǎn)？ 7.采集腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)應(yīng)該注意哪些問題？為什么？,復(fù)習(xí)思考題,,中等大，突起， 有色素，S型菌落。,葡萄球菌菌落形態(tài) （普通瓊脂平板）,金黃色葡萄球菌,,表皮葡萄球菌,,,金黃色葡萄球菌有透明溶血環(huán)。,表皮葡萄球菌無(wú)溶血環(huán)。,葡萄球菌A蛋白（SPA）的意義： （1）降低抗體的調(diào)理作用，抗吞噬 （2）協(xié)同凝集試驗(yàn):輔助診斷疾病。,血漿凝固酶試驗(yàn),［原理］致病性葡萄球菌能產(chǎn)

44、生２種血漿凝固酶： 一種為結(jié)合型凝固酶（凝聚因子）：細(xì)菌表面的纖維蛋白原受體與血漿中的纖維蛋白原結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌凝集。 另一種為游離型凝固酶，可被人或兔血漿中的協(xié)同因子激活，成為凝血酶樣物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。,［檢測(cè)方法］結(jié)合型凝固酶：玻片法 　　　　　　游離型凝固酶：試管法,,,耐熱核酸酶試驗(yàn),,液體培養(yǎng)物 煮沸15min,,,37℃3h,甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂,腸毒素測(cè)定,病人嘔吐物、糞便、剩余食物,,高鹽

45、肉湯,,37℃24h,分離培養(yǎng),,肉湯煮沸30min， 離心，取上清夜,幼 貓,,觀察癥狀（4h出現(xiàn)）,SPA的檢測(cè),致病性葡萄球菌 （SPA),,,,,,,,,,,,兔抗羊紅細(xì)胞Ab （IgGFc）,,,,,,,SRBC,,,,,,,,,致敏羊紅細(xì)胞,凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌的鑒別,結(jié)合型 游離型 耐熱核酸 VP 鳥氨酸脫 血漿凝固酶 血漿凝固酶 酶試驗(yàn) 試

46、驗(yàn) 羧酶試驗(yàn),金黃色 + + + + — 葡萄球菌 中間型 — + + — — 葡萄球菌 （罕見） 希氏 +

47、 — + + + 葡萄球菌,凝固酶陰性葡萄球菌的鑒別,見P167表17-1,表3 幾種常見葡萄球菌的鑒別,細(xì)菌 菌落顏色 溶血 觸酶 凝固酶 甘露醇 新生霉素,,,金黃色 金黃色 β + + + S 葡萄球菌 表皮葡萄 白色 γ + - -

48、 S 球菌 溶血葡萄 白色 β + - - S/R 球菌 腐生葡萄 檸檬黃 γ + - - R 球菌,,,,,Staphylococcus aures （-） 表皮葡萄球菌（S） 腐生葡萄球菌(R),,陰性結(jié)果 （S）,新生霉素耐藥試驗(yàn),鏈球菌菌落（血平板）： 細(xì)小，灰白色，圓形，突起，光滑，濕潤(rùn)，

49、邊緣整齊，不同菌種菌落周圍有不同溶血環(huán)。,,,,甲型溶血性鏈球菌 （草綠色鏈球菌）,丙型鏈球菌,乙型溶血性 鏈球菌,,猩紅熱,蜂窩織炎,,,Neisseria gonorrhoeae,燙傷樣皮膚綜合征 多見于新生兒、幼兒和免疫功能低下的成人，開始有紅斑，1～2天有皮起皺，繼而形成水皰，至表皮脫落。由表皮剝脫毒素引起。,ＣＡＭＰ試驗(yàn) （B群無(wú)乳鏈球菌+）,,,,,,,,-,+：溶血環(huán)呈箭頭狀,金黃色葡萄球菌,,桿菌肽試驗(yàn)