RIF患者血清中的Kisspeptin濃度及子宮內(nèi)膜上KISS1、KISS1R基因的表達(dá).pdf

1、背景：
　　反復(fù)移植失?。≧ecurrentimplantationfailure，RIF）是一種醫(yī)源性的疾病，是ICSI或IVF治療后胚胎移植反復(fù)不著床的結(jié)果?，F(xiàn)今多數(shù)學(xué)者采用的RIF定義是：移植≥3次優(yōu)質(zhì)胚胎或多次移植胚胎數(shù)量共計(jì)≥10枚依然未能獲得臨床妊娠。生命表分析經(jīng)過(guò)多周期的IVF后的累積妊娠率后發(fā)現(xiàn)，輔助助孕對(duì)于經(jīng)過(guò)多周期輔助生殖治療的不育夫婦未必是靈丹妙藥。目前RIF的病因還不能確定，一般認(rèn)為RIF可能與內(nèi)膜容受性的

2、降低、胚胎的遺傳或發(fā)育異常、移植技術(shù)的優(yōu)劣、免疫因素等有關(guān)。
　　GPR54則是一種G蛋白偶聯(lián)受體，由KISS1R編碼具有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，是1997年由Lee[1]等人在大鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，2001年發(fā)現(xiàn)了人GPR54的同源受體，命名為hOT7T175和AXOR12,并發(fā)現(xiàn)Kisspeptin為GPR54的內(nèi)源性配體。下丘腦中產(chǎn)生的kisspeptins能夠強(qiáng)烈刺激GnRH分泌，并因此成為神經(jīng)內(nèi)分泌生殖軸的主要調(diào)節(jié)物[2]。KISS1為

3、kisspeptins的編碼基因，滅活KISS1基因和其受體基因KISS1R，可因阻斷人和鼠體內(nèi)的Kisspeptin信號(hào)通路導(dǎo)致不孕。表明小鼠及人體內(nèi)Kisspeptin及其受體與生殖功能密切相關(guān)。
　　Janneau[3]等人和Bilban[4]等人分別利用RT-PCR和基因微陣列的方法表明KISS1不但在胎盤(pán)中大量表達(dá)，而且在妊娠早期侵襲性胎盤(pán)的表達(dá)量遠(yuǎn)高于妊娠晚期非侵襲性胎盤(pán)。上述兩研究均表明KISS1在孕早期調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞

4、侵襲特性中擔(dān)當(dāng)重要角色，因此胎盤(pán)來(lái)源的kisspeptin/KISS1R信號(hào)系統(tǒng)在胎盤(pán)形成中起到重要的調(diào)節(jié)作用。除此之外，Calder[5]等研究表明移植失敗的Kiss1-/-的母鼠子宮內(nèi)膜不能蛻膜化，而外源性補(bǔ)充適量的反映子宮內(nèi)膜容受性的可靠標(biāo)志物白血病抑制因子（LIF）則可以改善這種狀況從而達(dá)到成功妊娠。這表明Kisspeptin不僅是胎盤(pán)形成滋養(yǎng)層的調(diào)節(jié)因子還是胚胎著床的調(diào)節(jié)因子。
　　以往人體內(nèi)KISS1基因及其受體基因K

5、ISS1R的研究多集中在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，本研究通過(guò)檢測(cè)反復(fù)移植失敗患者與正常妊娠患者子宮內(nèi)膜上KISS1基因在增生期及分泌期的表達(dá)，及兩組患者增生期及分泌期血清中Kisspeptin蛋白濃度，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組患者血清中Kisspeptin濃度及子宮內(nèi)膜上KISS1基因的表達(dá)在增生期均高于分泌期，同時(shí)研究了KISS1基因及其受體基因KISS1R在RIF組患者子宮內(nèi)膜上的表達(dá)差異，了解RIF患者反復(fù)移植失敗是否與KISS1信號(hào)通路異常有關(guān)。

6、　　目的：
　　檢測(cè)反復(fù)移植失敗患者（RIF）及可成功妊娠且獲活產(chǎn)患者增生期（D11-13天）及分泌期(D20-25天)子宮內(nèi)膜中KISS1及KISS1RmRNA的表達(dá)，檢測(cè)兩組患者增生期及分泌期血清中Kisspeptin蛋白含量，比較增生期及分泌期兩組患者血清中Kisspeptin含量及子宮內(nèi)膜上KISS1、KISS1RmRNA的表達(dá)的差異，了解RIF患者反復(fù)移植失敗是否與KISS1信號(hào)通路異常有關(guān)。
　　方法：
　

7、　1.收集前1周期成功妊娠患者及反復(fù)移植失敗患者（RIF）月經(jīng)增生期(D11-13天)及分泌期（D20-25天)血清及子宮內(nèi)膜各3例，測(cè)定其血清中E2、P濃度，比較兩者在兩組中是否存在差異，并將子宮內(nèi)膜行病理檢查，進(jìn)一步明確其月經(jīng)分期。
　　2.用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定成功妊娠患者及反復(fù)移植失敗患者（RIF）月經(jīng)增生期(D11-13天)及分泌期（D20-25天)血清中Kisspeptin的濃度。分別比較兩組在兩個(gè)月經(jīng)階段

8、Kisspeptin的濃度差異。
　　3.用RT-PCR測(cè)定妊娠患者及反復(fù)移植失敗患者（RIF）月經(jīng)增生期(D11-13天)及分泌期（D02-25天)的子宮內(nèi)膜中KISS1和KISS1R的mRNA的表達(dá)。比較兩組患者兩個(gè)月經(jīng)階段中KISS1和KISS1R的mRNA的表達(dá)差異，比較同一月經(jīng)階段中兩組患者KISS1和KISS1R的mRNA的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　1.經(jīng)比較兩組患者一般情況及血清中E2、P濃度差異不存在

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，病理檢查顯示兩組患者增生期(D11-13天)及分泌期（D20-25天)子宮內(nèi)膜分別處于增生期及分泌期改變。
　　2.血清中，兩組患者增生期(D11-13天)的Kisspeptin濃度均高于分泌期（D20-25天)，且對(duì)照組子宮內(nèi)膜增生期(D11-13天)KISS1mRNA的表達(dá)高于分泌期（D20-25天)，表明在血清中Kisspeptin濃度及子宮內(nèi)膜上KISS1表達(dá)均存在與月經(jīng)相關(guān)的周期性變化。
　　3.RT-

10、PCR結(jié)果顯示：（1）月經(jīng)兩階段比較，對(duì)照組中，增生期(D11-13天)與分泌期（D20-25天)KISS1R的mRNA的表達(dá)無(wú)差異，但增生期(D11-13天)KISS1的mRNA的表達(dá)高于分泌期（D20-25天)；RIF組中，增生期(D11-13天)與分泌期（D20-25天)KISS1的mRNA的表達(dá)無(wú)差異，但分泌期（D20-25天)KISS1R的mRNA的表達(dá)明顯低于增生期(D11-13天)；（2）兩組比較，在增生期(D11-13天

11、)，兩組KISS1R的mRNA的表達(dá)無(wú)差異，但對(duì)照組KISS1的mRNA的表達(dá)顯著高于RIF組；在分泌期（D20-25天)，兩組KISS1的mRNA的表達(dá)不存在差異，但RIF組KISS1R的mRNA的表達(dá)顯著降低。
　　結(jié)論：
　　1.正常妊娠組血清中Kisspeptin濃度及子宮內(nèi)膜上KISS1表達(dá)可能隨月經(jīng)周期發(fā)生變化。
　　2.與增生組相比，分泌期RIF組患者子宮內(nèi)膜KISS1RmRNA的表達(dá)顯著下降。