結(jié)核病防治實(shí)驗(yàn)室痰檢工作

1、第一節(jié) 結(jié)核病防治實(shí)驗(yàn)室痰檢工作,第三章 結(jié)核病管理及最新進(jìn)展,第一講 痰涂片鏡檢,本節(jié)內(nèi)容導(dǎo)航,,痰檢工作的目的和意義國(guó)家結(jié)核病規(guī)劃（NTP） 與結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)檢查對(duì)象結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu),電子顯微鏡下的結(jié)核分枝桿菌染色特性萋尼氏染色鏡下形態(tài),,本節(jié)內(nèi)容導(dǎo)航,痰涂片操作程序常見(jiàn)標(biāo)本的收集及處理痰標(biāo)本的采集－容器痰標(biāo)本的采集留取標(biāo)本痰標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本的性狀直接涂片的步驟染色的步驟,痰檢工作

2、的目的和意義,在結(jié)核病控制工作中痰結(jié)核菌涂片鏡檢對(duì)于發(fā)現(xiàn)傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評(píng)價(jià)防治效果具有重要意義 是國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃(NTP) 的重要組成部分，在現(xiàn)代結(jié)核病控制工作中起著不可缺少的重要作用,1,2,國(guó)家結(jié)核病規(guī)劃（NTP）與結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò),結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室通過(guò)日常、有效的細(xì)菌學(xué)（病原學(xué)）診斷，發(fā)現(xiàn)傳染源、決定化療方案和評(píng)價(jià)治療效果為實(shí)現(xiàn)NTP的重要目標(biāo)服務(wù) 痰涂片鏡檢服務(wù)必

3、需在健全的細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)中才能實(shí)現(xiàn),1,2,國(guó)家結(jié)核病規(guī)劃（NTP）與結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò),結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家NTP主要通過(guò)實(shí)施現(xiàn)代結(jié)核病控制策略（DOTS）來(lái)實(shí)現(xiàn) 痰涂片鏡檢是結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室服務(wù)中最重要的內(nèi)容之一。痰涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)傳染源是DOTS策略的重要組成部分,3,4,,結(jié)核病癥狀體征,咳血或伴有血痰,發(fā)熱或胸痛超過(guò)2周,持續(xù)咳嗽咳痰超過(guò)3周,,,,檢查對(duì)象,胸部X線異常,,凡因結(jié)核病癥狀求診及轉(zhuǎn)診的可疑肺

4、結(jié)核患者，均應(yīng)進(jìn)行痰直接涂片檢查,確定診斷的涂片檢查應(yīng)采集3個(gè)合格的痰標(biāo)本就診當(dāng)時(shí)在門(mén)診留一份“即時(shí)痰”標(biāo)本，同時(shí)給患者2個(gè)痰盒，囑患者留取“夜間痰”和“晨痰”，于次日交驗(yàn),檢查對(duì)象,檢查對(duì)象,治療中或復(fù)診隨訪病人按期每次送檢兩份痰(當(dāng) 日即時(shí)痰、當(dāng)日或次日晨痰） 初治涂陽(yáng)患者在療程滿2、5、6月時(shí) 復(fù)治涂陽(yáng)患者在療程滿2、5、8月時(shí),,,,,經(jīng)萋?tīng)?尼爾遜染色后在顯微鏡內(nèi)藍(lán)色

5、背景下呈紅色桿狀,寬度為0.3～0.6um，生長(zhǎng)發(fā)育期間形成分枝,光學(xué)顯微鏡下為細(xì)長(zhǎng)稍彎曲，兩端鈍圓的桿菌 ，菌體長(zhǎng)度多為1.5~3.5um,結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu),結(jié)核分枝桿菌,,,,,細(xì)胞質(zhì),核物質(zhì),細(xì)胞壁,細(xì)胞膜,結(jié)核分枝桿菌,結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu),電子顯微鏡下的結(jié)核分枝桿菌,結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu),結(jié)核桿菌用革蘭氏染色，著色較差但呈蘭色， 列為G＋菌 結(jié)核桿菌用普通的染色方法不易著色，在染液

6、 中加入石炭酸后才可著色,1,2,結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu),抗酸染色時(shí)，因結(jié)核桿菌菌體含有大量脂質(zhì)，其脂質(zhì)的含量占分枝桿菌之首，占菌體干重的40%，因脂質(zhì)的含量大，所以不易著色，但經(jīng)過(guò)加熱或者提高石炭酸的濃度、延長(zhǎng)染色時(shí)間等處理以后才能著色,3,結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu),一旦著色，不易被鹽酸酒精脫色，而其他細(xì)菌均被脫色，把不被鹽酸酒精脫色的細(xì)菌稱(chēng)為抗酸菌，這種方法稱(chēng)為抗酸染色法,4,結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu),,,,結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu),【胸腹水】【腦

7、脊液】【尿標(biāo)本】【膿液、病灶組織】【痰標(biāo)本，肺部深咳的痰】,痰涂片操作程序,【胸腹水的采取】于試管中加20%的枸櫞酸鈉3—5滴，或10%的草酸鉀 5—6滴，可防止15—20ml 胸腹水凝固。無(wú)菌采取胸腹 水以后應(yīng)立即送檢?？刹扇‰x心集菌或漂浮集菌法檢查,痰涂片操作程序,【纖維支氣管鏡刷檢物】可將毛刷直接進(jìn)行抗酸染色,也可將刷檢標(biāo)本洗脫于裝有無(wú)菌生理鹽水的試管中,再涂片檢查,痰涂片操作程序,【腦脊液的采取】無(wú)菌

8、手術(shù)取得腦脊液以后，3000轉(zhuǎn)離心30分鐘，取沉淀物涂片染色檢查結(jié)核性的腦脊液放在冰箱中4℃過(guò)夜以后，會(huì)在液面形成一個(gè)倒漏斗狀的薄膜，取此薄膜涂片染色鏡檢,痰涂片操作程序,【尿標(biāo)本的采取】通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小時(shí)的尿液，放冰箱或陰涼處，靜置，去上清，留沉淀部分50—60ml送檢，取此沉淀液，經(jīng)3000轉(zhuǎn)，離心30分鐘，取沉淀部分2ml直接涂片，染色檢查,痰涂片操作程序,膿液直接涂片染色鏡檢病灶組織或干酪

9、樣組織需充分研碎后再涂片檢查,痰涂片操作程序,當(dāng)前,貴州省疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行痰檢 工作的耗材由項(xiàng)目統(tǒng)一提供： 螺旋蓋痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蠟紙盒,,,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,,痰標(biāo)本的采集,痰容器應(yīng)標(biāo)明病人姓 名、編號(hào)（檢查項(xiàng)目 和容器序號(hào)1、2、3 （1＝當(dāng)日即時(shí)

10、痰，2 ＝夜間痰，3＝次日 晨痰）,通用螺旋蓋 痰瓶，或可 密封塑料盒 蠟紙盒收集 痰標(biāo)本,,,如：張三，涂片 58—1，58—2 58--3,,痰涂片操作程序,,痰瓶上標(biāo)明病人姓名，初診門(mén)診序號(hào)（或隨訪病人登記號(hào)）,痰標(biāo)本留取后，痰盒切勿倒置、嚴(yán)防痰液外溢，應(yīng)立即送檢,進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查時(shí)，應(yīng)在登記本和檢驗(yàn)報(bào)告單上注明標(biāo)本性狀,留取標(biāo)本,痰涂片操作程序,留痰時(shí)應(yīng)囑咐病人盡量

11、深咳，留取痰量3~5毫升干酪痰、血痰、黏液痰為合格的標(biāo)本唾液屬不合 格痰標(biāo)本,難以獲得合格標(biāo)本時(shí)，也應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查，但 應(yīng)注明標(biāo)本性狀，以供分析結(jié)果時(shí)參考需送上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢查的痰標(biāo)本應(yīng)置4℃冰箱保存， 外送前認(rèn)真核對(duì)檢驗(yàn)單與痰瓶上標(biāo)注，放專(zhuān)用的冰 盒內(nèi)運(yùn)送，或用紙袋、塑料袋封裝扎牢后順序放入 包裝盒，盒外注明請(qǐng)勿倒置標(biāo)志,痰涂片操作程序,合格的痰標(biāo)本應(yīng)是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物,

12、痰涂片操作程序,【干酪痰】標(biāo)本外觀以黃色(或奶酪色)、膿樣、團(tuán)塊狀的肺部 分泌物為主，粘度較粘液痰低，制片時(shí)較易涂抹涂片染色后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)大量膿性炎癥細(xì)胞、肺上 皮脫落細(xì)胞由于此類(lèi)標(biāo)本是由肺部深處咳出，對(duì)肺結(jié)核的診斷 最有價(jià)值，故抗酸桿菌(以下簡(jiǎn)稱(chēng)AFB)的檢出率較高,痰涂片操作程序,【血痰】此類(lèi)標(biāo)本是因粘液痰或干酪痰標(biāo)本中混有血液而形成 顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲涂片染色后鏡檢除能

13、夠觀察到粘液痰或干酪痰的細(xì)胞 特征外，含新鮮血液的標(biāo)本中可見(jiàn)到被染色的血細(xì)胞由于含血標(biāo)本易干擾AFB鏡檢的結(jié)果，故在制片時(shí)應(yīng)盡 量避免挑取含血標(biāo)本,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,【粘液痰】標(biāo)本外觀以白色、粘稠度較高的肺部和支 氣管分泌物為主，制片時(shí)需仔細(xì)涂抹此類(lèi)標(biāo)本的AFB檢出率較唾液高,痰涂片操作程序,【粘液痰】涂片染色后鏡檢時(shí)，鏡下可見(jiàn)支氣管內(nèi)膜纖毛柱狀上皮細(xì)胞 (細(xì)胞較長(zhǎng)且形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核

14、和細(xì)胞質(zhì)著色均較深，細(xì)胞 一端可見(jiàn)著色較淺的纖毛)，伴有少量肺上皮脫落細(xì)胞(多數(shù) 為圓形、細(xì)胞核較小且著色較細(xì)胞質(zhì)深，核質(zhì)比大于 1:3)、 膿性炎癥細(xì)胞(卵圓形、細(xì)胞核占細(xì)胞比例較大且著色較 深，核質(zhì)比低于 1:1)、口腔脫落細(xì)胞及口腔寄生菌,【唾液】目視觀察標(biāo)本整體外觀，以透明或半透明水樣、粘度 較低的口腔分泌物為主，標(biāo)本中有時(shí)伴有氣泡涂片染色鏡檢時(shí)，鏡下可見(jiàn)少量口腔上皮脫落細(xì)胞(形

15、 態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核著色較細(xì)胞質(zhì)深，核質(zhì)比接近或大 于 1:2)和口腔內(nèi)寄生菌，有時(shí)可見(jiàn)食物殘?jiān)捎诖祟?lèi)標(biāo)本進(jìn)行AFB檢查時(shí)的檢出率很低，用于對(duì)患 者確定診斷時(shí)是不合格的標(biāo)本,痰涂片操作程序,,痰涂片操作程序,細(xì)胞核質(zhì)比，白細(xì)胞，說(shuō)明痰的質(zhì)量較好,痰涂片操作程序,上皮細(xì)胞多，說(shuō)明標(biāo)本質(zhì)量差,痰涂片操作程序,【清潔無(wú)劃痕的新玻片脫脂、干燥】 編號(hào)無(wú)磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用標(biāo)簽紙有磨砂面的玻片，可用鉛筆編號(hào),,

16、痰涂片操作程序,,【清潔無(wú)劃痕的新玻片脫脂、干燥】使用折斷的竹簽茬端，取痰標(biāo)本中干酪樣或膿樣 0.05~0.1毫升，涂于玻片右2/3處，均勻涂抹 10x20毫米大小的橢圓形痰膜痰膜朝上，待自然干燥(一般20分鐘),,痰涂片操作程序,10×20mm,,,,,,,,,,20mm,10mm,痰涂片操作程序,,,,復(fù)染 (亞甲蘭),脫色 (鹽酸酒精),初染 (堿性復(fù)紅),染色過(guò)程,痰涂片操作程序,【初染】將玻

17、片放置染色架上，玻片間距保持10毫米以上距離火焰固定（5秒鐘將玻片過(guò)火4次）滴加石炭酸復(fù)紅染液，蓋滿玻片火焰加熱至出現(xiàn)蒸汽，勿使沸騰脫離火焰，保持5分鐘,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,【脫色】流水自玻片一端清 緩沖洗染色液，瀝 去玻片上的水，滴 加脫色液，保持1 分鐘,痰涂片操作程序,【復(fù)染】滴加亞甲藍(lán)復(fù)染 液，保持30秒鐘流水沖洗，瀝去 玻片上的水玻片干燥后鏡檢,,將涂片排放在染

18、色架上，注意間隔,痰涂片操作程序,滴加堿性復(fù)紅,痰涂片操作程序,加熱,痰涂片操作程序,流水沖洗,痰涂片操作程序,脫色,痰涂片操作程序,流水輕緩沖洗,痰涂片操作程序,復(fù)染,痰涂片操作程序,流水洗去復(fù)染液,痰涂片操作程序,在玻片架上自然干燥,痰涂片操作程序,滴加亞甲蘭復(fù)染液保持1分鐘,1,2,3,4,5,6,7,將涂片排放在染色架上,滴加堿性復(fù)紅染色液加熱出現(xiàn)蒸汽后，保持5分鐘,流水輕緩沖洗,滴加脫色液，保持1分鐘,流水輕緩沖洗,流水輕緩