精子形態(tài)學(xué)分析

1、,,1,本課件精子染色均采用Diff-Quik染色,,精子形態(tài)學(xué)分析及生精細(xì)胞檢查《WHO5》2010版,南京軍區(qū)南京總醫(yī)院,戈一峰,戈一峰，男，1973年3月出生，中共黨員，副主任醫(yī)師、副教授，江蘇省青年聯(lián)合會第十、十一屆委員會委員，醫(yī)療衛(wèi)生界別秘書。現(xiàn)就職于南京軍區(qū)南京總醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，從事生殖遺傳學(xué)的實驗室和臨床診療工作，在輔助生育和習(xí)慣性流產(chǎn)的免疫治療等方面具有專長，2004年11月-2005年7月參加聯(lián)合國駐利比里亞特派團(tuán)

2、維和軍事行動，2010年1月參加中國人民解放軍赴海地地震救援行動，歷年在國內(nèi)外核心學(xué)術(shù)期刊上以第一著者發(fā)表論文十多篇，參編學(xué)術(shù)專著12部。,,,,,精液的形成,射精不存在于體內(nèi),精子生成過程,精子生成與受精過程,背景,全球精液檢測標(biāo)準(zhǔn)化的需求，WHO制定了人類精液實驗室操作手冊，用于臨床實驗室和科研。,7,,第五版2010年,,第一版1980年,,第二版1987年,,第三版1992年,,第四版1999年,,8,中文翻譯本,9,

3、WHO 5th主要內(nèi)容,10,,精液分析,精子制備,質(zhì)量保證,,,標(biāo)準(zhǔn)方法,可選擇試驗,研究性試驗,精子制備,精子冷凍,附錄,正常形態(tài)精子,通過觀察來自受孕女性生殖道，特別是經(jīng)性交后試驗從宮頸粘液或從卵子透明帶表面回收的精子有助于定義具備潛在受精能力的精子。使用這些標(biāo)準(zhǔn)，對所有男性而言，其正常形態(tài)精子百分率的范圍大致為0-30%，很少超過25% 。這個低數(shù)據(jù)自然產(chǎn)生一個低的臨界值 （僅為3-5%）。 經(jīng)過“透明帶選擇”的精子，

4、正常形態(tài)率仍然低，約8-25%。,11,WHO不同版本精子形態(tài)學(xué)內(nèi)容比較,12,13,精子形態(tài)學(xué)檢查受關(guān)注,頭部：橢圓形，長３.７～４.７µm、寬２.５～３. ２ µm ，長寬比１.３～１.８ µm ，頂體區(qū)４０％～７０％，不超過２個小空泡。空泡大小〈２０％，頂體后區(qū)冰含任何空泡。中段：細(xì)長、規(guī)則，長度３ .３～５ .２ µm ，大約與頭部長度相等，主軸與頭部主軸成一直線，寬度０ .５～０ .

5、７ µm ，殘留胞質(zhì)〈頭的１／３。尾部：比中段細(xì)，均一，長約４５（均為頭部長度的１０倍），沒有銳利折角，可以自身卷曲呈環(huán)狀。,精子形態(tài)學(xué)檢查受關(guān)注,正常精子形態(tài),14,精子頭部的分析參數(shù),精子包括頭、頸、中段、主段和末段。嚴(yán)格的精子形態(tài)學(xué)判斷標(biāo)準(zhǔn)為：只有頭和尾都正常的精子才認(rèn)為是正常的。所有處于臨界形態(tài)的精子應(yīng)該認(rèn)為是異常。精子頭外形上應(yīng)該是光滑、輪廓規(guī)則、大體上呈橢圓形。頂體可清晰分辨，占頭部的40% ～ 70%。頂體區(qū)

6、沒有大空泡，并且不超過2個小空泡，空泡大小不超過頭部的20%。頂體后區(qū)不含任何空泡。,15,精子中段與主段的分析參數(shù),中段應(yīng)該細(xì)長、規(guī)則，大約與頭部長度相等。中段主軸應(yīng)與頭部長軸成一條直線。殘留胞漿只有在過量時才被認(rèn)為是異常的，即胞漿超過了精子頭大小的1/3時被認(rèn)為過量殘留胞漿。主段應(yīng)該比中段細(xì)，均一，其長約45μm（約為頭部長度的10倍）。尾部應(yīng)沒有顯示鞭毛折斷的銳利折角。主段可以自身卷曲成環(huán)狀。,16,對精子形態(tài)缺陷的認(rèn)識,人類

7、精液標(biāo)本中含有各種各樣畸形的精子。精子異常發(fā)生和一些附睪的病理改變常常與畸形精子百分率升高有關(guān)聯(lián)。精子的形態(tài)缺陷通常是多重的。畸形精子一般都會導(dǎo)致較低的受精潛能，這取決于畸形的類型，也可能有異常的DNA。形態(tài)缺陷常伴有DNA碎片的增加、染色體結(jié)構(gòu)異常、不成熟染色質(zhì)和非整倍體。雖然也考慮精子尾（中段和主段），但是頭部的形狀更為重要。,17,精子頭部、頸部和中段缺陷定義,頭部缺陷：大頭、小頭、錐形頭、梨形頭、圓頭、不定形頭、有空泡的頭（超過

8、2個空泡，或者未染色的空泡區(qū)域占頭部的20%以上）、頂體后區(qū)有空泡、頂體區(qū)過小或過大（小于頭部的40%，或大于頭部的70%）、雙頭，或上述缺陷的任何組合。頸部和中段的缺陷：中段非對稱地接在頭部、粗或不規(guī)則、銳角彎曲、異常細(xì)的中段或上述缺陷的任何組合。,18,精子主段缺陷、過量殘留胞漿定義,主段缺陷：短尾、多尾、斷尾、發(fā)卡形平滑彎曲、銳角彎曲、寬度不規(guī)則、卷曲，或上述缺陷的任何組合。過量殘留胞漿（ERC）：這是精子異常發(fā)生過程產(chǎn)生的異

9、常精子所伴有的。這類異常精子的特征是含有大量不規(guī)則已染色的細(xì)胞漿，胞漿的大小超過精子頭部的三分之一，通常同時有中段缺陷，這種異常的過量胞漿不應(yīng)該被認(rèn)為是胞漿小滴。,19,胞漿小滴對滲透壓很敏感，并且在常規(guī)的空氣干燥過程中 不能很好地保留。胞漿小滴在已染色的圖片中不明顯，它 們看上去像是中段的延伸。 在已固定并染色的涂片中，胞 漿小滴小于頭部1/3大小，則應(yīng)該被認(rèn)為是正常的。,胞漿小滴為位于頭 - 頸連接中段的膜相

10、囊泡，是人類 精子有生理功能的正常成分。 用相差顯微鏡、微分干涉差顯微鏡和X線顯微鏡對精液、 宮頸粘液及培養(yǎng)液中的活精子進(jìn)行觀察，如果胞漿小滴膨 脹，其胞漿小滴可能會沿著中段長軸延伸 。,對胞漿小滴的認(rèn)識,20,人精子一些異常形態(tài)的示意圖,21,5版正常精子彩圖1,22,5版正常精子彩圖2,23,5版異常精子彩圖1,24,5版異常精子彩圖2,,,25,正常精子,26,正常精子,27,28,29,典型大頭頭

11、部長與寬明顯大于正常尺寸,,30,,31,,32,33,典型小頭頭部長與寬明顯小于正常尺寸,,34,,35,36,37,典型錐形頭橢圓率較大，前后兩端明顯不對稱,38,39,40,典型圓形頭橢圓率接近于1,,41,,,42,,,43,,44,45,頂體區(qū)沒有大空泡并且不超過兩個小空泡空泡大小不超過頭部20%頂體后區(qū)不含任何空泡,46,,47,48,49,典型梨形頭橢圓率明顯偏小前后兩端部對稱,,50,51,52,,有

12、兩個頭的精子,53,54,頂體明顯大于頭部70%,,,55,,56,,,57,58,頂體明顯小于頭部40%,,59,60,61,頭部外形輪廓不規(guī)則,,62,,63,64,65,,精子頭底部不是圓滑的,,66,,67,,,,,68,69,頭部縱軸兩側(cè)明顯不對稱,,70,,71,,72,73,,,74,75,頸部與頭部長軸形成了一定的角度,,76,,77,78,79,,胞漿大小超過精子頭部1/3,80,,81,82,,精子中段中位數(shù)偏大

13、,,83,,,84,,,,85,86,,精子頸部與頭部連接處寬度偏大,,87,,88,89,中段偏細(xì)或沒有中段,,90,,91,,92,93,94,頸部有明顯折斷的銳利折角中段與精子頭部長軸形成一定角度,,95,,,96,,,97,,98,99,精子尾部長度明顯偏小,100,101,102,103,尾部彎曲呈環(huán)狀,104,,105,,106,,107,108,109,,卷曲＞360。,110,,,111,,,112,,,113,,1

14、14,115,有兩條尾部的精子,,116,,,117,,,118,,119,120,尾部有明顯的鞭毛折斷的銳利折角,,121,,122,,123,,精子形態(tài)學(xué)分析的質(zhì)量控制,124,精子形態(tài)學(xué)分析操作的標(biāo)準(zhǔn)化,精子形態(tài)學(xué)分析過程中的所有操作步驟都可能影響精子形態(tài)學(xué)分析的結(jié)果，如精液樣本的洗滌、制片、固定、染色方法、顯微鏡質(zhì)量、自動化分析系統(tǒng)的質(zhì)量等。,125,,正常形態(tài)精子判斷標(biāo)準(zhǔn)的一致性,精子頭外形上應(yīng)該是光滑、輪廓規(guī)則，大體上呈橢圓

15、形，頂體區(qū)可清晰分辨，占頭部的40%~70%，沒有大空泡，并且不超過2個小空泡，空泡大小不超過頭部的20%，頂體后區(qū)不含任何空泡中段應(yīng)該細(xì)長、規(guī)則，大約與頭部長度相等，中段主軸應(yīng)與頭部長軸成一條直線，殘留胞漿不超過精子頭大小的1/3；主段應(yīng)該比中段細(xì)，均一，長約45um，可以自身卷曲成環(huán)狀，尾部沒有顯示鞭毛折斷的銳利折角。,126,127,結(jié) 語,傳統(tǒng)的精子形態(tài)評估是在普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行人工計數(shù)分析,其結(jié)果受檢測人員主觀因素影

16、響較大。在顯微鏡下人的肉眼很難準(zhǔn)確區(qū)別與精子形態(tài)相關(guān)的參數(shù),檢測人員的用眼疲勞以及不同人員之間的差異等,都會造成結(jié)果的誤差。近年來計算機(jī)輔助精液分析(CASA)在精子形態(tài)學(xué)評估中逐漸應(yīng)用,分析系統(tǒng)將計算機(jī)技術(shù)和先進(jìn)的圖像處理技術(shù)相結(jié)合,能對精子形態(tài)進(jìn)行客觀評價。相對于人工檢測精子形態(tài)主觀性, CASA準(zhǔn)確性更高, 可檢測出肉眼無法發(fā)現(xiàn)的非正常形態(tài)精子。,128,結(jié) 語,雖然CASA短時間不能代替手工檢測, 但其是精子形態(tài)檢測標(biāo)準(zhǔn)化

17、發(fā)展方向之一, CASA將形態(tài)計量學(xué)概念引入到精液分析中, 較手工檢測強(qiáng)調(diào)參數(shù)的可測量性, 使檢測更客觀。目前自動精子形態(tài)分析系統(tǒng)( ASMA ) 在計算機(jī)圖像分析同時進(jìn)行人工修正, 可提高CASA檢測質(zhì)量。,,,精液的脫落細(xì)胞學(xué)檢查（生精細(xì)胞檢查）1.1 替代睪丸穿刺，區(qū)別與判斷阻塞性無精子癥與特發(fā)性無精子癥1.2 對于少弱畸精子，判斷其生精阻滯的階段1.3 判斷睪丸及附屬性腺感染,,130,,131,,132,,133,,13