taar1通過(guò)影響a型鉀通道引起外周痛覺(jué)過(guò)敏及機(jī)制研究開(kāi)題報(bào)告

1、開(kāi)題報(bào)告,TAAR1通過(guò)影響A型鉀通道引起外周痛覺(jué)過(guò)敏及機(jī)制研究,學(xué)生：秦文娟導(dǎo)師：陶金 教授,,,,,1,2,3,4,研究背景,實(shí)驗(yàn)方法和內(nèi)容,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析,研究假設(shè),目錄：,研究背景：,TAAR:Trace amine-associated receptor G蛋白偶聯(lián)受體 配體：痕量胺 存在于動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中， 濃度0.1-10nM,含量小于生物胺1% 生物胺 如多巴胺，5-H

2、T,去甲腎上腺素 藥物：苯丙胺及相關(guān)化合物 治療精神疾病等 與配體的親和力： tyramine > dopamine>histamine, serotonin,,研究背景：,生物胺在疼痛中發(fā)揮重要作用：5-HT可以促進(jìn)外周疼痛敏感性。中樞多巴胺功能紊亂與疼痛相關(guān)。去甲腎上腺素參與痛覺(jué)過(guò)敏。,研究背景：,參與外周疼痛的離子通道：,研究假設(shè)：,TAAR1生物胺

3、 A-type K 疼痛,,,,,?,?,?,Tyramine,TAAR1,A-type K,PAIN,EPPTB,實(shí)驗(yàn)方法和內(nèi)容：,動(dòng)物：ICR小鼠，5-7周，雌鼠：雄鼠=1:1藥物：Tyramine用乙醇配置成1M儲(chǔ)存液其余溶于水的藥物用鉀外液配置成高濃度儲(chǔ)存液，難溶于水的藥物用

4、DMSO配置成高濃度儲(chǔ)存液。藥物現(xiàn)用現(xiàn)配，用鉀外液/臺(tái)式液/NS稀釋儲(chǔ)存液至目的濃度。,實(shí)驗(yàn)方法和內(nèi)容：,三叉神經(jīng)元培養(yǎng)：小鼠斷頭，冰上取三叉神經(jīng)；33.5℃恒溫，通氧，膠原酶1.5mg/ml消化45min,胰酶1mg/ml消化30min；巴斯管吹打后，神經(jīng)元均勻懸浮在DDB中；將懸浮神經(jīng)元均勻滴在24孔板中的爬片上，靜置1h待用。,實(shí)驗(yàn)方法和內(nèi)容：,Patch-Clamp：記錄A-type K電流用電壓鉗，記錄興奮性用電流

5、鉗。膜電位-60mV。阻斷劑孵育30min后開(kāi)始記錄。Western blot:TAAR1在三叉神經(jīng)元中的表達(dá)造模后信號(hào)通路中蛋白表達(dá)水平的檢測(cè),ImmunohistochemistryTAAR1在哪些三叉神經(jīng)元中表達(dá)TAAR1與NeuF,CGRP,IB4,NF200共表達(dá)TAAR1通過(guò)哪些A-type K亞型發(fā)揮作用TAAR1與KV4.1，KV4.2，KV4.3的共表行為學(xué)Von Frey測(cè)小鼠臉部的痛覺(jué)Tyr