吩噻嗪類抗精神病藥物的分析

1、第十一章吩噻嗪類抗精神病藥物的分析,,The analysis of Phenothiazine antipsychotics,藥物分析學(xué)教研室yanzhao@fmmu.edu.cn,本 章 內(nèi) 容,基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì),鑒 別,有關(guān)物質(zhì)檢查,含量測定,掌握：結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和分析測定方法熟悉：鑒別試驗(yàn)及有關(guān)物質(zhì)檢查的方法了解：性狀、臨床特性及其體內(nèi)藥物分析,教學(xué)目的與要求,各種幻覺妄想為主的患者稱為精神分裂癥I型情感淡漠、思維貧乏為

2、主的患者稱為精神分裂癥II型,腦內(nèi)多巴胺神經(jīng)系統(tǒng)的功能亢進(jìn),吩噻嗪類藥物,吩噻嗪類藥物的作用機(jī)制,,第一節(jié) 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) Structure and Property,,吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的衍生物，分子結(jié)構(gòu)中均含有硫氮雜蒽母核。,R’: -H、-Cl、-CF3、-COCH3、-SCH2CH3R: 具有2～3碳鏈的二甲或二乙胺基，或含氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物,吩噻嗪類藥物的基本結(jié)構(gòu),,,,P292,典型藥物分子結(jié)構(gòu),鹽酸

3、異丙嗪Promethazine Hydrochloride,鹽酸氯丙嗪Chlorpromazine Hydrochloride,,奮乃靜Perphenazine,鹽酸氟奮乃靜Fluphenazine Hydrochloride,癸氟奮乃靜Fluphenazine Decanoate,,鹽酸三氟拉嗪Trifluoperazine Hydrochloride,鹽酸硫利達(dá)嗪Thioridazine Hydrochloride,鹽

4、酸氯丙嗪Chlorpromazine Hydrochloride,,結(jié)構(gòu)分析,1. 硫氮雜蒽母核,（1）含S、N的三環(huán)共軛的大?體系，S、N與苯環(huán)形成p-?共軛——具有紫外吸收光譜特征,（2）硫氮雜蒽環(huán)上硫原子為-2價(jià)，具有還原性，易氧化呈色 （3）硫氮雜蒽環(huán)上硫原子有兩對孤對電子，易與金屬離子絡(luò)合呈色,2. 取代基 R：脂烴胺基、哌嗪基，具堿性 R?：鹵素,,1. 弱堿性,主要理化性質(zhì),堿性較強(qiáng),弱堿性極弱,,,脂

5、肪烴氨基、哌嗪及哌啶等衍生物所含氮原子堿性較強(qiáng)，可用于鑒別和含量測定。,2.易氧化性,,,,光照時易氧化變質(zhì)，避光保存,易被H2SO4、HNO3、H2O2、FeCl3氧化,3.與金屬離子配合呈色,可與鈀離子配合生成有色化合物，可用于鑒別和含量測定。氧化產(chǎn)物亞砜和砜無此反應(yīng),,機(jī)理,4.紫外光吸收特性,硫氮雜蒽母核為共軛體系，紫外區(qū)三個吸收峰值，約205nm、254nm、300nm，最強(qiáng)多在254nm附近,2位上的取代基(R’)不同，會引

6、起吸收峰發(fā)生位移 其結(jié)構(gòu)中-2 價(jià)的硫，易氧化，氧化產(chǎn)物砜及亞砜有四個吸收峰,5.紅外吸收特性,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn) Test of Identification,,化學(xué)鑒別法,光譜法,色譜法,其他方法,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),一般選用2~4種不同原理的分析方法組成一組鑒別試驗(yàn),鹽酸異丙嗪片 （ ChP2015）,,氧化顯色反應(yīng),氯化物的鑒別反應(yīng),薄層色譜法(TLC)或高效液相色譜法(HPLC),提取后紅外分光光度法(IR),鹽酸氯丙嗪

7、 （ USP32-NF27）,,紅外分光光度法(IR),薄層色譜法(TLC),氯化物的鑒別反應(yīng),奮乃靜 （ EP7）,,熔點(diǎn)測定,紅外分光光度法(IR),鹽酸硫利達(dá)嗪（ JP15）,,氧化顯色反應(yīng),紅外分光光度法(IR),氯化物的鑒別反應(yīng),一、化學(xué)鑒別法,弱堿性,易氧化性,與金屬離子配合呈色,生物堿沉淀劑反應(yīng),氧化顯色反應(yīng),與鈀離子配合呈色反應(yīng),,,,鹵素取代基,吩噻嗪類藥物的鹽酸鹽,含鹵素取代基的反應(yīng),氯化物的鑒別反應(yīng),,,【

8、示例11-1 】鹽酸氯丙嗪鑒別 （JP15 ）,化學(xué)鑒別法,1.與生物堿沉淀劑反應(yīng),,0.1g/20ml,,,,,,靜置5小時生成沉淀,,,測定熔點(diǎn)175~179℃,,,鹽酸氯丙嗪片鑒別？,三硝基苯酚沉淀再用丙酮重結(jié)晶 測定熔點(diǎn),,2. 氧化顯色反應(yīng),,,,,,,,HNO3,FeCl3,H2SO4,H2O2,常用氧化劑,化學(xué)鑒別法,,☆常見顯色,化學(xué)鑒別法,鹽酸異丙嗪,（2）取本品約 0.1g，加水3ml 溶解后，加硝酸 1ml

9、，即生成紅色沉淀；加熱，沉淀即溶解，溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色。,（1）取本品約 5mg，加硫酸5ml 溶解后，溶液顯櫻桃紅色；放置后，色漸變深。,化學(xué)鑒別法,,,,,鹽酸氯丙嗪,示例11-3 取本品約 10mg，加水1ml溶解后，加硝酸5滴即顯紅色，漸變?yōu)榈S色。,,,化學(xué)鑒別法,鹽酸氯丙嗪片鑒別？,示例11-4,示例11-5 11-6 JP15 三氯化鐵 紅色,3.與鈀離子配合顯色,,【示例11-7 】,癸氟奮乃靜的鑒別

10、 ChP（2015）,取本品約 50mg，加甲醇2ml 溶解后，加 0.1% 氯化鈀溶液 3ml，即有沉淀生成，并顯紅色，再加過量的氯化鈀溶液，顏色變深。,化學(xué)鑒別法,4.含鹵素取代基的反應(yīng),奮乃靜,綠色,焰色反應(yīng),化學(xué)鑒別法,,,銅網(wǎng),P297,(紅色),(無色),顯色反應(yīng)（如氟奮乃靜等含氟有機(jī)藥物）,4.含鹵素取代基的反應(yīng),鹽酸癸氟奮乃靜注射液 （ ChP2015）,加茜素鋯,,化學(xué)鑒別法,,,,,,,,氟化物,酸性茜素鋯試液,[Z

11、rF6]2-,(黃色),茜素磺酸鈉,5.氯化物的鑒別反應(yīng),鑒別反應(yīng),,與AgNO3的沉淀反應(yīng),與MnO2等氧化劑的氧化還原反應(yīng),化學(xué)鑒別法,AgNO3沉淀反應(yīng)鑒別：由于硫氮雜蒽母核具有還原性，稀HNO3的加入使該類藥物發(fā)生氧化顯色反應(yīng)?？稍诠┰嚻啡芤褐屑影痹囈菏钩蓧A性，吩噻嗪類藥物析出，濾除沉淀，取濾液進(jìn)行試驗(yàn)。,注意,MnO2等氧化劑的氧化還原反應(yīng)進(jìn)行鑒別： 注意：硫氮雜蒽母核和氯離子均被氧化鑒別方法：具有揮發(fā)性的氧化產(chǎn)物氯氣使

12、用水濕潤的碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色,鑒別反應(yīng),,與AgNO3的沉淀反應(yīng),與MnO2等氧化劑的氧化還原反應(yīng),化學(xué)鑒別法,5.氯化物的鑒別反應(yīng),化學(xué)法小結(jié),（一）與生物堿沉淀劑反應(yīng):與生物堿沉淀劑形成衍生物，測定熔點(diǎn),（二）氧化顯色反應(yīng)：S原子為-2價(jià)，具有還原性,（三）與鈀離子配合呈色：Pd2+與S配合,（四）含鹵素取代基的反應(yīng): 焰色反應(yīng)；顯色反應(yīng),（五）氯化物的鑒別反應(yīng)： AgNO3沉淀反應(yīng)；MnO2氧化還原反應(yīng),1

13、. 紫外分光光度法,母核在205 nm、254 nm和300 nm三個波長處附近有最大吸收，最強(qiáng)峰多在 250～265nm,2位上的取代基(R’)不同，會引起吸收峰發(fā)生位移,其結(jié)構(gòu)中-2 價(jià)的硫，易氧化，氧化產(chǎn)物砜及亞砜產(chǎn)生四個吸收峰,二、光譜法,ChP2010收載的吩噻嗪類原料藥均采用紅外分光光度法(IR)鑒別，制劑提取后IR鑒別。,光譜法,2. 紅外分光光度法,鹽酸氯丙嗪,鹽酸異丙嗪,光譜法,三、色譜法,主要用于吩噻嗪類藥物及其制

14、劑的鑒別,方法：對照品法 要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對照品溶液的主斑點(diǎn)相同。,TLC法,主要用于吩噻嗪類藥物及其制劑的鑒別,HPLC法,方法：對照品法要求在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。,吩噻嗪類藥物還可以通過熔點(diǎn)測定進(jìn)行鑒別,【示例11-22】 EP7奮乃靜鑒別法：照毛細(xì)管法測定，本品的熔點(diǎn)為96~100℃。,四、其他方法,第三節(jié) 有關(guān)物質(zhì)檢查 Test of related

15、substances,,Is it pure?,,有哪些有關(guān)物質(zhì)？,,,合成路線,殘留的中間產(chǎn)物,有哪些有關(guān)物質(zhì)？,貯藏過程中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì),有哪些有關(guān)物質(zhì)？,有關(guān)物質(zhì):,一、殘留的中間產(chǎn)物,二、貯藏過程中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì),如何檢查這些有關(guān)物質(zhì)？,測定方法 樣品液1——0.1%-1.0% 溶液 樣品液2——0.01%-0.1% 溶液,有關(guān)物質(zhì)檢查 高低濃度對照法,薄層色譜（TLC） 高效

16、液相色譜（HPLC）,,,（一）TLC,薄層色譜很直觀，定性定量用途寬。定性根據(jù)比移值，半定量法靠斑點(diǎn)。,,,,,,,,,TLC判斷:,控制雜質(zhì)斑點(diǎn)個數(shù)， 控制雜質(zhì)種類② 樣1雜質(zhì)斑點(diǎn)強(qiáng)度不得 超過樣2主斑點(diǎn),,,硅膠G板,【示例11-25】 ：鹽酸氯丙嗪的有關(guān)物質(zhì)檢查,供試液：,對照液：,TLC試驗(yàn)：,5mg/ml,25μg/ml,判定雜 質(zhì)斑點(diǎn),,USP32-NF27檢查法,特點(diǎn)： （1）簡便易行，

17、不需特殊的儀器； （2）只能控制單個雜質(zhì)的限量。,,,,,（二）HPLC法,1. 峰面積歸一化法2. 不加校正因子的主成分自身對照法3. 加校正因子的主成分自身對照法（有對照品） 4. 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定雜質(zhì)的含量(有對照品) 5. 外標(biāo)法(有對照品),（二）HPLC法,（高低濃度對比法）,供試品,對照液,,,,,,,,,判定方法： 規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)峰面積,特點(diǎn)： （1）需特殊儀器； （2）可以控制

18、雜質(zhì)總量。,Waters 液相色譜儀2690,島津液相色譜儀LC-10A,【示例11-23】鹽酸氯丙嗪的有關(guān)物質(zhì)檢查,供試液： 0.4mg/mL,對照液：0.002mg/mL,,,,ChP2015檢查法,【示例11-23】鹽酸氯丙嗪的有關(guān)物質(zhì)檢查,,單個不大于，總和不超過2倍,,,ChP2015檢查法,第四節(jié) 含量測定CONTENT ASSAY,,吩噻嗪類藥物含量測定？,,酸堿滴定,A,,分光光度法,B,,HPLC,C,,HPLC

19、-MS,D,一、酸堿滴定法,1. 非水溶液滴定法,進(jìn)行非水酸堿滴定的原因：許多弱酸、弱堿不能直接在水溶液中滴定(C·K<10-8)許多有機(jī)化合物在水中的溶解度小，使滴定無法進(jìn)行 由于水的拉平效應(yīng)，使混合強(qiáng)酸或混合強(qiáng)堿不能分別進(jìn)行滴定,溶劑的分類,酸性溶劑：這類溶劑給出質(zhì)子的能力比水強(qiáng)，但接受質(zhì)子的能力比水弱。如甲酸，乙酸、丙酸等。堿性溶劑：這類溶劑接受質(zhì)子的能力比水強(qiáng)，但給出質(zhì)子的能力比水弱，如乙二胺、丁胺、乙

20、醇胺等。兩性溶劑：既可以作酸，也可以作堿。惰性溶劑：這類溶劑沒有給出質(zhì)子的能力，沒有酸、堿性。如苯，丙酮，氯仿，四氯化碳等。,溶劑的均化效應(yīng)和區(qū)分效應(yīng),均化效應(yīng)(拉平效應(yīng),leveling effect) ：將不同強(qiáng)度的酸(堿)均化到溶劑化質(zhì)子水平的效應(yīng)。,HClO4+H2O ? H3O++ClO4-H2SO4+H2O ? H3O++HSO4-HCl +H2O ? H3O++Cl-HNO3+H2O ? H3O++NO3-,均化

21、性溶劑：具有均化效應(yīng)的溶劑,區(qū)分效應(yīng)(differentiating effect)：能區(qū)分酸(堿)強(qiáng)度的效應(yīng)。區(qū)分性溶劑：具有區(qū)分效應(yīng)的溶劑。,均化性溶劑：具有均化效應(yīng)的溶劑,溶劑的均化效應(yīng)和區(qū)分效應(yīng),HClO4 > HBr > H2SO4 > HCl > HNO3,冰醋酸是強(qiáng)酸的區(qū)分溶劑。強(qiáng)酸在冰醋酸中的總強(qiáng)度的順序?yàn)椋?? HBr HCl HNO3 HClO4 H2SO4,酸性溶劑是

22、弱堿的均化性溶劑，是強(qiáng)酸的區(qū)分性溶劑 堿性溶劑是弱酸的均化性溶劑，是強(qiáng)堿的區(qū)分性溶劑,,+,,HClO4滴定,,空白試驗(yàn)校正,終點(diǎn)指示,弱堿的滴定,,有機(jī)堿及其鹽類供試品,冰醋酸,結(jié)果,,電位指示終點(diǎn)法,HAc體積隨溫度變化較大，且還具有揮發(fā)性，測定樣品與標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時溫度不同，應(yīng)對濃度進(jìn)行校正。,如果：?t1-t0?>10?C或貯存時間超過30天則在臨用前必須重新標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。,標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性,等當(dāng)點(diǎn) H+ + C

23、l- + NaOH →NaCl + H2OBH+ +Cl- + NaOH → B + H2O + NaCl,突躍體積V1V2,滴定體積 △V＝V2－V1,乙醇-水溶液中，采用NaOH滴定；在反應(yīng)體系加入適量鹽酸，采用電位滴定法指示終點(diǎn),一、酸堿滴定法,,2. 乙醇-水溶液中的氫氧化鈉滴定法,1.直接分光光度法(原料藥),2.提取后分光光度法(制劑),3.提取后雙波長分光光度法(去除氧化物干擾),4.二階導(dǎo)數(shù)分光光度法(自學(xué)),5.

24、鈀離子比色法,二、分光光度法,3.提取后雙波長分光光度法,提取后分光光度法能夠除去一些干擾物質(zhì)，但卻不能除去吩噻嗪類藥物的氧化物。提取時，氧化物隨游離堿進(jìn)入有機(jī)相；測定時，因結(jié)構(gòu)相近，氧化物在吩噻嗪類藥物的測定波長處產(chǎn)生吸收，干擾測定。,即，吸收度差值（?A）僅與待測組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，干擾組分的干擾被消除。,定量依據(jù)：樣品在二波長下吸收度差值（?A）,【示例11-37】 鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定（ USP32-NF

25、27）,式中：C(mg/ml)為對照品溶液的濃度； V(ml)為所取供試品的體積； 括號內(nèi)的公式分別為供試品溶液(U)和對照品溶液(S)在下標(biāo)所示波長處的吸光度差。,測定波長：,254nm（最大吸收波長）277nm（等吸收波長）,空白對照液：0.1mol/L鹽酸溶液,計(jì)算公式：,吩噻嗪類藥物在pH 2±0.1的緩沖溶液中，與鈀離子(Pd2+)形成紅色配合物，在500nm波長附近具有

26、最大吸收,,由于鈀離子僅與未被氧化的硫元素配合顯色，消除了藥物中氧化物對測定的干擾。,比色液的濃度：50 ~ 250 ?g/mL,顯色穩(wěn)定性：10分鐘后可穩(wěn)定約2小時,5. 鈀離子比色法,【示例11-38】鹽酸異丙嗪注射液USP32-NF27,6.25mg,加飽和氯化鉀溶液氫氧化鈉溶液堿化甲醇,,正庚烷提取3次,,470nm處測定吸收度,合并提取液,,鹽酸酸化提取3次,,合并提取液并定容至50ml,,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品溶液各2ml

27、+PdCl2顯色,,,Stationary phase,,ODS,三、高效液相色譜法,1. 反相高效液相色譜法,方法特點(diǎn)：,ODS,內(nèi)標(biāo)法+校正因子,甲醇-水；乙腈-水,紫外,三乙胺溶液-甲醇-乙腈,色譜柱：流動相：檢測器：定量法：,,2. 離子對高效液相色譜法,極性強(qiáng),反相ODS柱保留弱,,,影響離子對形成的條件反離子的性質(zhì)與濃度流動相的組成流動相pH離子強(qiáng)度,常用的離子對試劑：烷基磺酸鹽陰離子對試劑，如戊烷磺酸鈉、

28、庚烷磺酸鈉、十二烷磺酸鈉等。,影響條件：流動相一般呈酸性，以利于生物堿的離解離子對試劑的非極性部分越大，形成的離子對分配系數(shù)越大，保留時間越長（十二烷基磺酸鈉＞庚烷磺酸鈉＞戊烷磺酸鈉）,四、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)集HPLC的高分離效能和MS的高專屬性及高靈敏度于一體，已經(jīng)成為目前測定復(fù)雜生物樣本中微量藥物的首選方法，同時也是進(jìn)行藥物及有關(guān)物質(zhì)定性分析的常用方法。,,基本要求,應(yīng)用：本類藥物的鑒別試驗(yàn)

29、 酸堿滴定法含量測定 離子對高效液相色譜法 描述：本類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),本章小結(jié),1. 有氧化產(chǎn)物存在時，吩噻嗪類藥物的鑒別方法為A. 非水溶液滴定法B. 紫外分光光度法C. 熒光分光光度法D. 鈀離子比色法E. pH指示劑吸收度比值法,,B D,課堂練習(xí),,,,,2. 有氧化產(chǎn)物存在時，吩噻嗪類藥物的含量測定方法為A. 非水溶液滴定法B. 紫外分光光度法C. 熒光分光光度法

30、D. 鈀離子比色法E. pH指示劑吸收度比值法,,D,,,,,3. 檢查鹽酸異丙嗪中“有關(guān)物質(zhì)”時，采用的對照溶液為A. 雜質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液B. 標(biāo)準(zhǔn)“有關(guān)物質(zhì)”溶液C. 供試品溶液D. 供試液的稀釋溶液E. 對照溶液,,D,4. 吩噻嗪類藥物的鑒別試驗(yàn)為 A 紫外分光光度法(規(guī)定吸收波長與相應(yīng)吸收度法) B 與鈀離子(Pd2+)生成橙紅色不溶性配位化合物. C 硝酸氧化呈色反應(yīng) D 硫酸氧化呈

31、色反應(yīng) E 與銅離子(Cu2+)生成橙紅色不溶性配位化合物.,√,√,√,√,5.生物堿類藥物的一般鑒別試驗(yàn)包括( ) A 熔點(diǎn)測定 B 呈色反應(yīng) C 沉淀反應(yīng) D 紫外光譜 E 紅外光譜,√,√,√,√,√,6. 冰醋酸是各種無機(jī)強(qiáng)酸的區(qū)分溶劑，各種無機(jī)酸在其中的酸性強(qiáng)弱順序?yàn)?A HCl04>HBr>H2S04>HCl>HN03 B HBr>

32、HCl>HN03>HCl04>H2S04 C H2S04>HCl>HN03>HBr>HCl04 D HCl04>H2S04>HCl>HBr>HN03 E HCl04>HCl>H2S04>HBr>HN03,√,7. 吩噻嗪類藥物的含量測定中，與鈀離子反應(yīng)的比色法需在以下哪種酸性條件下進(jìn)行A. pH4

33、B. pH3～3.5C. pH2±0.1D. pH1E. pH5,,8．鹽酸氯丙嗪的含量測定方法有A. 氧化還原法B. 非水滴定法C. 紫外法 D. 旋光法E. HPLC法,,,,9 吩噻嗪類藥物的母核( )。 A．含有1個氮原子、1個氧原子，氮原子上一般含 有取代基 B．僅含有1個氮原子，氮原子上無取代基，而母環(huán) 上有取代基 C．僅含有1個氮原子，母環(huán)上無