usp法定方法驗證

1、USP法定方法驗證,Validation of Compendial Procedures,QC·方法驗證2009.12,目錄,法定方法的驗證,USP與ICH Q2（R1）之間的關系,鑒別測試的方法驗證,雜質測試的方法驗證,含量測定的方法驗證,方法驗證匯總,課程目的,明確驗證的目的區(qū)分驗證和確認的區(qū)別描述不同分析方法驗證需考慮的條件能夠開展鑒定各種所需性質的實驗能夠使用Excel分析驗證實驗的數據理解新方法驗證與替

2、代正式方法的驗證這兩者之間統計學上的本質差別,法定方法的驗證,PART I,“驗證”的定義,“分析方法驗證是一個通過實驗室研究來證明程序的性能參數符合期望的分析應用要求的過程”—USP“分析方法驗證的目的是顯示分析方法適用于它所期望的應用目的” —ICH“方法驗證是一個闡述分析方法適合于其使用目的的過程”

3、 —FDA“…適合于它的使用目的” —關于驗證共同的主題,驗證：關鍵的第一步,在驗證開始階段將待驗證方法目的清晰的表達出來是十分必要的，例如：無菌測試：“下列程序適用于確定醫(yī)藥產品是否如所宣稱的那樣是無菌的，并符合各論中設定的無菌測定要求”下段中表述“這些藥典方法不是設計用來保證各批產品無菌或已滅菌。相關產品滅菌或無菌過程的驗證才是從根本上實現這一點的”“分析程序

4、的目標應能被很清晰地被理解，因為它將主導哪些驗證參數需要被評估?！?—ICH,驗證實施條件的闡明,提供驗證實施所需的條件是必要的，如果發(fā)現條件與方法所要求條件不一致時，應指出。例如：生物技術—衍生產品—測試 全蛋白質測試（Bradford測試）一節(jié)中提到硅玻璃因和染料結合而不能使用。同樣不同蛋白在相同量的條件下也會表現出不同的響應值。,驗證參數,Accuracy 準確性Precision 精密度Specificit

5、y 專屬性Detection Limit 檢測限Quantitation Limit 定量限Linearity 線性Range 范圍,“確認”的定義,:“…USP-NF所收載方法的使用者不需要驗證這些方法的準確性和可靠性，但需要確認這些方法在實際使用條件下的適應性”。:“確認包括所涉及方法的性能參數，如那些在中描述的，是產生相關數據而不是重復驗證目的”

6、 ——USP“出現在USP中的方法被認為已驗證，對于法定方法，廠家必須闡明該方法在實際使用情況下的狀態(tài)” ——FDA,確認的一般要求,“盡管在確認法定方法在真實條件下使用時的適應性不要求進行完整的再驗證過程，列在表2中的一些分析參數可以在確認過程中使用”“特定方法的確認僅需要對被認為適宜的參數進行評估”,小結

7、,驗證：“必須闡明方法適合于它使用目的的一個過程”確認：“闡明通過已驗證方法進行產品測試的條件確實適合于該已驗證方法的過程”待驗證方法的目的應被清晰明確的闡述驗證實施的條件應明確提出確認包括使用者決定哪些條件將被評估，選擇適宜數據元素進行檢查。,USP與ICH Q2（R1）之間的關系,PART II,概述,方法提交,方法種類,驗證參數,準確性,精密度（1）,精密度（2）重現性,精密度（3）,專屬性的定義（1）,專屬性的定義（

8、2）,檢測限的定義,定量限的定義,線性的定義,范圍的定義,其余的差別,指導原則的差別,各指導原則的差異：1、 鑒別：中檢所（生物藥）指導原則：專屬性，耐用性通常需要驗證；FDA指導原則：耐用性通常不需要驗證，只需要驗證專屬性；中檢所（化藥）指導原則，ICH指導原則：專屬性需要驗證，耐用性的驗證無明確指示。2、 雜質檢查（定量實驗）：FDA和ICH指導原則：檢測限度在有些情況下是需要驗證的；中檢所（生物藥）指導原則：檢測限度

9、通常是不需要驗證的；中檢所（化藥）指導原則：無明確指示。3、雜質檢查（限度實驗）：FDA指導原則：耐用性在有些情況下是需要驗證的；中檢所（生物藥）指導原則：耐用性通常是需要驗證的；中檢所（化藥）指導原則，ICH指導原則指出對于耐用性的驗證并沒有明確指示。4、含量測定：各指導原則基本統一，除了檢測限度和定量限度外，其他各驗證項目均需要驗證。,鑒別測試的方法驗證,PART III,鑒別實驗評估的要求,,Specificity

10、 專屬性,ICH,,Specificity 專屬性,USP,專屬性 [1],“適當的鑒別測試應該能夠區(qū)分可能共存的結構相似的化合物。需確證被分析的供試品呈正反應（可與已知的對照品比較），而不含被測成分的樣品呈負反應。此外，結構相似或組分中的有關化合物也應呈負反應。選擇這些潛在的干擾物質應該基于合理的科學判斷，考慮有哪些干擾可能出現?！?[Q2(R1)],專屬性 [2],有些分析方法不具備足夠的專屬性 - 滴定法含量測定

11、- 對映體含量的非手性方法測試 - 通過紫外吸收進行的鑒別測試推薦結合使用兩種或更多的分析方法以達到充分的專屬性,專屬性 [3],對于闡述穩(wěn)定性指示的方法來說，專屬性有其重要。,穩(wěn)定性指示分析,“是能檢測出原料藥或制劑的性質隨著時間的延長而出現變化的驗證過的定量分析方法。它可以精確檢出有效成分，而不受降解產物、工藝雜質、輔料或其他可能雜質的干擾。” FDA工業(yè)指導原則-分析步驟和方法驗證，2000,鑒別實

12、驗 [1],正反應結果-比較已知的對照品與包含被分析成分的樣品 - 已建立的測試方法 - 特征明顯的標準品負反應結果-不含被測組分的樣品,鑒別實驗 [2],對于結構相似或組分中的有關化合物呈負反應。選擇這些潛在的干擾物質應該基于合理的科學判斷，考慮有哪些干擾可能出現。,鑒別實驗 [3],USP各論中常采用多個方法進行鑒別測試 例如：雙氯芬酸鈉A: 紅外吸收B: 色譜純度測試中，雙氯芬酸峰在測試溶

13、液圖譜中的保留時間與分離度溶液圖譜中的一致C: 灼燒殘渣的焰色反應與鈉一致,紅外吸收光譜（摘自）,“待測樣品紅外譜圖的最大吸收峰與經相似處理過的USP標準品的最大吸收峰波數一致。待測樣品干燥條件需與相應的標準品規(guī)定的干燥條件一致，除非標準品另有規(guī)定或不需干燥?！?保留時間,需要注意以下重要的兩點（摘自）“色譜保留時間是化合物表現的性質但不是特有的。待測品和標準品的保留時間一致可用作結構鑒定的一個特征，但僅靠此一點不足以確認?！蓖?/p>

14、一個給定化合物的絕對保留時間在不同的譜圖里可能是不一樣的。,鈉（摘自）,“含鈉的化合物在無色的火焰中顯示亮黃色”,如果一切順利,若待測樣品中包含適當的相似的化合物，且所有的測試結果一致（根據實際情況呈正反應或者負反應），則該鑒別測試方法的驗證完成。注：相似化合物的選擇要基于良好合理的科學判斷。不管用何種方法，要確保在驗證方法里描述清楚有哪些相似化合物需要參與驗證。你不需要驗證所有可能的污染物。若生產/合成路線發(fā)生本質變化，鑒別測試部

15、分則需要重新驗證。,假如進展不順利,嘗試使用不同的條件，檢驗這種方法是否有效。如果找不到使之有效的條件，就要嘗試其他的方法。對于微生物方法經常性的事情就是改變所需微生物的生長條件，使其能適合法定方法的應用。,結束語,謹記，鑒別測試的最終目的是確保識別出被測組分。無論最終采用了一系列怎樣的方法，必須能夠在其他組分可能存在的情況下，識別出樣品中被測組分。,雜質檢查方法的驗證,www.gensci.com.cn,雜質定量檢查方法,,,IC

16、H：Specificity 專屬性Accuracy 準確度Precision(all three aspects) 精密度（三個方面）Detection limit 檢測限Quantitation limit 定量限Linearity 線性Range 范圍 Robustness 耐用性,,,,,驗證內容,USP：Specificity 專屬性Accuracy 準確度Precision(all thr

17、ee aspects) 精密度（三個方面）Detection limit 檢測限Quantitation limit 定量限Linearity 線性Range 范圍Robustness 耐用性,注：ICH、FDA，檢測限在有些情況下是需要驗證的 ；SFDA指導原則，檢測限通常是不需要驗證的,雜質限度檢查方法,,,ICH：Specificity 專屬性Detection limit 檢測限Robustness

18、耐用性,,,,驗證內容,USP：Specificity 專屬性Detection limit 檢測限Accuracy(may be required) 準確度(可能要求)Range(may be required) 范圍(可能要求)Robustness 耐用性,FDA指導原則：耐用性在有些情況下是需要驗證的；SFDA指導原則：耐用性通常是需要驗證的,專屬性 [1],專屬性： 指有其他成分（雜質、降解物、輔料等

19、）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性。 能反映該方法在有共存物時對供試物準確而專屬的測定能力，是指該法用于復雜樣品分析時受到干擾程度的度量。,專屬性 [2],雜質檢查專屬性含義： ICH Q2A “純度檢查：確保采用的分析方法可檢出被分析物中雜質的準確含量，如有關物質、重金屬、溶劑殘留量等” USP “純度檢查：確保實施的所有分析方法能夠準確檢出被分析物的雜質含量（如有關物質檢查、重金屬限度、

20、有機揮發(fā)性雜質）” SFDA《化學藥物質量控制分析方法驗證技術指導原則》 “作為純度檢查，所采用的分析方法應確保可檢出被分析物中雜質的含量，如有關物質、重金屬、有機溶劑等”,專屬性 [3],色譜法和其他方法：附代表性圖譜說明專屬性，并應恰當地標明諸成分在色譜方法中，應在一等程度上考察關鍵性的分離。關鍵性的分離-可通過兩個洗脫程度最接近的化合物的分離度來證明,專屬性 [4],非專屬性的含量測定方法可采用其他分析方法予以支持

21、 例：rh-GH HPLC分子排阻法測定rh-GH含量，HPLC反相法測定相關物質,專屬性 [5],有兩種基本途徑用來確定雜質檢查方法的專屬性有雜質或降解產物標準品沒有雜質或降解產物標準品,專屬性 [6],雜質獲得 - 可從歷史數據獲得降解物和雜質的信息 - 建立雜質和降解產物庫并對其定性 - 可以獲得足夠的量,專屬性 [7],當雜質可以獲得時 - 雜質檢查向原料藥或制劑中加入適量

22、的雜質證明雜質之間以及雜質和樣品中其它物質能夠得到分離,專屬性 [8],當雜質不能獲得時 破壞性試驗 高溫、高濕、光照、酸破壞、堿破壞、氧化破壞 注意觀察降解產物生成情況，分離度是否符合要求。注意掌握破壞條件，應使主成分產生10-30%降解。10%左右個案研究：破壞試驗條件溶液置于0.05M鹽酸（8小時）溶液置于0.02M氫氧化鈉（8小時）溶液置于0.15%H2O2 （1.5小時）將樣品溶液加熱至100

23、度（9小時）紫外光照射（14天）,專屬性 [9],破壞實驗 應將破壞前后檢出的雜質情況進 行比較，比較前后檢出的雜質個數和量；證明雜質之間以及雜質和樣品中其它物質能夠得到分離 峰純度檢測是很有用的，它顯示被測物色譜峰是單個還是多個成分(如二極管陣列、質譜)。,雜質檢查的準確性 [1],準確性：對于雜質定量檢查（非限度檢查），有必要確定方法的準確性定義USP – “用該方法測定的結果與真實值的接近的程度” IC

24、H – “用該方法測定的結果與被認可的常規(guī)真實值或參考值之間接近的程度”SFDA (化藥) – “準確度系指用該方法測定的結果與真實值或認可的參考值之間接近的程度。有時也稱真實度。SFDA(生物藥) – 分析方法的準確性是指測定值與真實值或認可的參考值的一致性或接近程度。,雜質檢查的準確性 [2],準確性 - 當雜質可獲得時在試樣中加入雜質 - 當雜質不能獲得時與參考方法比較采用藥品的回收率,雜質檢查的準確

25、性 [3],參見A.“準確性可通過加入已知量的被測物的回收率（%）計算得到B. 準確性可通過計算平均值和被認可的真實值的偏差得到，結果應含置信區(qū)間?！?雜質檢查的準確性 [4],回收試驗：測定值（M）、空白、已知量A的對照品測定,回收率：,加樣回收試驗：測定值（M）、背景值（P） 、 已知量的加入的對照品（或標準品）的值（A）,59,回收率：,雜質檢查的準確性 [5],回收實驗,雜質檢查的準確性 [6],加樣回收實驗,雜質檢查的準確

26、性 [7],“ICH推薦，準確度的評價應涵蓋所規(guī)定的范圍，至少用3個不同濃度，并至少測定9次（例如，3個不同濃度樣品，各測定3次）”雜質檢查準確性參考接受標準：各濃度下的平均回收率均應在80.0%-120.0%之間，RSD應不大于10%。,精密度[1],精密度雜質定量測定要做精密度考察精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。用偏差（d）、標準偏差(SD)、相對標準偏差(RSD)（變異系數CV）

27、表示,偏差(d):,標準偏差SD:,相對標準偏差RSD:,64,精密度[2],精密度[3],精密度應在方法規(guī)定的定量范圍內求得精密度可以從三個層次考察：重復性、中間精密度、重現性。方法的精密度應包括從樣品準備到最終測試結果中所有的變異來源,重復性,重復性 重復性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內，由同一分析人員測定所得結果的精密度。 重復性測定可在規(guī)定范圍內，用9次測定結果進行評價，制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，即

28、3×3水平或100％的濃度水平，用至少測定6次的結果進行評價雜質檢查重復性接受標準：RSD＜15％,中間精密度,中間精密度：同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備所得結果的精密度（三人三機）。,接受標準：RSD＜20％,中間精密度,中間精密度試驗變動因素 - 分析人員 - 日期 - 設備 - （色譜柱）,中間精密度,由變動因素影響的測試結果的重現性

29、 HPLC,重現性,重現性指不同實驗室之間不同分析人員測定結果的精密度當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現性試驗。,精密度和準確度,,精密度和準確度,準確度一般以回收率（%）表示精密度一般以RSD表示,檢測限-雜質[1],檢測限： 有些雜質檢查方法用于限度檢查。這些方法的驗證需要測定檢測限 ：“檢測限是指在實驗條件下，被分

30、析物能夠被檢測到的最低量，但不必準確定量?！?檢測限-雜質[2],：“對于非儀器分析方法，檢測限一般通過對一系列有已知濃度被測物的試樣進行分析，確定能被可靠檢測出的最低濃度或量” “對于儀器分析法，也可采用非儀器分析方法中所描述的相似方法。但要注意這僅適用于沒有背景噪音的儀器”,檢測限 [3],在Q2(R1)中描述了兩種測定儀器檢測限的方法根據信噪比根據響應值的標準差和斜率 - 根據空白的標準偏差 - 根據標準曲線

31、,檢測限 [4],信噪比法：一般以信噪比為3：1時相應的濃度或注入儀器的量確定檢測限。,檢測限 [5],根據響應值的標準差和斜率 檢測限（DL）可表示為: DL=3.3δ /S 其中，δ =標準偏差，S=斜率,檢測限[6],定量限 [1],定量限：某些雜質檢查方法用于定量。這些方法的驗證需要進行定量限的測定“定量限是指在規(guī)定的實驗條件下，試樣中被

32、測物能被定量測定的最低量，并且結果應具有可接受的精密度和準確度?！?定量限 [2],在Q2(R1)中描述了兩種測定儀器定量限的方法根據信噪比根據響應值的標準差和斜率,定量限 [3],信噪比法：一般以信噪比為10：1時相應的濃度或注入儀器的量確定定量限。,可接受標準：保留時間的相對標準差應不大于2.0%，峰面積的相對標準差應不大于5.0%。,定量限 [4],根據響應值的標準差和斜率 定量限（QL）

33、可表示為 QL=10δ /S 其中，δ =標準偏差，S=斜率,定量限[5],雜質-線性,線性：“分析方法的線性是指在給定的范圍內，直接得到的或經明確的數學轉化得到的測試結果與被分析物的濃度成比例關系的能力?！?雜質-線性,線性是定量測定的基礎，雜質定量試驗需要驗證線性。線性應在分析需要的范圍內進行評價。通過適宜的統計學方法線性回歸（y =

34、mx + b）相關系數，y軸截距（b），斜率（m）,雜質-線性,驗收準則應權衡科學的嚴謹性和實際的需要線性- - r2最小值- ≥0.99到≥0.9999 - Y軸截距- 在標準溶液響應值的n%內，在統計學上 不顯著,雜質-線性,相關性- r2 ≥ 0.990Y軸截距- 小于標準響應值的±20%，在統計學上不顯著,范圍[1],范圍是指達到一定精密度、準確度和線性的條件下，測試方法適用的高、低限濃度或量的

35、區(qū)間。范圍是規(guī)定值，在試驗研究開始前應確定驗證的范圍。,范圍[2],雜質測定范圍： SFDA:應為被測雜質規(guī)定限度的±20% ICH: 應為雜質報告水平至標準規(guī)定的120% - 對已知有異常功效、能產生毒性或不可預見的藥理作用的雜質，檢測/定量限應與雜質需控制的水平相當如果用一個試驗同時進行含量和純度檢查，且僅用100%的標準品，線性范圍應覆蓋報告水品至標準規(guī)定的120%,范圍[3],90,耐用性,耐用性

36、系指測定條件發(fā)生小的變動時，測定結果不受影響的承受程度。 耐用性主要考察方法本身對于可變試驗因素的抗干擾能力。開始研究分析方法時，就應考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。,耐用性,液相色譜的典型變動： ? 流動相pH（±0.5) ? 流動相組成(有機相±5%） ? 色譜柱（同一廠家的三個批號，或兩個不同廠家（同固 定相和填充物，尺寸） ? 溫

37、度和流速(±10%） ? 檢測波長(±5nm)氣相色譜的典型變動： ? 色譜柱（同一廠家的三個批號，或兩個不同廠家（同固定相 和填充物，尺寸） ? 溫度 ? 流速,耐用性,如果測試條件要求苛刻 ，則建議在方法中予以寫明。,www.gensci.com.cn,Thank You !,含量測定方法驗證,PART V,USP Professional Education

38、 含量,概要：含量測定的定義含量測定方法驗證所涉及的性能參數參數定義參數實驗設計接受標準實例分析,USP Professional Education 含量定義,USP眾多方法中，含量屬于第一類。更詳細的信息見： “含量是針對原料藥主成分或者成品制劑中活性成分（包括防腐劑）的定量

39、分析。” 含量測定目的:是得到供試品中被分析物的含量或效價的準確結果。,USP Professional Education 含量測試方法,,,ICH： 準確度 精密度（重復性、 中間精密度、重現性） 專屬性 線性 范圍,,,,,驗證內容性能參數,USP： 準確度 精密度（重復性、 中間精密度、重現性） 專屬性 線性 范圍,USP Pro

40、fessional Education 專屬性,摘自ICH Q2(R1)專屬性是一種在其他成分（如雜質，降解物，輔料等）可能存在下，采用的分析方法能夠正確鑒定，檢出被分析物的特性。驗證目的能準確地反映樣品中待測物的含量或效力的精確結果。,USP Professional Education

41、 專屬性,在雜質可獲得的情況下對于主成分含量測定可在供試品中加入雜質或輔料，并與未加雜質和輔料的供試品比較測定結果，考察測定結果是否受干擾。 在雜質或降解產物不能獲得的情況下可采用另一個經驗證了的或藥典方法進行比較，對比兩種方法測定的結果。也可采用破壞性試驗（強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質或降解產物的試樣，用兩種方法進行含量測定，比較測定結果。必要時進行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不

42、包含其他成分。,USP Professional Education Case Study [1],以HPLC含量測定法為例對以下色譜圖的比較：稀釋液藥品X標準溶液強制降解條件下的樣品溶液主峰峰純度測試和光譜分析,USP Professional Education Case Study [2],稀釋液色譜圖,接受標準：在主要物質和雜質的保留時間處，稀釋液不得有可檢測出的峰

43、,USP Professional Education Case Study [3],標準溶液色譜圖,接受標準：已知雜質須能相互并與主峰分離（分離度不低于1.5）,USP Professional Education Case Study [4],強制破壞實驗溶于0.05M鹽酸中（8小時）溶于0.02M氫氧化鈉中（8小時）溶于0.15%雙氧水中（1.5小時）加熱樣品溶

44、液至100°C（9小時）加熱固體樣品至120°C（17小時）紫外光下（14天）,USP Professional Education Case Study [5],接受標準：降解產物須與主峰分離（分離度不低于1.5）,強制降解條件下的樣品溶液,USP Professional Education 專屬性,主峰峰純

45、度測試目的：主峰上有明顯的降解產物峰，測定方法不可行。如未對峰純度進行有效分析，則無法判定主峰中是否包含著降解產物峰。對于制劑，如未對峰純度進行有效分析，則無法判定輔料降解是否對測定結果有干擾。,USP Professional Education 專屬性,主峰峰純度檢測方法（雜質結構確認）:紅外光譜核磁共振譜質譜色譜,USP Profession

46、al Education Case Study [6],接受標準：在強降解實驗中，主峰峰純度測試（相似度不低于980）,主峰峰純度測試結果,USP Professional Education 線性,線性是指響應（測試結果）與試樣中被測物質濃度直接呈正比關系的程度。線性是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質定量試驗和含量測定均需要驗證線性

47、。 應在設計的測定范圍內測定線性關系。,USP Professional Education 線性,可用一貯備液經精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質濃度進行測定，至少制備5個濃度。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數作圖，觀察是否呈線性，進行線性回歸。 R2應≥0.99到0.9999Y軸截距:在標準溶液相應值的n%內，在統計學上不顯著必要時，響應信號可經數學

48、轉換，再進行線性回歸計算，并說明依據。,USP Professional Education 線性,以HPLC方法為例：在測量濃度范圍內配制6份濃度不同的供試液，各濃度分別測定3次，每次做3個平行，分別測定其主峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。    可接受的標準為：回歸線的相關系數（R

49、2）不得小于0.99，Y軸截距應在100％標準濃度響應值的2％以內。,USP Professional Education 范圍,范圍系指能達到一定的精密度，準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍是規(guī)定值，具體的范圍一般根據檢測的目的而設定，并通常從線性研究中得到。定量測定的檢測項目均需要對范圍進行驗證范圍通常用與分析方法的測試結果相同的單位（如百分濃

50、度）表達。,USP Professional Education 范圍,驗證時所設定的范圍應至少包括了檢定標準中規(guī)定的范圍，如標準中規(guī)定成品濃度應為標示量的80％～120％，則驗證的范圍可設定為標示量的70～130％。確定范圍的方法為：供試品濃度（含量）在范圍末端（最高和最低限）和范圍內時，均能獲得滿意的線性、精密度和準確性。,USP Professional Educat

51、ion 準確度,USP- "該法測定所得的結果與真實值的接近程度?！盜CH- “該法測定所得的結果與認可的常規(guī)真實值或標準值的接近程度。”,USP Professional Education 準確度,一定的準確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項

52、目均需要驗證準確度，如含量測定、雜質定量試驗等。方法：準確度應在規(guī)定的范圍內建立，對于制劑一般以回收率試驗來進行驗證。也可在精密度，線性和專屬性被確認后，推斷得出。與已知準確性的方法進行比較（標準方法）。,USP Professional Education 準確度,試驗設計需考慮在規(guī)定范圍內，制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，即測定9次，報告已知加

53、入量的回收率（％）。 具體的驗證方法案例為：驗證時一般要求分別配制濃度為80％、100％和120％的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。    可接受的標準為：各濃度下的平均回收率均應在98.0%-102.0%之間，9個回收率數據的相對標準差（RSD）應不大于2.0%。,USP Professional Education

54、 精密度,USP：“重復性指在同一個實驗室，由同一個分析人員在較短時間間隔內使用同一個分析方法?！薄爸虚g精密度指實驗室內部的偏差，在不同的時間，不同的分析人員，使用同一實驗室的不同的儀器?！薄霸谶@里，重現性指在不同實驗室使用同一個分析方法，如合作研究。”,USP Professional Education 精密度,同一均質供試品，經多次取樣進行含量測定的結果之間

55、的接近程度。精密度應在方法規(guī)定的定量范圍內求得。精密度以相對標準方差（RSD）表示。,USP Professional Education 精密度（重復性）,ICH：目的：確定在同一個試驗內同一個供試品在測量范圍內的不同濃度時測定的精密度。方法1：配制3個稀釋度的供試品（測量范圍內的高、中、低濃度）每一個稀釋度重復測定至少3次計算每一濃度測定結果的均值和SD計算每一濃度的RS

56、D值方法2：配制至少6份相同濃度的供試品溶液（100%濃度水平），計算至少6份樣品濃度測定結果的均值、SD和RSD值接受標準：所得含量的相對標準差（RSD)應不大于2.0%。,USP Professional Education 精密度（中間精密度）,目的：確定在不同試驗間對測量范圍內同一個供試品在不同濃度時測定的精密性。方法：配制3個稀釋度的供試品（測量范圍內的高、中、低濃度）在3個試驗中

57、對每一個稀釋度重復測定3次分析人員設備日期不同批號或來源的實驗材料計算每一試驗中每一濃度測定結果的均值和SD計算試驗間每一濃度的RSD值接受標準：所得含量的相對標準差（RSD)應不大于2.0%。,USP Professional Education 精密度（重現性）,當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現性試驗。FDA公司內至少兩個實驗室-參照FDA：色譜分析方法驗證指南.1

58、994.FDA對于多實驗室，按照“用于測定分析方法精確性的實驗室間協作研究的標準規(guī)程”AOAC（美國官方分析化學師協會）8個樣品，8個實驗室Statistical Manual of the AOAC W.J. Youden and E.H. Steiner,USP Professional Education 耐用性,耐用性分析方法的耐用性是指試驗參數被有意進行微小改

59、變時，測量結果不受影響的能力，用于說明通常使用條件下該分析方法的可靠性。,USP Professional Education 耐用性,耐用性主要考察方法本身對于可變試驗因素的抗干擾能力。經試驗，應說明小的變動能否符合系統適用性試驗要求，以確保方法有效。根據具體情況，可針對一個或幾個關鍵的參數進行驗證。開始研究分析方法時，就應考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則建議在方法中予

60、以寫明。,USP Professional Education 耐用性,耐用性關鍵系數的選擇,方法驗證匯總,PART VI,為什么進行驗證？,驗證是闡述性能參數符合分析應用目的的要求的過程通過適當的實驗數據和分析的文化記錄來闡明,驗證方案起草,起草一個適合的驗證方案，應考慮：分析方法的目的性能參數的選擇基于以下方面考慮的適當的接受標準使用目的（定量/定性）先前的要求來