溶血磷脂與卒中預(yù)警

1、,溶血磷脂與卒中預(yù)警,傳統(tǒng)的血小板活化標(biāo)志物,第一類(lèi)是血小板顆粒膜上的糖蛋白。血小板被激活時(shí)，其顆粒膜與質(zhì)膜發(fā)生融合，顆粒膜蛋白，如CD62（ P選擇素，GMP-140 ）、CD63（溶酶體膜相關(guān)糖蛋白3，lysosomal-membrane-associated glycoprotein 3 ）在質(zhì)膜上表達(dá)，成為活化血小板的分子標(biāo)志。第二類(lèi)是血小板質(zhì)膜表面變化的糖蛋白表位。如GPⅡb/Ⅲa(CD41/61)的PAC1表位（activ

2、ated α2b-β3，PAC-1），它僅在血小板活化時(shí)才因構(gòu)象變化而顯露出來(lái)。第三類(lèi)是顆粒釋放物如α顆粒釋放的CD 40L、血小板第4因子（PF4）、血小板β球蛋白（β-TG）、纖維蛋白原、假血友病因子（ von Willebrand factor， vWF）、纖維連接蛋白、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）等。,,血小板膜糖蛋白（GP）,血小板膜糖蛋白分為質(zhì)膜糖蛋白和顆粒膜糖蛋白，前者包括GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ、GPⅡb-Ⅲa、GPⅠa-Ⅱ

3、a等，后者包括CD62P和CD63。CD62P又稱P-選擇素、GMPl40，在未活化的血小板上，CD62P分子僅表達(dá)于顆粒膜上?；罨?，CD62P分子在質(zhì)膜呈高表達(dá)。CD63在靜態(tài)血小板僅分布于溶酶體膜，血小板活化后隨脫顆粒而表達(dá)在血小板質(zhì)膜表面。因此CD62P和CD63在質(zhì)膜上高表達(dá)被視為血小板活化的分子標(biāo)志物。目前多采用熒光素標(biāo)記的抗血小板GP的特異性單克隆抗體作為探針，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定血小板GP。,,傳統(tǒng)的血小板活化標(biāo)志物,ADP

4、和花生四烯酸（AA）誘導(dǎo)的最大血小板聚集率（MPAR）用于評(píng)價(jià)阿司匹林抵抗，反映血小板活化程度。血栓烷素A2（TXA2）產(chǎn)生于血小板，能收縮血管，促進(jìn)血小板聚集。內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的前列腺素I2（PGI2）可擴(kuò)張血管，抑制血小板聚集。TXB2和6酮前列腺素F1a（6-k-PGF1a）分別是TXA2和PGI2具有代表性的代謝產(chǎn)物，用于評(píng)價(jià)血小板功能。 TXB2/6-k-PGF1a（TP比值）能反映兩種物質(zhì)的代謝狀態(tài)。,,傳統(tǒng)的血小板活化標(biāo)志物

5、,LDL-C與血小板活化呈正相關(guān)（LDL ox-LDL)。血小板分布寬度（Platelet distribution width，PDW）及血小板平均體積（Mean platelet volume，MPV）血小板衍生微顆粒（platelet-derived microparticles）血小板-單核細(xì)胞聚合物（platelet-monocyte aggregates）GP-VI二聚體反映膠原對(duì)血小板的活化（dimer

6、s of GPVI represents an important events leading to platelet activation by collagen. GPVI dimers could represent a new marker to analyze platelet reactivity）,,,,,傳統(tǒng)標(biāo)記物的局限性,Commonly used blood markers do not reflect the e

7、arlier pathophysiologic processes of mass platelet activation，plaque rupture, and thrombus formation.,,以往血栓形成前預(yù)警方法的局限性,以往臨床上已經(jīng)采用以預(yù)警為目的檢測(cè)方法（“血栓預(yù)報(bào)”）。 主要分為物理化學(xué)、生物物理、血液生化等幾個(gè)方面。物理化學(xué)方法的代表是70年代末期開(kāi)展的以血液流變學(xué)為主要指標(biāo)的“中風(fēng)預(yù)報(bào)儀”，即測(cè)定離

8、體血液的一系列物化性質(zhì)，如各種粘度等；生物物理方法如測(cè)定血小板的聚集率等；血液生化如測(cè)定血脂、膽固醇、各種脂蛋白、同型半胱氨酸、hs-CRP等。上述方法的共同特點(diǎn)是：它們反映的是靜態(tài)血液性質(zhì)的（物理的、化學(xué)的）一些改變。其中血粘度、血小板的聚集率等是在體外條件下測(cè)得的，而血液在體外和體內(nèi)的物化性質(zhì)受環(huán)境影響差別很大，難以控制。,,以往血栓形成前預(yù)警方法的局限性,在體內(nèi)，正常情況下血液不會(huì)凝固，而在體外，無(wú)論操作多么小心，很難使血液

9、完全不凝固。另外，現(xiàn)行作為預(yù)警的很多生化物質(zhì)本身并不直接與血栓形成的過(guò)程有關(guān)，它們可能在某些方面對(duì)血栓形成的過(guò)程有影響，都不能反映血栓形成過(guò)程是否已經(jīng)啟動(dòng)。以上方法在理論上不能作為預(yù)警的基礎(chǔ)，更不能稱為預(yù)報(bào)，多數(shù)只是危險(xiǎn)因素而已。在實(shí)踐上，它們與臨床表現(xiàn)符合程度較差，不足以指導(dǎo)診斷，對(duì)臨床預(yù)防治療的指導(dǎo)意義也有限。,,尋求卒中預(yù)警方法的新思路,血栓形成是多步驟的系列過(guò)程，如果在這一過(guò)程起始階段的某一環(huán)節(jié)能夠找到一種指示，例如特異性較強(qiáng)

10、的標(biāo)記物，就可以根據(jù)它的出現(xiàn)、增高來(lái)判斷血栓形成過(guò)程是否已經(jīng)啟動(dòng)，從而進(jìn)行預(yù)警。優(yōu)點(diǎn)：首先它確切反應(yīng)體內(nèi)血栓形成的過(guò)程開(kāi)始啟動(dòng)，是一種“臨近指示”。同時(shí)不能象血液流變學(xué)、聚集率等那樣，受諸多體外因素的影響。LPA 、LP-PLA2是代表性標(biāo)記物。,,溶血磷脂酸：血小板活化新標(biāo)記物,近年來(lái)對(duì)溶血磷脂酸（Lysophosphatidic acid, LPA）的研究發(fā)現(xiàn)，它就是一個(gè)較好的血栓形成前釋放的分子標(biāo)記物。LPA在血小板被激活時(shí)大量

11、釋放到血液中，釋放的LPA又能反過(guò)來(lái)促進(jìn)更多的血小板聚集，這一正反饋特點(diǎn)，構(gòu)成了LPA作為血栓形成早期預(yù)警分子的基礎(chǔ)。此外，在LDL-C輕度氧化過(guò)程中產(chǎn)生LPA。研究結(jié)果證實(shí)：缺血性卒中高危人群、TIA患者、未抗栓的心房纖顫患者、分水嶺梗死患者、不穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊患者等血漿LPA含量均顯著升高。,,溶血磷脂酸的結(jié)構(gòu),溶血磷脂酸（1-脂酰-2-sn-甘油-3-磷酸）是目前已知結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的甘油磷脂，其基本分子結(jié)構(gòu)為一甘油骨架，其sn-

12、1位為一脂酰鏈，sn-2位為一羥基（溶血），sn-3位為一磷酸基團(tuán)。脂酰鏈長(zhǎng)度差異，LPA是一個(gè)家族。LPA是血清中的正常組分之一，細(xì)胞內(nèi)及體液中產(chǎn)生的LPA與血清白蛋白及脂蛋白結(jié)合，并保持其生物活性。新鮮全血、血漿及腦脊液中LPA含量很低或不能檢測(cè)到。體內(nèi)的LPA主要由活化的血小板及低密度脂蛋白（LDL）在輕度氧化的過(guò)程中產(chǎn)生。除活化的血小板外，成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、某些炎癥細(xì)胞及癌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等也可產(chǎn)生LPA?；?/p>

13、化的血小板是血清中LPA的主要來(lái)源。,,,,溶血磷脂酸受體,目前在人類(lèi)基因組中已克隆了8個(gè)Edg基因（內(nèi)皮分化基因），其中三個(gè)（Edg-2，Edg-4，Edg-7）編碼LPA受體，分別稱為L(zhǎng)PA1（與肺、腎臟纖維化有關(guān)）、LPA2（對(duì)抗放射線損傷、結(jié)腸癌進(jìn)展、SMC遷移）、LPA3（胚胎種植）；余下五個(gè)（Edg-1，Edg-3，Edg-5，Edg-6，Edg-8）編碼神經(jīng)鞘氨醇1-磷酸（sphingosine-1-phosphate，S

14、1P）受體（芬戈莫德，F(xiàn)ingolimod，S1P受體調(diào)節(jié)劑用于治療多發(fā)性硬化）。LPA與跨膜G蛋白（Gi、Gq、G12/13）耦聯(lián)受體結(jié)合，活化相應(yīng)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)、單核/巨噬細(xì)胞等發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。生物學(xué)效應(yīng)包括：刺激細(xì)胞增殖與生存、促進(jìn)血小板聚集、增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性、血管平滑肌細(xì)胞遷移增值、腫瘤細(xì)胞侵潤(rùn)等。,,,,,自毒素,,LPA對(duì)血管壁細(xì)胞及血小板的作用,LPA對(duì)血管

15、壁細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞）及血小板具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，通過(guò)不同的G蛋白耦連受體（GPCRs）介導(dǎo)的信號(hào)通路，從多方面促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成。LPA在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展、冠心病及卒中的發(fā)生等方面有極重要的作用，由于它與血小板活化、oxLDL的產(chǎn)生、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙、炎癥細(xì)胞的活化與浸潤(rùn)、炎性細(xì)胞因子與黏附分子的表達(dá)、氧化應(yīng)激、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）的表達(dá)與活化、細(xì)胞的增殖與凋亡調(diào)節(jié)、斑塊破裂與栓子形成等事件密切相關(guān)，決

16、定了它在動(dòng)脈粥樣硬化與心腦梗死病理生理學(xué)中的關(guān)鍵和紐帶作用。,,LPA的合成,體內(nèi)LPA的合成主要源于下列途徑：1）血小板活化后，在磷脂酶A2、磷脂酶D等作用下，水解膜磷脂產(chǎn)生。2）低密度脂蛋白（LDL）在輕度氧化的過(guò)程中產(chǎn)生，且產(chǎn)生的LPA位于輕度氧化低密度脂蛋白（moxLDL）分子的表面。3）溶血磷脂酰膽堿（LPC）在溶血磷脂酶D（lysoPLD，autotaxin，自分泌運(yùn)動(dòng)因子，自毒素ATX ）作用下產(chǎn)生LPA。這是血漿中

17、LPA的最主要來(lái)源。4）除活化的血小板外，成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、某些炎癥細(xì)胞及癌細(xì)胞等也可產(chǎn)生LPA。,,,（膜）磷脂,二脂酰甘油,溶血磷脂,磷脂酸,3-磷酸甘油,單脂酰甘油,,2、LPA是LDL致血管內(nèi)皮改變的活性成份氧化低密度脂蛋白（oxLDL）在動(dòng)脈粥樣硬化及并發(fā)癥的發(fā)生中起關(guān)鍵作用，oxLDL可活化內(nèi)皮細(xì)胞和血小板。Siess W 等研究發(fā)現(xiàn)，LPA在LDL輕度氧化過(guò)程中產(chǎn)生，它是輕度氧化低密度脂蛋白（moxLD

18、L）中的活性部分，可啟動(dòng)血小板的活化、刺激內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)激纖維和細(xì)胞間縫隙的形成?；铙w研究發(fā)現(xiàn)LPA聚集在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)，是基本的活化血小板的脂類(lèi)分子，在人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的脂質(zhì)核心區(qū)含有最高濃度的LPA，當(dāng)斑塊破裂時(shí)暴露的LPA促進(jìn)血栓形成。,,動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂，暴露LPA，活化血小板，促進(jìn)血栓形。,,動(dòng)脈粥樣硬化斑塊及纖維帽形成，LPA位于脂質(zhì)核心,,,動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂，暴露LPA，活化血小板，形成血栓,,1、溶血磷脂酸

19、促進(jìn)內(nèi)皮素(ET-1)的釋放，因此溶血磷脂酸在腦血管痙攣中也起重要作用。2、LPA與紅細(xì)胞作用，啟動(dòng)紅細(xì)胞的血栓前狀態(tài)。 3、LPA啟動(dòng)并活化纖維蛋白原與血小板受體的連接，有利于血栓形成。 4、LPA啟動(dòng)溶血磷脂酰膽堿乙酰化。5、LPA比血栓素A2（TXA2）對(duì)于血小板聚集的作用更強(qiáng)。,LPA促動(dòng)脈硬化和血栓形成的其它機(jī)制,,W. Siess / Biochimica et Biophysica Acta 1582 (2002)

20、 204–215,血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移,血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加,輕氧化低密度脂蛋白,,,動(dòng)脈粥樣硬化冠心病、卒中,,,輕氧化低密度脂蛋白促動(dòng)脈硬化效應(yīng)實(shí)際上是LPA的作用,,,脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2 Lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2,,脂蛋白,脂蛋白是血脂在血液中存在、轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝的形式；分為乳糜微粒、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白； 脂質(zhì)不溶于水，必須與

21、蛋白質(zhì)結(jié)合以脂蛋白形式存在，才能在血液循環(huán)中運(yùn)轉(zhuǎn)，因此，高脂血癥常為高脂蛋白血癥 (hyperlipoproteinemia) 的反映。高密度脂蛋白降低也是一種血脂代謝紊亂，因而稱之為脂蛋白異常癥更為全面、準(zhǔn)確地反映血脂代謝紊亂狀態(tài)。成熟脂蛋白呈球形，中間是甘油三酯和膽固醇酯，表面組分為載脂蛋白、游離膽固醇和磷脂。脂蛋白的氧化修飾是動(dòng)脈粥樣硬化的基礎(chǔ)。,,脂蛋白（LDL）結(jié)構(gòu)模式圖,,（磷脂酰膽堿）,,磷脂酶(phospholip

22、ase,PL)概述,根據(jù)磷脂酶對(duì)磷脂水解部位的不同可將磷脂酶分為4類(lèi)：磷脂酶A1（PLA1）磷脂酶A2（PLA2）：選擇性作用于甘油磷脂sn-2位的酯鍵（-COO-基團(tuán)，由羧基“-COOH”與羥基“-OH”脫水而成） 。磷脂酶C（PLC）磷脂酶D（PLD）；溶血磷脂酶D（Lyso-PLD, ATX）,,甘油磷脂,磷脂是一類(lèi)含有磷酸的脂類(lèi)，機(jī)體中主要含有兩大類(lèi)磷脂，由甘油構(gòu)成的磷脂稱為甘油磷脂；由神經(jīng)鞘氨醇構(gòu)成的磷脂，稱為鞘磷脂。

23、其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是：具有由磷酸相連的取代基團(tuán)(含氨堿或醇類(lèi))構(gòu)成的親水頭和由脂肪酸鏈構(gòu)成的疏水頭。在生物膜中磷脂的親水頭位于膜表面，而疏水尾位于膜內(nèi)側(cè)。,,,,酯鍵,Sn-2,,PLA2,,取代基團(tuán),H,,PLA2,,溶血磷脂酰膽堿,,膽堿,,,PA與LPA,PLA2作用位點(diǎn)，加氫變成OH，溶血磷脂,,,甘油,甘油三酯,磷脂酰膽堿（卵磷脂）,甘油骨架,,,,,脂肪酸,脂肪酸,,Sn-1,Sn-3,Sn-2,,,,,Lyso-PLD, AT

24、X,甘油磷脂,N末端,,,,Sn-1,磷脂酶A2超家族,磷脂酶A2（Phospholipase A2， PLA2），即磷脂-2-?；饷?，是專(zhuān)一催化甘油磷脂Sn-2位酯鍵，酶解產(chǎn)物為溶血磷脂和脂肪酸。廣泛參與人體細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)的傳遞及炎癥、多種相關(guān)性疾病病理反應(yīng)。其生理功能包括細(xì)胞信號(hào)傳遞及產(chǎn)生20多種類(lèi)脂質(zhì)介質(zhì)，改造磷脂結(jié)構(gòu)，促進(jìn)機(jī)體壞死組織自動(dòng)消失，肺泡表面活性物質(zhì)代謝等。,,磷脂酶A2超家族,所有的PLA2都有一個(gè)最基本的作用，

25、就是水解甘油磷脂Sn-2位脂肪酸，釋放兩種代謝物：自由脂肪酸（非酯化脂肪酸，如花生四烯酸）和溶血磷脂?；ㄉ南┧?，經(jīng)環(huán)氧物酶和脂氧化物酶代謝，主要形成前列腺素(PGE)、白三烯和脂毒素類(lèi)，直接或間接作用于靶細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)。因此，長(zhǎng)期以來(lái)都認(rèn)為，PLA2在炎癥中扮演的角色是破壞細(xì)胞膜穩(wěn)定性，起損傷作用。1995年以后發(fā)現(xiàn)PLA2具有抗菌活性。PLA2除了上述作用外，蛇毒中的PLA2常具有其他一些藥理活性，如肌肉毒性、突觸后神經(jīng)毒性、心

26、臟毒性、溶血毒性等。,,Phospholipase A2 structure/function,The superfamily includes 15 groups comprising four main types including；四種主要的磷脂酶A2 Secreted sPLA2：分泌型磷脂酶A2 ，與二十烷類(lèi)產(chǎn)生、炎癥及抗菌作用有關(guān)。Cytosolic cPLA2 ：胞漿型磷脂酶A2，花生四烯酸(AA)代謝具有優(yōu)先選擇性

27、。 Calcium-independent iPLA2：鈣離子不依賴磷脂酶A2，作為看家酶參與膜的重建 Platelet activating factor (PAF) acetyl hydrolase/oxidized lipid lipoprotein associated （Lp-PLA2）：血小板活化因子乙酰水解酶（氧化脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2），以PAF和氧化磷脂為底物。,,,,,,,磷脂酶A2, PLA2,PLA2 hy

28、drolyzes the fatty acid from the sn-2 position of membrane phospholipids. In vivo, the sn-2 position of phospholipids frequently contains polyunsaturated fatty acids, and when released, these can be metabolized to form v

29、arious eicosanoids（二十烷類(lèi)） and related bioactive lipid mediators. PLA2不僅在維持膜磷脂的穩(wěn)定性方面非常重要，而且在調(diào)節(jié)花生四烯酸（AA）的釋放與代謝方面起關(guān)鍵作用。它在調(diào)節(jié)促炎性脂類(lèi)調(diào)質(zhì)如前列腺素（PGs）、白三烯（LT）的產(chǎn)生，以及脂質(zhì)代謝與信號(hào)傳導(dǎo)方面同樣具有重要作用。,,磷脂酰膽堿,羥基廿碳四烯酸,脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2,脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2（Lipoprote

30、in-associated phospholipase A2，Lp-PLA2）又稱血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH），以PAF和氧化磷脂為底物。是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種與動(dòng)脈粥樣硬化和缺血性心腦血管病相關(guān)的磷脂酶A2超家族（新的炎性標(biāo)記物）。Lp-PLA2主要由炎癥細(xì)胞（單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T細(xì)胞、活化的血小板等）產(chǎn)生，其催化產(chǎn)生的促炎產(chǎn)物溶血磷脂酰膽堿 （LysoPC）和氧化非酯化脂肪酸（OxFA），具有促進(jìn)動(dòng)

31、脈粥樣硬化作用。,,脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2,Lp-PLA2屬于擴(kuò)大的磷脂酶A2 超家族，其編碼基因（PLA2G7）于1995年首次被克隆，它具有12個(gè)外顯子，定位于6號(hào)染色體p21.2~12。Lp-PLA2為50kDa具有441個(gè)氨基酸殘基的絲氨酸脂酶，其生物學(xué)活性不依賴于Ca2+，最初由于發(fā)現(xiàn)其可以降解血小板活化因子（PAF），因此它又被稱為血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。血漿中，約80%的Lp-PLA2與低密度脂蛋白（

32、LDL）結(jié)合。其余20% 的Lp-PLA2與高密度脂蛋白（HDL）或極低密度脂蛋白（VLDL）結(jié)合。聯(lián)合應(yīng)用原位雜交和免疫組化技術(shù)發(fā)現(xiàn)兔及人類(lèi)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的巨噬細(xì)胞可表達(dá)高水平的Lp-PLA2 mRNA和蛋白。,,,,LPA,LysoPLD,,磷脂酰膽堿,氧化修飾磷脂酰膽堿,溶血磷脂酰膽堿,氧化脂肪酸oxFA,,,,,,,,,內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生的活性氧或自由基團(tuán)使低密度脂蛋白氧化修飾而形成氧化修飾的低密度脂蛋白,

33、LDL在氧化過(guò)程中，與LDL結(jié)合的Lp-PLA2作用于LDL表面的甘油磷脂，產(chǎn)生具有促炎作用的LysoPC和OxFA,,,,甘油磷脂,LysoPC,OxFA,Lp-PLA2,,,,,,,,,,,,,Lp-PLA2促動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制,1、促進(jìn)LDL的氧化修飾；2、作用于oxLDL，產(chǎn)生溶血磷脂酰膽堿（LysoPC）和自由脂肪酸（OxFA） ；后者活化炎癥細(xì)胞，產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子；3、促進(jìn)吞噬細(xì)胞捕獲oxLDL，形成泡沫細(xì)胞；4、Lp

34、-PLA2在斑塊壞死核心區(qū)顯著表達(dá)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞凋亡，加快易損斑塊破裂；5、 LysoPC抑制凋亡細(xì)胞清除，因而加劇血管壁的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)壞死核心的擴(kuò)大；,,,,,,脂蛋白 相關(guān)性 磷脂酶A2,“脂蛋白”：主要指LDL。 “相關(guān)性”：（1）約80%的Lp-PLA2與LDL結(jié)合；（2） LDL在氧化過(guò)程中，與LDL結(jié)合的Lp-PLA2作用于LDL表面的甘油磷脂，產(chǎn)生具有促炎作用的產(chǎn)物L(fēng)ysoPC和OxFA；“磷脂酶A2”

35、：作用于LDL表面的甘油磷脂sn-2位的酯鍵，產(chǎn)生溶血磷脂酰膽堿和自由脂肪酸。溶血磷脂酰膽堿和自由脂肪酸：具有促炎作用，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化，加快易損斑塊破裂；對(duì)冠心病、卒中有預(yù)警作用。,,,,,,,LPA,,LysoPLD,,,,,內(nèi)含磷脂酰膽堿,,溶血磷脂酰膽堿,,,Lp-PLA2,Lp-PLA2：心血管病預(yù)警分子,Lp-PLA2的兩個(gè)主要來(lái)源，一是循環(huán)中與LDL結(jié)合的Lp-PLA2經(jīng)動(dòng)脈內(nèi)膜直接進(jìn)入內(nèi)膜下動(dòng)脈粥樣硬化病灶中，二是動(dòng)脈

36、粥樣硬化斑塊中的炎性細(xì)胞的新合成。測(cè)定血漿中Lp-PLA2的含量或活性可作為獨(dú)立危險(xiǎn)因子，預(yù)警發(fā)生冠心病及缺血性卒中的危險(xiǎn)性（FDA批準(zhǔn)）。Lp-PLA2抑制劑（他汀類(lèi)、Darapladib）對(duì)降低高危心腦血管病患者的發(fā)病率具有重要意義。,,LP-PLA2聯(lián)合LPA檢測(cè)的預(yù)警價(jià)值,臨床流行病學(xué)研究及Meta分析結(jié)果表明, LP-PLA2 是評(píng)價(jià)冠心病和卒中風(fēng)險(xiǎn)的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子。局限性： LP-PLA2既具有抗炎活性，又具有促

37、炎活性；其確切作用機(jī)制有爭(zhēng)議。其主要代謝產(chǎn)物 LysoPC是溶血磷脂酸的主要底物來(lái)源。LP-PLA2是LPA的上游催化酶之一。 LP-PLA2聯(lián)合LPA檢測(cè)在動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病、卒中的預(yù)警價(jià)值正在研究中。,,Lp-PLA2 is a marker of inflammation,Circulating Lp-PLA2 is a marker of inflammation that plays a critical role in

38、 atherogenesis; its inhibition may have antiatherogenic effects. Studies from the West of Scotland Coronary Prevention Study (WOSCOPS), Monitoring Trends and Determinants in Cardiovascular Diseases (MONICA) and Rotterdam

39、 cohorts have shown that Lp-PLA2 is an independent predictor of coronary heart disease (CHD), and the association is not attenuated upon multivariate analysis with traditional risk factors and other inflammatory markers.

40、 Studies in subjects with coronary artery disease (CAD) have also shown associations between Lp-PLA2 and cardiovascular risk. At least two recent studies have shown that Lp-PLA2 is a risk predictor for stroke. Overall,

41、epidemiological studies suggest that measurement of Lp-PLA2 in plasma may be a useful in identifying individuals at high risk for cardiovascular events.,Vasc Health Risk Manag. 2006 June; 2(2): 153–156.,,,Lp-PLA2：含量與活性,L

42、p-PLA2 mass含量is measured by an enzyme immunoassay in human plasma (the PLAC? test) (Dada et al 2002). In addition, Lp-PLA2 activity活性can also be measured in human plasma (Tselepis et al 2002).,,LP-PLA2 是評(píng)價(jià)冠心病和卒中風(fēng)險(xiǎn)的一個(gè)獨(dú)立的危

43、險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子,大量研究表明, LP-PLA2 是評(píng)價(jià)冠心病和卒中風(fēng)險(xiǎn)的一個(gè)獨(dú)立的危險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子。Ballantyne等通過(guò)對(duì)Lp-PLA2和C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein, CRP）水平與傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素進(jìn)行評(píng)價(jià)以探討其與缺血性卒中的關(guān)系。應(yīng)用比例風(fēng)險(xiǎn)模型，對(duì)社區(qū)動(dòng)脈硬化風(fēng)險(xiǎn)（ARIC）研究中包括12 762例健康受試者的前瞻性病例隊(duì)列進(jìn)行分析，觀察6年。結(jié)果顯示，在校正性別、種族和年齡后，194例卒中患者的平均LP-PLA

44、2水平和CRP水平顯著高于812例非卒中病例，而低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平卻無(wú)顯著差異。在校正所有傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素以及CRP、體重指數(shù)及甘油三酯后，升高的Lp-PLA2水平與卒中呈獨(dú)立相關(guān)性，經(jīng)6~8年的隨訪發(fā)現(xiàn)，Lp-PLA2水平升高者，卒中的發(fā)生率約是非升高者的2倍。Lp-PLA2水平和CRP水平均升高者，較兩者均正常者卒中的發(fā)生率增加10倍。,,部分研究結(jié)果,,,,WOSCOPS研究,在蘇格蘭西部冠心病預(yù)防研究（WOSCO

45、PS）中，采用病例對(duì)照研究方法，580例發(fā)生心臟缺血事件的患者與年齡、吸煙史匹配的1160例對(duì)照組進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨Lp-PLA2水平升高，冠狀動(dòng)脈缺血事件也隨之增加，與較低Lp-PLA2水平的患者相比，Lp-PLA2水平較高者發(fā)生冠心病的危險(xiǎn)增加2倍。多變量分析表明，Lp-PLA2不依賴于傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素和CRP、血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、纖維蛋白原等炎癥性標(biāo)記物，可作為預(yù)測(cè)冠心病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。,,MONICA研究,在德國(guó)南部開(kāi)展的MON

46、ICA研究進(jìn)一步證實(shí)了Lp-PLA2與CHD之間的聯(lián)系。1984~1998年14年間對(duì)934例年齡在45~64歲的健康人群進(jìn)行追蹤隨訪，期間有97人發(fā)生了冠脈缺血事件，發(fā)生冠脈缺血事件者其Lp-PLA2基線水平顯著高于未發(fā)生者（295±11µg/L比263±79µg/L，P=0.01）。Lp-PLA2每增加一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差（SD），則冠脈缺血事件增加37%。當(dāng)校正所有傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素和CRP后，Lp-PL

47、A2每增加一個(gè)SD，冠脈缺血事件增加23%。本研究還發(fā)現(xiàn)Lp-PLA2和CRP聯(lián)合檢測(cè)在預(yù)測(cè)CHD風(fēng)險(xiǎn)方面可作為互補(bǔ)共同提高風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的準(zhǔn)確性。,,Additive effect of CRP and Lp-PLA2 in coronary risk prediction: MONICA Augsburg Cohort Study 1984 to 1998.,Koenig W et al. Circulation 2004;110:190

48、3-1908,,WHS研究,在婦女健康研究（WHS）中發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)Lp-PLA2水平較高者，以后發(fā)生心血管事件（包括74例心肌梗死和49例卒中）的比例較基礎(chǔ)Lp-PLA2水平較低者顯著升高（1.20 mg/L比1.05mg/L，P=0.016）。在鹿特丹研究（The Rotterdam Study）中，Oei等對(duì)7983名年齡在55歲以上的居民進(jìn)行了病例隊(duì)列研究，包括308例CHD患者及1822例隨機(jī)對(duì)照標(biāo)本，結(jié)果CHD組患者Lp-PL

49、A2水平顯著高于對(duì)照組（調(diào)整后HR：1.96，95% CI：1.25~3.09; P=0.02），提示Lp-PLA2水平與CHD之間具有顯著的相關(guān)性。本研究還發(fā)現(xiàn)，Lp-PLA2水平增高與缺血性卒中密切相關(guān)，且不依賴于其它心血管病危險(xiǎn)因素，本研究發(fā)現(xiàn)Lp-PLA2水平最高的四分之一者較最低四分之一者缺血性卒中的危險(xiǎn)增加77%。,,Lp-PLA2與冠心病,Caslake等研究148例男性患者，48例經(jīng)血管造影證實(shí)為冠狀動(dòng)脈?。–AD），

50、其中46例至少在1年內(nèi)患過(guò)心肌梗死，54例年齡匹配的正常者作為對(duì)照組，結(jié)果CAD組血漿Lp-PLA2水平顯著升高，多因素回歸分析表明CAD患者Lp-PLA2水平升高不依賴于LDL、吸煙、收縮壓等傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子。Khuseyenova等測(cè)定了經(jīng)血管造影證實(shí)的CAD患者血漿Lp-PLA2水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，CAD組Lp-PLA2水平顯著升高（296.1µg/L比266.0 µg/L, P<0.0001），

51、多變量logistic回歸分析比值比（OR）為1.61。Blankenberg等測(cè)定了496例CAD患者血漿Lp-PLA2水平，包括220例急性冠脈綜合征（ACS）和276例穩(wěn)定性心絞痛，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與477例對(duì)照組相比，ACS組患者血漿Lp-PLA2水平顯著高于對(duì)照組。,,,,Lp-PLA2含量與青年人冠狀動(dòng)脈鈣化有關(guān),The association between Lp-PLA2 (mass and activity), and co

52、ronary artery calcification (CAC) in young adults was examined in a nested case-control study using data from the Coronary Artery Risk Development in Young Adults (CARDIA) study (Iribarren et al 2005). Lp-PLA2 mass and a

53、ctivity were significantly higher in cases than in controls. The OR of calcified coronary plaque per 1 SD increment was 1.40 (1.17 to 1.67) and 1.39 (1.14 to 1.70) for Lp-PLA2 mass and activity, respectively; the relatio

54、nship was independent of LDL-cholesterol. After adjusting for multiple covariates, a statistically significant association remained for Lp-PLA2 mass (1.28; 95% CI, 1.03–1.60) but not for activity. Thus, Lp-PLA2 (measure

55、d as mass) appears to be involved in early CAC.Lp-PLA2含量與青年人冠狀動(dòng)脈鈣化有關(guān)。,,Lp-PLA2 作為卒中危險(xiǎn)的預(yù)測(cè)因子,Recently, Oei et al (2005) compared 110 ischemic stroke cases with a random sample of 1820 subjects in a case-cohort analysis in

56、 the Rotterdam study, and also reported a significant association between Lp-PLA2 activity and ischemic stroke. Compared with the first quartile of Lp-PLA2 activity, multivariate-adjusted HRs for ischemic stroke were 1.0

57、8 (95% CI, 0.55 to 2.11), 1.58 (95% CI, 0.82 to 3.04), and 1.97 (95% CI, 1.03 to 3.79) (p for trend=0.03). In a further analysis from the ARIC study, the relation between Lp-PLA2, CRP, traditional risk factor (RFs), and

58、stroke over 6 years was examined (Ballantyne et al 2005). Both Lp-PLA2 and CRP were associated with stroke after adjustment for age, sex, and race with a HR of 2.16 for the highest versus the lowest tertile of Lp-PLA2

59、and 2.64 for CRP.,,他汀類(lèi)降低血漿中Lp-PLA2,研究發(fā)現(xiàn)，他汀類(lèi)可顯著降低血漿Lp-PLA2水平。應(yīng)用阿妥伐他?。?0mg/d）治療30天，則Lp-PLA2降低20%，心血管事件復(fù)發(fā)率顯著降低。隨著Lp-PLA2抑制劑的開(kāi)發(fā)，該領(lǐng)域極有可能成為AS性心血管疾病治療的一個(gè)新方向。2006年，美國(guó)卒中協(xié)會(huì)發(fā)布的缺血性卒中一級(jí)預(yù)防指南中建議，凡是沒(méi)有發(fā)生過(guò)缺血性卒中的患者都應(yīng)進(jìn)行卒中風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。LPA、Lp-PLA2 及

60、其相關(guān)評(píng)估軟件系統(tǒng)在其中無(wú)疑扮演重要角色。,李振光. 脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2與缺血性心腦血管病. 國(guó)際腦血管病雜志，2007，15（2）：102. 李振光. 溶血磷脂酸及脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2與缺血性心腦血管病. 中國(guó)卒中雜志，2008，3：834.李振光，等主編. 溶血磷脂的基礎(chǔ)與臨床，吉林科學(xué)技術(shù)出版社，2009年第一版。,,,案例分析：認(rèn)為該低的反而較高,案例：健康體檢受試者，年齡35歲，血壓、血脂正常，無(wú)冠心病、糖尿病史，檢

61、測(cè)結(jié)果顯示A2超標(biāo)，如何解釋?zhuān)糠治黾敖獯穑簜鹘y(tǒng)風(fēng)險(xiǎn)因素如血壓、血脂不能直接反映血管AS嚴(yán)重程度，在評(píng)估心腦血管栓塞性事件風(fēng)險(xiǎn)方面有很大的局限性，超過(guò)7成的冠心病患者血脂處于低風(fēng)險(xiǎn)甚至正常水平，發(fā)生卒中與未發(fā)生卒中的患者膽固醇水平?jīng)]有明顯差異。而脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2是AS特異性炎癥標(biāo)志物，可以揭示傳統(tǒng)風(fēng)險(xiǎn)因子未能發(fā)現(xiàn)的潛在心腦血管風(fēng)險(xiǎn)。ARIC研究顯示，血脂正常，A2升高者，其心腦血管風(fēng)險(xiǎn)提高2倍。,合理解釋結(jié)果,通過(guò)檢測(cè)脂蛋白磷

62、脂酶A2可以明確病因是否由AS造成，幫助醫(yī)生制定更有針對(duì)性的治療方案。經(jīng)研究證實(shí)，他汀類(lèi)等降脂藥物及阿司匹林等抗凝藥物可以降低脂蛋白磷脂酶A2水平，從而降低AS嚴(yán)重程度。因此，冠心病或糖尿病患者服用上述藥物后，脂蛋白磷脂酶A2水平恢復(fù)正常水平，說(shuō)明AS已控制在較低水平，治療方案有效。,合理解釋結(jié)果,根據(jù)產(chǎn)品上市前臨床研究的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，國(guó)人的 Lp-PLA2 風(fēng)險(xiǎn)閾值為175ng/ml，因此建議將心腦血管病患者或高危人群的Lp-PLA2控

63、制在175ng/ml以下。更為系統(tǒng)的治療目標(biāo)有待進(jìn)一步的上市后臨床研究。,合理解釋結(jié)果,治療方案建議,通過(guò)對(duì)產(chǎn)品上市以來(lái)，全國(guó)上萬(wàn)例受試者的檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析后，得出以下結(jié)論及治療方案建議：150300： AS處于爆發(fā)期，心腦血管風(fēng)險(xiǎn)處于極高水平，建議立即進(jìn)行血管造影及相應(yīng)手術(shù)治療。,樣本采集要求及注意事項(xiàng),標(biāo)本的運(yùn)輸與儲(chǔ)存 ——2-8度，分離上清。 試劑盒保存