阿特拉津?qū)Ψ侵拮赴l(fā)育影響的分子毒理學(xué)研究.pdf

1、[研究目的]
　　 本文將非洲爪蟾染毒不同濃度的阿特拉津，在2個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣，分析和探討阿特拉津?qū)蓷惿婧桶l(fā)育的毒性。運(yùn)用全基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)篩選性腺組織的敏感基因和對(duì)性腺產(chǎn)生發(fā)育毒性可能存在的細(xì)胞信號(hào)通路;運(yùn)用Real time RT-PCR技術(shù)分析阿特拉津?qū)Ω闻K相關(guān)基因表達(dá)的影響，研究阿特拉津?qū)Ψ侵拮父闻K的毒性作用。運(yùn)用以上兩種方法初步探索阿特拉津?qū)Ψ侵拮赴l(fā)育毒性作用的機(jī)制。
　　 [研究方法]

2、>　　 本次實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組和4個(gè)阿特拉津染毒組，分別是0.1、1、10和100μg/L組，每組隨機(jī)挑選30只非洲爪蟾蝌蚪。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取非洲爪蟾的性腺和肝臟組織，進(jìn)行稱重和基本形態(tài)觀察，并迅速置于液氮中保存。運(yùn)用非洲爪蟾全基因組表達(dá)譜芯片和Real time RT-PCR技術(shù)，對(duì)性腺組織進(jìn)行敏感基因和細(xì)胞信號(hào)通路的篩選，對(duì)肝臟組織進(jìn)行相關(guān)基因表達(dá)的研究。
　　 [研究結(jié)果]
　　 1、阿特拉津?qū)Ψ侵拮敢话闵L(zhǎng)發(fā)育情況的

3、影響
　　 阿特拉津?qū)Ψ侵拮傅捏w長(zhǎng)、體重、性腺重沒(méi)有顯著影響(p＞0.05)，0.1、1、10μg/L組的肝臟重量顯著降低(p＜0.05);10、100μg/L染毒組肝臟系數(shù)有所升高(p＞0.05);0.1和100μg/L阿特拉津組的蝌蚪完成變態(tài)的時(shí)間較長(zhǎng)于其他組，但差異無(wú)顯著性(p＞0.05);變態(tài)完成后，性別比沒(méi)有發(fā)生顯著變化(p＞0.05);0.1、1、10和100μg/L劑量組均有雄性性腺出現(xiàn)不連續(xù)發(fā)育，存在不同程度的

4、斷裂。
　　 2、阿特拉津?qū)π坌苑侵拮感韵倜舾谢蚝图?xì)胞信號(hào)通路的篩選
　　 通過(guò)GO分析，在分子功能、生物過(guò)程和細(xì)胞組成三個(gè)部分獲得了差異基因聚集的多條功能條目。通過(guò)Pathway分析，我們得到了6條差異顯著的細(xì)胞信號(hào)通路，分別是精氨酸和脯氨酸能量代謝通路、細(xì)胞周期通路、剪接體通路、堿基切除修復(fù)通路、核黃素代謝通路和孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟通路。
　　 3、阿特拉津?qū)Ψ侵拮父闻K相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　

5、 阿特拉津使100μg/L組雄性非洲爪蟾的AR水平顯著增高(p＜0.05)，使100μg/L組非洲爪蟾HSP90表達(dá)水平顯著升高(p＜0.05)，而對(duì)VTG、ER、HSP70和GR的表達(dá)水平無(wú)顯著性影響(p＞0.05)。
　　 [研究結(jié)論]
　　 1、阿特拉津使0.1、1、10μg/L組非洲爪蟾的肝臟重量顯著降低，10、100μg/L染毒組肝臟系數(shù)有所升高，對(duì)其他一般生長(zhǎng)情況無(wú)顯著影響;阿特拉津在一定程度上抑制了非洲爪蟾

6、蝌蚪的變態(tài);性別比沒(méi)有明顯變化;各組均有發(fā)育不連續(xù)的雄性性腺，出現(xiàn)異常節(jié)段。
　　 2、阿特拉津?qū)π坌苑侵拮感韵佼a(chǎn)生發(fā)育毒性可能與6條細(xì)胞信號(hào)通路相關(guān)，分別是精氨酸和脯氨酸能量代謝通路、細(xì)胞周期通路、剪接體通路、堿基切除修復(fù)通路、核黃素代謝通路和孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟通路。GO分析后獲得差異功能聚集的多條功能條目。
　　 3、阿特拉津使100μg/L組雄性非洲爪蟾肝臟內(nèi)AR水平顯著增高，使100μg/L組非洲爪蟾HSP