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文檔簡介
1、目的:
尋找海洋柴油降解菌株,探討構建高效降解菌群,并行固化處理,為生物修復海水柴油污染提供依據(jù)。
方法:
1.獲取柴油污染較嚴重的港口海水為分離源,接種于含柴油的人工海水培養(yǎng)基中,經(jīng)過五個周期(每個周期為5d)的富集、培養(yǎng)后,進行分離純化,得到單個菌落,命名其為F9。采用形態(tài)學觀察、生理生化特征分析及16srDNA測序等方法對分離得到的菌株進行鑒定;
2.對F9菌株的降解性能進行
2、研究,紫外分光光度法測定不同溫度、pH、初始接種濃度、油濃度對其降解柴油的影響,并用氣相色譜-質(zhì)譜方法(GC-MS)分析其對柴油各組分的降解效能;
3.以從柴油污染海水中富集、篩選得到的4株柴油高效降解菌株為基礎進行組合優(yōu)化試驗,并對其降解性能進行研究,利用紫外分光光度法測定降解率,GC-MS方法分析菌群對柴油組分的降解;
4.以海藻酸鈉-殼聚糖-小米為復合載體固定化混合菌群,紫外分光光度法測定其對柴油的降解
3、率,GC-MS方法分析菌群對柴油組分的降解。
結果:
1.F9菌株初步鑒定為不動桿菌屬(Acinetobacter),并最接近于威尼斯不動桿菌(Acinetobater venetianus),二者同源性高達99.9%,菌株不產(chǎn)芽孢,嚴格需氧型,氧化酶陰性,過氧化氫酶陽性,不能利用D-葡萄糖、D-核糖、D-木糖和L-阿拉伯糖,只能在以檸檬酸鈉為碳源的培養(yǎng)基上生長,能夠利用硝酸鉀和硫酸銨作為氮源,不需要生長因子
4、,在37℃條件下生長,但不能在44℃下生長;
2.對F9菌株的柴油降解性能進行研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)9菌株在培養(yǎng)液人工海水培養(yǎng)基(MMC)為50mL,pH7.5,溫度為30℃,初始接種濃度為0.5%,柴油濃度為0.5%時對柴油的降解效果最佳,7d能達到90.24%,通過GC-MS分析觀察F9菌株對柴油的各組分均有一定的降解作用;
3.在實驗室條件下對4株柴油降解菌進行優(yōu)化組合,構建由S1、F9、Y9、W3組成的復合菌群
5、,且四株菌比例為SI∶F9∶Y9∶W3=1∶1∶2∶1時,該菌群在培養(yǎng)液條件為MMC為50mL、pH7.5、溫度30℃、初始接種濃度1%、柴油濃度為0.5%時,對柴油的降解效果最佳,2d能達到降解效率的71.25%;
4.采用海藻酸鈉-殼聚糖-小米復合載體固定化混合菌群,降解3d后對柴油的降解效率達到94.98%,7d時降解率為95.15%,復合載體固定混合菌群后,既能對柴油有吸附和分散作用,又可充分利用混合菌群對柴油進行
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