道地藥材短葶山麥冬、雷公藤基于RAPD種源鑒別研究.pdf

1、藥材的真?zhèn)舞b別和品質(zhì)評價是臨床應用、成藥制備、中藥科研不可缺少的前提條件。我國藥材品種繁多，由于地域的差異，同名異物、同物異名的混淆品種極多，療效也各不相同。 短葶山麥冬(Liriope muscari(Decne)Bailey)為百合科山麥冬屬植物，主要分布于廣西、福建泉州等地。具有養(yǎng)陰潤肺，益胃生津的功效，用于肺燥干咳，津傷口渴，腸燥便秘等。 雷公藤(Tripterygium Wilfordii Hook.f)是衛(wèi)矛

2、科(Celastraceae)雷公藤屬木質(zhì)藤本植物，是雷公藤(Tripterygium)屬植物中的一種，主要分布在我國長江流域以南山區(qū)和東北長白山區(qū)。又稱為斷腸草、山砒霜、南蛇藤，由于毒性大，民間也有用于殺蟲、毒鼠等。上世紀60年代開始雷公藤制劑用于治療炎癥、癌癥、慢性腎炎、麻風病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡以及用于其他一些皮膚病等疾病的治療。 本文對福建省內(nèi)的短葶山麥冬種群和南方7省市的雷公藤28個種源進行基于RAPD的鑒別研究取得的研究

3、成果如下： 1.利用CTAB法提取到了純度較高的山麥冬DNA，用改進了的CTAB法提取到了質(zhì)量較好的雷公藤DNA，并分別研究了它們各自的快速提取方法。 2.分別建立了RAPD分析的技術體系，從96個引物中分別篩選出15(短葶山麥冬)、14(雷公藤)多樣性、重復性好的引物，最后得到了多態(tài)性較好的PCR產(chǎn)物。 3.通過得到的PCR產(chǎn)物，由兩個聚類分析軟件(POPGEN32、SPSS13.0)得出以遺傳距離0.60為分

4、界點可以聚集出三大類，分別是川麥冬、湖北山麥冬和短葶山麥冬。泉州的短葶山麥冬聚集在一起，而仙游的栽植種和野生的種源有較大的遺傳距離，沒有明顯的聚類在一起。在兩個聚類圖上的結果非常相似，證明了RAPD在山麥冬種源鑒定上具有非常行之有效的結果。 4.短葶山麥冬之間的遺傳距離最大的為仙游栽植種與仙游野生種之間，為0.4532，所以我們對于品種的鑒定可以考慮以0.4532為短葶山麥冬品種鑒定的一個終極遺傳距離。 5.從RAPD中

5、15個引物所擴增的118(113個多態(tài)性位點)位點，這118位點完全可以將這14個山麥冬種質(zhì)資源區(qū)分開來。將這118位點依次排序，把擴增產(chǎn)物的有無分別記為“1”和“0”，建立起了14個山麥冬種質(zhì)資源的數(shù)字指紋碼。 6.從雷公藤的兩個聚類分析圖(POPGEN32、SPSS13.0)上我們得到，云南、貴州和廣西的種源很明顯的能夠完全聚集在一起。湖南的所有種群都聚集在一起，而江西比較分散，主要和福建、湖南兩省交叉較多，而浙江主要和福建

6、的種群聚集在一起。 7.雷公藤28個種源的遺傳距離在0.0466和0.5028之間，大部分種源之間的遺傳距離在0.3000與0.4500之間，遺傳距離在區(qū)間0.1000-0.2000的種源很少只占到5％以下，0.5以上的僅有一個，就是云南曲靖和湖南湘潭之間。 8.我們參考了雷公藤各省市內(nèi)的種源遺傳距離，認為進行相關的種源道地性鑒定的遺傳距離水平為0.2-0.3比較適合，詳細的具體數(shù)據(jù)，應該和當?shù)氐姆N群內(nèi)的遺傳多樣性有關。