短葶山麥冬離體培養(yǎng)及多糖動(dòng)態(tài)變化研究.pdf

1、麥冬是園林中常見的地被植物，也是重要的中草藥。本研究以短葶山麥冬Liriope muscari(Desne.) Bailey為試驗(yàn)材料，進(jìn)行短葶山麥冬快速繁殖、愈傷組織誘導(dǎo)與繼代保持、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)、愈傷組織多糖提取的方法及多糖的動(dòng)態(tài)變化研究，同時(shí)也進(jìn)行愈傷組織、組培苗和田間自然生長狀態(tài)下麥冬多糖含量比較。其主要研究結(jié)果如下： 1短葶山麥冬快速繁殖技術(shù)研究 短葶山麥冬莖尖分化培養(yǎng)基MS+BA2.0 mg/L+ NAA0.2

2、mg/L，莖尖分化率高，最高分化率達(dá)到90％。叢生芽增殖培養(yǎng)基選擇MS+BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L為佳，一定高濃度的BA對(duì)麥冬莖尖叢生芽分化起著促進(jìn)作用。添加了椰子汁的培養(yǎng)基效果明顯好于對(duì)照組和添加香蕉泥的培養(yǎng)基。不同蔗糖濃度對(duì)短葶山麥冬叢生芽增殖的差異不大，蔗糖濃度的選擇在20g/L時(shí)較佳。短葶山麥冬壯苗生根培養(yǎng)基選擇1/2MS+IBA0.5mg/L時(shí)最佳，生根系數(shù)達(dá)到6.87。泥炭土為最佳的移栽基質(zhì)，福州地區(qū)的移栽時(shí)間

3、宜選擇在4月份。 2短葶山麥冬莖尖愈傷組織的誘導(dǎo)及其植株再生 通過對(duì)不同的外植體(莖尖，塊根，葉片，果實(shí))進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)，莖尖愈傷組織的誘導(dǎo)率最高達(dá)到80％。短葶山麥冬莖尖愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基是MS+2，4-D2.0mg/L+BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L和MS+2，4-D1.5 mg/L+BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L，誘導(dǎo)率可以為87.5％。愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS+2，4-D0.5-1.0mg

4、/L時(shí)，其增殖系數(shù)為6.53。通過比較選擇蔗糖濃度在20g/L為佳，在生產(chǎn)成本考慮選擇以自來水為水質(zhì)進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)。光培養(yǎng)和暗培養(yǎng)對(duì)短葶山麥冬愈傷組織保持的差別不大，以暗培養(yǎng)為主。短葶山麥冬愈傷組織在培養(yǎng)過程中其愈傷組織生長趨勢呈“S”，在培養(yǎng)過程中，含水率變化總體呈下降趨勢，增殖系數(shù)呈上升趨勢。 愈傷組織轉(zhuǎn)化的的培養(yǎng)基為未添加生長調(diào)節(jié)劑的空白培養(yǎng)基，不同蔗糖濃度下均能出現(xiàn)愈傷組織誘導(dǎo)誘導(dǎo)成體胚，蔗糖濃度在30g/L時(shí)為佳。胚

5、性愈傷組織分化與再生植株上，選擇MS+ BA2.0mg/L+IBA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L的培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化率最高，達(dá)到92％。 3短葶山麥冬懸浮培養(yǎng)細(xì)胞系的建立與保持 短葶山麥冬莖尖誘導(dǎo)的愈傷組織為松散型顆粒狀，接種量為0.45g達(dá)到最大增長量的時(shí)間短，四種碳源(蔗糖、葡萄糖、甘露醇和山梨醇)對(duì)短葶山麥冬懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的影響差別不是很大，其中蔗糖的增殖率最高，達(dá)到252％，從成本上考慮，在以后的培養(yǎng)過程適合

6、添加蔗糖作為碳源。短葶山麥冬懸浮細(xì)胞系的生長動(dòng)態(tài)大致呈“S”形。短葶山麥冬懸浮細(xì)胞系培養(yǎng)選擇的時(shí)間為10d。 4短葶山麥冬愈傷組織的多糖提取工藝優(yōu)化研究及多糖動(dòng)態(tài)變化研究 短葶山麥冬愈傷組織于60℃烘干箱至恒重，加石油醚，在65℃水浴鍋中脫色30min，揮干溶劑，加12倍水提取2次，每次30min，加乙醇至濃度為90％。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=215.78x+0.7977，R2=0.9964。取短葶山麥冬粗多糖樣品溶液0.4m