富貴菜黃酮含量及離體培養(yǎng)的研究.pdf

1、富貴菜(Gynura divaricata DC.)為菊科三七草屬多年生草本植物，是一種很好的集營養(yǎng)、保健為一體的野生蔬菜。本文通過對(duì)富貴菜莖、葉中總黃酮的提取及含量測(cè)定，證實(shí)其嫩莖葉中含有豐富的黃酮，可作為一種天然的降糖藥源植物開發(fā)。目前，富貴菜的繁殖方式以短枝扦插為主，效率低，且經(jīng)常采收的植株不見開花，很少結(jié)籽。為解決該種種質(zhì)資源的保存與繁殖問題，富貴菜的離體培養(yǎng)及快繁體系的建立有著重要的意義。在此研究基礎(chǔ)之上，通過組織形態(tài)學(xué)觀察和

2、抗氧化酶活性變化的研究，進(jìn)一步了解其器官發(fā)生的過程和機(jī)理。主要研究結(jié)果如下： 1. 進(jìn)行了富貴菜莖、葉中黃酮含量差異的研究。利用分光光度方法，測(cè)定大田栽培及翁栽富貴菜莖、葉總黃酮的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：蘆丁在0.00～51.352 μg·mL<'-1>(r=0.9994)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；平均回收率為98.36％，RSD=1.20％(n=5)。大田栽培的富貴菜黃酮含量整體高于盆栽的；同等栽培條件下，葉的高于莖的；對(duì)于不同發(fā)育時(shí)期的葉

3、：幼葉的最高，為3.338％；其次為成熟葉的，為1.813％；老葉的為1.338％。最佳食用部位為幼葉。 2. 建立了富貴菜離體培養(yǎng)體系。首先對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，獲得最佳的基本培養(yǎng)基、外植體類型、接種方式及光照強(qiáng)度等：再以幼葉為誘導(dǎo)致密愈傷組織的外植體，利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)最佳因素水平組合進(jìn)行重復(fù)比較試驗(yàn)，以建立富貴菜微繁體系。最適致密愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：改良：MS+6-BA 2.0 mg·mL<'-1>+NAA0.2 mg·m

4、L<'-1>+KT 0.4 mg·mL<'-1>+蔗糖3％；最適誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基：改良MS+6-BA 3.0mg·mL<'-1>+NAA 0.1 mg·mL<'-1>+蔗糖3.0％；最適生根培養(yǎng)基：1/2改良MS+NAA 0.3mg·mL<'-1>+蔗糖3％。經(jīng)該途徑誘導(dǎo)得到的植株，經(jīng)煉苗后移栽成活率≥93％。 通過對(duì)離體培養(yǎng)的富貴菜的腋芽增殖，直接扦插生根，建立快速繁殖體系。最適增殖培養(yǎng)基：6.BA 1.O mg·mL<'-1>

5、+NAA 0.1 mg·mL<'-1>+蔗糖3％20 d增殖系數(shù)達(dá)20.77，生根率≥90％。 3. 進(jìn)行了富貴菜器官發(fā)生的研究。以葉片為外植體，誘導(dǎo)過程中定期取樣進(jìn)行石蠟制片，觀察不定芽分化過程中細(xì)胞組織學(xué)變化。結(jié)果表明：脫分化始于葉緣周圍細(xì)胞；形態(tài)發(fā)生的主要方式是由愈傷組織分化出不定芽，培養(yǎng)15 d愈傷組織塊中出現(xiàn)了分生組織和維管組織結(jié)節(jié)；20 d～25 d，愈傷組織表層和近表層細(xì)胞分化出芽原基，但與維管組織結(jié)節(jié)無直接聯(lián)系；

6、30 d左右即可形成不定芽。對(duì)富貴菜不定根的發(fā)育過程進(jìn)行解剖學(xué)觀察，結(jié)果表明：再生植株莖內(nèi)無潛伏根原基；不定根由誘生根原基發(fā)育形成，誘生根起源于束間形成層，約12 d后，不定根原基發(fā)育為幼小不定根并伸出周皮之外。 從幼葉愈傷組織的誘導(dǎo)到不定芽的分化可劃分為6個(gè)時(shí)期，發(fā)現(xiàn)抗氧化酶SOD、CAT、POD活性隨器官發(fā)生發(fā)育時(shí)期不同呈現(xiàn)有規(guī)律的變化：SOD、POD的活性從愈傷組織發(fā)生到出現(xiàn)芽點(diǎn)前呈上升趨勢(shì)，至分化不定芽時(shí)下降；CAT的活