雷公藤的譜效關(guān)系研究.pdf

1、雷公藤的藥理作用廣泛，其中抗炎和免疫抑制作用尤其突出，臨床多用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫疾病如腎病綜合征等的治療。但其不良反應(yīng)不容忽視，雷公藤的不良反應(yīng)涉及多器官、多系統(tǒng)且多數(shù)患者不能耐受。其不良反應(yīng)發(fā)生的主要原因有雷公藤化學(xué)成分復(fù)雜且其藥效、毒性物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確，缺乏科學(xué)、有效的質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制方法，導(dǎo)致不同廠家生產(chǎn)的雷公藤制劑療效及毒副作用差異大，臨床上缺乏使用指南等。因此，如何快速識(shí)別雷公藤中的藥效成分和毒性成分，建立科學(xué)、有效的質(zhì)

2、量評(píng)價(jià)和控制方法，提高雷公藤制劑質(zhì)量是促進(jìn)雷公藤在臨床安全使用的前提。雖然目前許多學(xué)者通過(guò)改良炮制方法、研究中藥配伍和新劑型等以期得到雷公藤低毒高效制劑，但仍無(wú)法根本解決其毒性過(guò)大的問(wèn)題。本課題以闡明雷公藤藥效成分及毒性成分物質(zhì)基礎(chǔ)為出發(fā)點(diǎn)，通過(guò)體外藥效和毒性研究，評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地雷公藤的藥效和毒性差異，并建立不同產(chǎn)地雷公藤的高效液相指紋圖譜，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法建立不同產(chǎn)地雷公藤成分與藥效、毒性之間的關(guān)系，識(shí)別指紋圖譜中的主要藥效成分峰和毒

3、性成分峰，從而為雷公藤制劑質(zhì)量控制指標(biāo)選擇、質(zhì)量控制方法的建立以及高效低毒制劑的研究提供指導(dǎo)和參考，以期解決雷公藤因其毒性限制而難以在臨床廣泛應(yīng)用的問(wèn)題。
　　本課題選取了產(chǎn)自福建、湖南、云南、廣東、廣西、安徽、江蘇、湖北八個(gè)代表性產(chǎn)地的雷公藤的帶皮根，提取純化后采用高效液相色譜分析法建立指紋圖譜，依指紋圖譜及藥效、毒性特性將其分為兩大組，福建、湖南、云南為A組，該組峰號(hào)在前面綴以a，廣東、廣西、安徽、江蘇、湖北為B組，該組峰號(hào)在

4、前面綴以b。分別在組內(nèi)選取共有峰，合并A、B組間相同峰后共得到39個(gè)色譜峰。以不同產(chǎn)地雷公藤對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠單核巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6的半數(shù)抑制濃度IC50為抗炎藥效指標(biāo)，利用偏最小二乘法建立譜效關(guān)系。結(jié)果以TNF-α為指標(biāo)時(shí)篩選出主要藥效峰為第a4、a5、a6、a7、a13、a14、a18、a20、a23、a24、a27、b2、b8、b9、b11、b17、b18號(hào)峰;以IL-6為指標(biāo)時(shí)，篩選

5、出主要藥效峰為第a1、a3、a9、a12、a16、a17、a18、a21、a22、a24、a26、a28、a29、a31、b2、b9、b11號(hào)峰。
　　以不同產(chǎn)地雷公藤對(duì)脂多糖(LPS)和植物凝集素(PHA)共同誘導(dǎo)的人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)分泌IFN-γ和IL-2的半數(shù)抑制濃度IC50為免疫抑制藥效指標(biāo)，利用偏最小二乘法建立譜效關(guān)系。結(jié)果以IFN-γ為指標(biāo)時(shí)篩選出主要藥效峰為第a2、a17、a18、a20、a23、a24、

6、a27、a30、a31、b24號(hào)峰;以IL-2為指標(biāo)時(shí)，篩選出主要藥效峰為第a4、a5、a6、a7、a8、a10、a11、a13、a14、a15、a25、b11號(hào)峰。
　　以不同產(chǎn)地雷公藤對(duì)大鼠肝細(xì)胞BRL-3A、小鼠腎小球系膜細(xì)胞GNM-SV40、大鼠心肌細(xì)胞H9C2的半數(shù)抑制濃度IC50為雷公藤的肝、腎、心臟體外細(xì)胞毒性指標(biāo)，利用偏最小二乘法建立譜效關(guān)系。由結(jié)果可知主要腎毒性峰為第a1、a3、a12、a16、a17、a18、a

7、19、a22、a24、a25、a26、a28、a29、a31、b24號(hào)峰;主要心臟毒性峰為第a2、a3、a9、a16、a17、a18、a21、a24、a26、a29、a30、a31、b14號(hào)峰;主要肝毒性峰為第a1、a3、a12、a16、a17、a18、a19、a22、a24、a25、a26、a28、a29、a31、b24號(hào)峰。
　　比對(duì)A、B組共有峰的保留時(shí)間，同峰合并，得八個(gè)產(chǎn)地的有效有毒峰:a1、a2、a3、a9、a12、a

8、14、a16、a17、a18、a20、a21、a22、a24、a25、a26、a28、a29、a30、a31、b8、b9、b24號(hào)峰;有效無(wú)毒峰:a4、a5、a6、a7、a8、a10、a11、a13、a15、a23、a27、b2、b11、b17、b18號(hào)峰;無(wú)效有毒峰:a19、b14。
　　得到譜效、譜毒結(jié)合分析結(jié)果后，可以根據(jù)具體的藥效目標(biāo)對(duì)藥效峰和毒性峰進(jìn)行篩選和取舍，找到適宜目標(biāo)藥效的主要有效有毒峰、主要有效無(wú)毒峰、主要無(wú)效

9、有毒峰，如在設(shè)計(jì)低毒高效部位制劑時(shí)，可以考慮剔除或控制主要有效有毒峰對(duì)應(yīng)成分的含量，剔除無(wú)效有毒峰對(duì)應(yīng)成分，保留有效無(wú)毒峰對(duì)應(yīng)成分。本課題組后續(xù)將根據(jù)本研究結(jié)果對(duì)雷公藤提取后純化并進(jìn)行分段，并利用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)主要有效有毒峰、有效無(wú)毒峰、無(wú)效有毒峰進(jìn)行分析，以明確其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。從而指導(dǎo)更為安全的雷公藤低毒高效制劑的研發(fā)以及雷公藤制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量控制方法的提高，最終擴(kuò)大雷公藤制劑的臨床應(yīng)用并降低臨床應(yīng)用中的不良反應(yīng)，也為類似雷公藤